薜荔果總黃酮提取工藝及抗氧化性研究

摘要以薜荔果為研究對象，采用超聲波輔助法提取薜荔果總黃酮，通過單因素實驗和正交試驗設(shè)計確定最佳提取工藝條件，并從對·OH、DPPH·及·NO的清除效果研究薜荔果總黃酮的抗氧化活性。結(jié)果表明：薜荔果總黃酮的最佳提取工藝條件為：60%乙醇、1∶25（g/mL）料液比、提取溫度60℃及提取時間120min，在此條件下薜荔果總黃酮得率為8.87%。薜荔果總黃酮對·OH、DPPH·及·NO的清除效果與濃度間存在量效關(guān)系，其中對DPPH·的清除效果較好，IC50值為0.0033mg/mL，表明薜荔果中的總黃酮具有一定的抗氧化活性。引言薜荔（Ficuspumila）是蕁麻目?？崎艑僦参?，在我國主要分布于中部和南部，野生資源豐富且極易種植，是具有開發(fā)價值的天然植物資源。薜荔的果實可加工食用，如制成涼粉，加工成果凍等。薜荔是食藥兩用植物，其藤和葉具有清熱消腫、活血止痛、祛風(fēng)利濕等功效。目前，關(guān)于薜荔有效成分的研究主要集中于黃酮和多糖的提取及多糖提取液的生物活性研究，如張朝輝等測定和對比了薜荔葉、殼和子中總黃酮的含量；用回流提取法測定了薜荔葉及花序托中的總黃酮含量；研究了薜荔籽果膠的提取工藝及抗氧化活性；多個課題組先后研究了薜荔果膠對大鼠腸內(nèi)環(huán)境的影響及作用機制；對薜荔果實中的多糖進(jìn)行提取，所得到的多糖提取液具有可調(diào)節(jié)血糖、免疫功能及改善腸道環(huán)境等藥理作用。但對薜荔果中的總黃酮提取工藝及抗氧化活性的研究鮮見報道。黃酮類化合物具有抑菌、抗腫瘤及抗氧化等良好的生物活性，普遍存在于植物體中，是天然的抗氧化劑。而不同植物或同一植物中不同部位所含黃酮的量及其抗氧化活性存在一定的差異。若能將薜荔果作為原料提取其中的黃酮類物質(zhì)并應(yīng)用于保健食品和藥品的開發(fā)，將提高薜荔果實的應(yīng)用價值。以薜荔果為原料，采用超聲波輔助法提取總黃酮，在單因素實驗的基礎(chǔ)上通過正交試驗設(shè)計優(yōu)化其提取工藝條件，并研究薜荔果總黃酮對·OH、DPPH·及·NO的清除作用，以期為薜荔植物的研究、開發(fā)及薜荔果實作為天然抗氧化劑、功能性食品的開發(fā)提供實驗數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。正文部分1

實驗部分1.1

主要儀器與試劑1.2

試驗方法1.2.1

薜荔果的預(yù)處理對薜荔果進(jìn)行如下預(yù)處理：薜荔果實洗凈，60℃烘箱中干燥，粉碎并過篩（60目），石油醚中脫脂及脫色，抽濾，60℃烘箱中干燥，薜荔果粉末避光保存?zhèn)溆谩?.2.2

薜荔果總黃酮的提取稱取1.0000g脫脂脫色的薜荔果粉末原料，加入定量乙醇溶液，于特定條件下提取，抽濾，所得濾液定容至100mL容量瓶中，即得薜荔果總黃酮提取液，待用。1.2.3

單因素實驗1.2.4

正交試驗設(shè)計以單因素實驗結(jié)果為依據(jù)，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取溫度及時間4個考察因素進(jìn)行L9(34)正交試驗，以薜荔果總黃酮得率為評價指標(biāo)，優(yōu)化薜荔果總黃酮提取條件，以確定其最佳提取工藝。1.2.5

薜荔果總黃酮得率的測定1.2.6

薜荔果總黃酮的抗氧化性測定1.3

數(shù)據(jù)處理所有實驗數(shù)據(jù)平行測定3次取均值，采用Origin8.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和圖片繪制。

2

結(jié)果和分析2.1

單因素實驗結(jié)果2.1.1

乙醇體積分?jǐn)?shù)對薜荔果總黃酮得率的影響如圖1所示，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)由50%逐漸增大至70%時，薜荔果實總黃酮的提取率隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大呈先緩慢升高后降低的趨勢，主要是因為溶劑的極性越來越接近黃酮類成分的極性，相似相溶則有利于黃酮類物質(zhì)的溶出，則其總黃酮得率會逐漸增大。2.1.2

料液比對薜荔果總黃酮得率的影響如圖2所示，薜荔果總黃酮得率隨著料液比濃度的增大呈先升高后降低的趨勢，在料液比為1∶20（g/mL）時對應(yīng)的總黃酮得率最大為7.70%，而當(dāng)料液比＞1∶20（g/mL）并逐漸增大，則總黃酮得率逐漸降低。2.1.3

提取溫度對薜荔果總黃酮得率的影響如圖3所示，提取溫度在40～60℃范圍內(nèi)時，薜荔果總黃酮得率隨著提取溫度的升高而增大，當(dāng)提取溫度為60℃時對應(yīng)總黃酮的得率最大8.39%，繼續(xù)升高溫度則總黃酮得率降低。2.1.4

提取時間對薜荔果總黃酮得率的影響如圖4所示，隨著提取時間的增大，薜荔果總黃酮的得率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，當(dāng)提取時間為120min時，對應(yīng)的總黃酮得率最大為8.65%。2.2

正交試驗結(jié)果以單因素實驗結(jié)果為基礎(chǔ)，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取溫度及時間為4個因素按表1設(shè)計并進(jìn)行正交試驗，試驗結(jié)果列于表2。2.3

薜荔果總黃酮提取液的抗氧化能力2.3.1

清除·OH的能力如圖5所示，薜荔果總黃酮對·OH的清除效果隨著濃度增大則清除效果越顯著。在最大濃度0.5mg/mL下，薜荔果總黃酮對·OH的清除率為36.71%，表明薜荔果總黃酮對·OH的清除能力較弱，弱于同濃度下的Vc清除能力。2.3.2

清除DPPH·的能力如圖6所示，隨著薜荔果總黃酮濃度的不斷增大，其對DPPH·的清除能力也逐漸增強。2.3.3

清除·NO的能力如圖7所示，薜荔果總黃酮質(zhì)量濃度在0.05～0.25mg/mL范圍時，其對·NO的清除效果與濃度為正相關(guān)的量效關(guān)系。3

結(jié)論結(jié)論經(jīng)正交試驗設(shè)計優(yōu)化得到的薜荔果總黃酮超聲波輔助法最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、料液比1∶25（g/mL）、提取溫度及時間為60℃和120min，對應(yīng)總黃酮提取率為8.87%。薜荔果總黃酮對·OH、DPPH·及·NO的清除能力隨著總黃酮提取液質(zhì)量濃度的增大而增強，且對DPPH·的清除效果較好。當(dāng)薜荔果總黃酮濃度為0.005mg/mL時，對DPPH·的清除率達(dá)75.63%。