DB15-T 3451-2024 油莎豆根際土壤中假單胞菌分離鑒定技術(shù)規(guī)程_第1頁
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文檔簡介

15I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1油莎豆根際土壤中假單胞菌分離鑒定技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了油莎豆根際土壤中假單胞菌的菌株分離、菌本文件適用于油莎豆根際土壤中假單胞菌的分離鑒定，也可適用于其它植物根際土壤中假單胞菌GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和GB8538食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)飲用天然礦泉SN/T4624.17入境環(huán)保用微生物菌劑檢測方法第17部分：惡3.1甲胺、12g/L瓊脂的配方分別稱取試劑，加蒸餾水至1L，加入10ml甘油，攪拌均勻，調(diào)沸至完全溶解。將配制好的CN培養(yǎng)基121℃滅菌15min，待培養(yǎng)基冷卻至50℃~60℃后，依次加入終來博），配制成TSA培養(yǎng)基，傾注到滅菌平板上，培養(yǎng)基厚度至少高5mm，4℃避光保存，保持干燥，4.2根際土樣本制備2品放入含20ml無菌PBS緩沖液袋無菌離心管中，放置于搖床120rpm/min，室溫震蕩20min。用無菌鑷4.3菌株純化管吸取25ml該樣品溶液置于盛有225ml用無菌生理鹽水袋無菌三角瓶中，充分混勻，制成1:10樣品勻振蕩混勻，制成1:100樣品勻液，以此類推，制備1:1000和1:10000樣品勻液。選取1:1000或1:10000樣氣泡產(chǎn)生，若有氣泡產(chǎn)生則為陽性反應(yīng)，無氣泡為陰性反應(yīng)。該菌會產(chǎn)生氣泡，呈陽性反將待測菌株在TSB培養(yǎng)基（不加瓊脂的TSA瓊脂培養(yǎng)基）中30℃培養(yǎng)24h，將菌液收集于2mL滅菌DNA模板溶液。將DNA溶液加雙蒸水稀釋5～10倍，用紫外分光光度計(jì)測定260nm和280nm的吸光值，提取后的DNA模板溶液的A260/A280應(yīng)在1.8～2.0——rpoD(F:5'TGAAGGCGARATCGAAATCGCCAA3'R:5'YGCMGWCAGCTT3）：將目的條帶切下，用膠回收試劑盒收集PCR產(chǎn)物后，送到公司進(jìn)行測序反應(yīng)，將兩個(gè)基因的測序結(jié)6.2種水平結(jié)果判定在97%

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