GBT 28630.1-2012 白斑綜合征(WSD)診斷規(guī)程 第1部分核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)法_第1頁(yè)
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第1部分：核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)法中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布I 本部分為GB/T28630的第1部分。Ⅱ1見(jiàn)GB/T28630.4—2012的2.1。4.4PCRDIGProbeSynthes24.231×緩沖液A見(jiàn)附錄A的規(guī)定。4.251×清洗筱I;見(jiàn)附錄A的規(guī)定。4.261×清洗液Ⅱ見(jiàn)附錄入的規(guī)定4.29溶有顯色A和顯色劑B的1×緩沖液B:見(jiàn)附錄入的規(guī)定4.34玻璃研零棒敢塑料研4.38一次性塑料手套35.9溫度計(jì)：量程0℃~100℃,精度士1℃。6.1.1樣品采集的要求見(jiàn)GBd)將兩張雜交膜分別置于兩個(gè)雜交袋中，加入溶有封閉劑的1×緩沖液A,封口，室溫放置e)剪開兩個(gè)雜交展一角分別加入1/50體積的100×堿性磷酸酶偶聯(lián)的DIG抗體(AP-抗蒸餾水中漂洗15min—30終正顯色。將膜置于濾紙上晾干。對(duì)光觀察，記錄結(jié)果5檸檬酸三鈉(2H?O)調(diào)節(jié)pH至7.0高壓蒸汽滅菌后箜溫貯存。0.5md/LyDTA更用時(shí)取水A.510×緩沖液A氯化鈉(NaCl)用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.56加雙蒸水定容至高壓蒸汽滅菌，4℃貯存。A.61×緩沖液A10×緩沖液A水A.710×緩沖液B氯化鈉(NaCl)加水溶解至用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至9.5六水合氯化鎂(MgClz·6H?O)加雙蒸水定容至A.81×緩沖液B10×緩沖液B100mLA.91×清洗液I加水定容至混勻，室溫貯存，若出現(xiàn)白色渾濁沉淀加熱直至溶解后使用。A.101×清洗液Ⅱ加水定容至混勻，室溫貯存，若出現(xiàn)白色渾濁沉淀加熱直至溶解后使用。A.11顯色劑A四氮唑藍(lán)(NBT)二甲基甲酰胺7水A.12顯色劑B立即使用8F301AAGATAACTGGACGCATTTGCTAGTTCTGGAGGGACGTCCTGGT361AGTAGGTTTTATCTTTTTCCTATTTAAGCR9(資料性附錄)白斑綜合征(WSD)核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)結(jié)果示意圖

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