DB37T4206-2020漁用獸藥-中草藥中氯霉素的測定-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS?FORMTEXT65.020.30FORMTEXTCCSB42FORMTEXT?????DBFORMTEXT37DBFORMTEXT37/T4206—2020FORMTEXT?????FORMTEXT漁用獸藥中草藥中氯霉素的測定

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法FORMTEXTDeterminationofchloramphenicolinfisheryChineseTraditionalandHerbalDrugsbyliquidchromatographytandemmassspectrometry2020-11-10發(fā)布2020-12-10實施FORMTEXT山東省市場監(jiān)督管理局???發(fā)布DB37/T4206—2020前??言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由山東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并組織實施。本文件有山東省農(nóng)業(yè)標準化委員會漁業(yè)標準化分技術(shù)委員會歸口（魯TC/SC03）。本文件起草單位：山東省淡水漁業(yè)研究院、青島市華測檢測技術(shù)有限公司。本文件主要起草人：吳蒙蒙、姚建華、朱永安、武風娟、孫棟、趙華鋒、張嬋、郭芳芳、劉紅彩。漁用獸藥中草藥中氯霉素的測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了漁用獸藥中草藥中氯霉素測定的原理、試劑和耗料、儀器設(shè)備、樣品、測定步驟、測量結(jié)果、檢測方法靈敏度、回收率、精密度、線性范圍。本文件適用于漁用獸藥中草藥中氯霉素的測定方法。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中：注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理樣品在堿性條件下經(jīng)過乙酸乙酯振蕩提取，提取液濃縮后乙腈復溶，經(jīng)C18固相萃取小柱、液液分配凈化后，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標法定量。試劑和耗材水：GB/T6682，一級。乙酸乙酯：色譜純。乙腈：色譜純。甲醇：色譜純。氨水：分析純。50?%乙腈水溶液：將50?mL乙腈與50?mL水混合均勻。氯化鈉：分析純。氯霉素標準品：氯霉素CAS56-75-7，純度不低于99.2?%，于-18?℃儲存，有效期3年。標準溶液的配置。氯霉素標準儲備液：稱取氯霉素對照品10?mg(精確至0.01?mg)于10?mL棕色容量瓶中，用甲醇(4.4)溶解定容，該溶液濃度為1?mg/mL。-18?℃避光保存，有效期為6個月。氯霉素標準工作液Ⅰ：準確移取氯霉素標準儲備液0.1?mL于10?mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容，該溶液濃度為10?μg/mL。-18?℃避光保存，有效期為3個月。氯霉素標準工作液Ⅱ：準確移取氯霉素標準工作液Ⅰ0.1?mL于10?mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容。該溶液濃度為0.1?μg/mL。-18?℃避光保存，有效期為3個月。氯霉素氘代內(nèi)標：氯霉素D-5，純度不低于99?%，于-18?℃儲存，有效期3年。氘代氯霉素儲備液：10?mg(精確至0.01?mg)于10?mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，該溶液濃度為1?mg/mL。-18?℃避光保存，有效期為6個月。氘代氯霉素標準工作液Ⅰ：準確移取氘代氯霉素標準儲備液0.1?mL于10?mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容，該溶液濃度為10?μg/mL。-18?℃避光保存，有效期為3個月。氘代氯霉素標準工作液Ⅱ：準確移取氯霉素標準工作液Ⅰ0.1?mL于10?mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容。該溶液濃度為0.1?μg/mL。-18?℃避光保存，有效期為3個月。實驗耗材C18固相萃取柱：1?000?mg/6?mL。微孔濾膜：0.22?μm，有機系。儀器設(shè)備液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。電子天平：感量0.000?1?g和0.01?mg。旋渦混合器。離心機：轉(zhuǎn)速不低于10?000?r/min。固相萃取裝置。超聲波震蕩器。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。樣品從原始樣品中取出部分有代表性樣品，經(jīng)高速組織搗碎機均勻搗碎或混勻，為保證樣品均一性，全部過0.45?mm篩，用四分法縮分出適量試樣，均分成兩份，裝入清潔容器內(nèi)，加封后作出標記，一份作為試樣，一份作為留樣。液體樣品混勻后取出部分作為試樣，其余樣品作為留樣。測定步驟提取稱取2?g（精確至0.001?g）樣品于50?mL離心管，加入氘代氯霉素標準工作液Ⅱ40?μL，加入8?mL水，混勻后靜置30?min，加入0.5?mL氨水，再加入30?mL乙酸乙酯，振蕩提取10?min，10000?r/min離心5?min，取上層乙酸乙酯于雞心瓶中，40?℃旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，加入2?mL乙腈渦旋混勻，取1?mL加入4?mL水混勻。凈化依次用6?mL乙腈和6?mL水活化C18固相萃取柱，加載上樣液并棄去，近自然滴干時，再加入15?mL乙腈水，收集洗脫液于50?mL離心管中，加入約0.5?g氯化鈉使上述溶液飽和，振蕩，4?500?r/min離心5?min，取上層乙腈層于40?℃氮吹濃縮至干。準確加入2?mL乙腈溶液定容，過0.22?μm濾膜。標準工作曲線的制備精確移取適量氯霉素標準工作液于10?mL棕色容量瓶中，各加入氘代氯霉素標準工作液Ⅱ0.1?mL，用乙腈水溶液稀釋成濃度分別為0.2?μg/L、0.5?μg/L、0.8?μg/L、1.0?μg/L、5.0?μg/L的標準溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配，供液相色譜-串級質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標法定量。儀器測定液相色譜條件色譜柱：BEHC18柱，長50?mm，內(nèi)徑2.1?mm，粒徑1.7?μm，或性能相當者；柱溫：40?℃；流速：0.3?mL/min；進樣量：3?μL；流動相：A：乙腈；B：水，梯度洗脫條件見表1。梯度洗脫程序表序號時間min流速mL/minA的比例%B的比例%10.000.3109021.500.395533.500.395543.510.3109055.000.31090質(zhì)譜條件離子化模式及掃描方式：電噴霧負離子掃描（ESI-）；檢測方式：多反應檢測（MRM）；毛細管電壓（Capillary）：2.0?Kv；脫溶劑溫度（DesolvationTemperature）：400?℃；脫溶劑氣流速（Desolvation）：1000?L/Hr；錐孔氣流速（Cone）：150?L/hr；霧化氣（Nebuliser）：7.0?Bar；定性離子對、定量離子對及電壓、碰撞能量見表2。質(zhì)譜參數(shù)名稱母離子Parentm/z子離子Daughterm/z錐孔電壓ConeV碰撞能量CollisionEnergyV氯霉素321.0152.12518321.0257.12512氯霉素-D5326.1157.12518定性測定在相同測定條件下，待測物在樣品中的保留時間與標準工作液中的保留時間相對偏差在±2.5?%之內(nèi)，并且色譜圖中定性離子對的相對豐度與濃度接近的標準工作液中相應定性離子對的相對豐度進行比較，若相對偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷為樣品中存在對應的待測物。定性確證時相對離子豐度的最大允許誤差相對離子豐度%＞50＞20～50＞10～20≤10允許的相對偏差%±20±25±30±50定量測定在儀器正常工作條件下，將標準工作溶液（從低濃度到高濃度）和試樣溶液上機測定，內(nèi)標法定量。氯霉素標準工作液特征離子的多反應監(jiān)測（MRM）色譜圖見附錄A?？瞻诇y試除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。平行測試按照上述前處理方式對同一樣品進行平行試驗測試。測量結(jié)果試樣中氯霉素的含量按公式（1）計算，數(shù)值以微克每千克（μg/kg）表示，計算結(jié)果需扣除空白值： (SEQ標準自動公式\*ARABIC1)式中：X?——樣品中氯霉素的含量（μg/kg）；c?——從內(nèi)標標準曲線查得的試樣溶液氯霉素的濃度，單位為微克每升（μg/L）；V?——試樣的定容體積，單位為毫升（mL）；n?——等分倍率；m?——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。測定結(jié)果用平行測定算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留2位有效數(shù)字。檢出限、回收率、精密度、線性范圍檢出限與定量限本方法檢出限為0.3?μg/kg，定量限為1?μg/kg。回收率本方法基質(zhì)加標樣品加