GB∕T 39647-2020 實驗動物 生殖和發(fā)育健康質量控制

B44中華人民共和國國家標準實驗動物生殖和發(fā)育健康質量控制LQvv2020-12-14發(fā)布2021-07-01實施國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會ⅠGB／T39647—2020本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由全國實驗動物標準化技術委員會(SAC/TC281)提出并歸口。本標準起草單位：國家衛(wèi)生健康委科學技術研究所、中國食品藥品檢定研究院、北京大學腫瘤醫(yī)院、中國醫(yī)學科學院整形外科醫(yī)院、中南大學湘雅醫(yī)院、中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所、北京大學、山西醫(yī)科大學。1GB／T39647—2020實驗動物生殖和發(fā)育健康質量控制本標準規(guī)定了實驗動物生殖和發(fā)育健康質量控制的技術要求，包括生殖健康控制指標、發(fā)育健康控制指標、生殖和發(fā)育健康檢測及評價。本標準適用于生殖健康實驗動物的選育或動物實驗需要進行生殖健康及發(fā)育健康的質量控制。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T13086飼料中游離棉酚的測定方法GB14883.1食品安全國家標準食品中放射性物質檢驗總則GB14922.1實驗動物寄生蟲學等級及監(jiān)測GB14922.2實驗動物微生物學等級及監(jiān)測GB/T14924.1實驗動物配合飼料通用質量標準GB/T14924.2實驗動物配合飼料衛(wèi)生標準GB14924.3實驗動物配合飼料營養(yǎng)成分GB14925實驗動物環(huán)境及設施GB/T35892實驗動物福利倫理審查指南GB50447實驗動物設施建筑技術規(guī)范3術語與定義下列術語和定義適用于本文件。3.1生殖健康的實驗動物生殖系統(tǒng)無病理性異常的，適用于科學研究、教學、生產、檢定以及其他科學實驗的動物。3.2發(fā)育健康的實驗動物從受精卵到性成熟期間無發(fā)育病理性異常的，適用于科學研究、教學、生產、檢定以及其他科學實驗的動物。4生殖和發(fā)育健康實驗動物飼育要求應符合GB14925、GB50447和GB/T35892的要求。飼養(yǎng)籠具、玩具、墊料和飲水符合相關標準，無生殖毒性和發(fā)育毒性物質超標。2GB／T39647—2020實驗動物配合飼料的質量應符合GB/T14924.1的要求，衛(wèi)生應符合GB/T14924.2的要求，營養(yǎng)成分應符合GB14924.3的要求。飼料中無生殖發(fā)育毒性物質、致畸物質、內分泌干擾物質超標，實驗動物飼喂試驗結果應符合本標準要求。飼料無棉籽類原料，無棉酚，檢測方法按GB/T13086。飼料放射物質指標應符合GB14883.1的要求。4.3寄生蟲和微生物指標實驗動物寄生蟲學等級及監(jiān)測和微生物學等級及監(jiān)測，應符合GB14922.1和GB14922.2的要求。實驗動物無生殖系統(tǒng)感染及性傳播性疫病。5生殖健康要求5.1生殖健康的一般要求生殖健康的實驗動物整個生命周期的不同生理階段，從交配、受精卵、胚胎發(fā)育、新生仔、幼仔、性成熟期、生育期到老年的生殖衰退期，生殖系統(tǒng)無病理形態(tài)學和生殖功能性指標的異常改變。5.2病理形態(tài)學要求5.2.1雄性實驗動物生殖系統(tǒng)的各器官包括睪丸、附睪、精囊腺、前列腺和外生殖器，無先天性和后天性的形態(tài)學病理性異?；蛉比纭?.2.2雌性實驗動物生殖系統(tǒng)的各器官包括卵巢、輸卵管、子宮、陰道和外生殖器，無先天性和后天性的形態(tài)學病理性異常或缺如。5.3病理生理學要求雄性和雌性實驗動物生殖系統(tǒng)的各器官無先天性和后天性的生殖功能性指標的病理性改變，無性早熟和性早衰表現(xiàn)。6發(fā)育健康要求6.1發(fā)育健康的一般要求發(fā)育健康的實驗動物從受精卵到機體性成熟期的發(fā)育階段，實驗動物機體發(fā)育過程無形態(tài)學異常，無發(fā)育遲緩或發(fā)育性早熟，實驗動物個體體重增長速度符合其品種或品系的特點，與種群發(fā)育指標間無顯著異常。6.2病理形態(tài)學要求實驗動物機體發(fā)育階段，無先天性和后天性形態(tài)學病理異常。6.3病理生理學要求實驗動物機體發(fā)育階段，無先天性和后天性發(fā)育功能性指標的病理異常。7生殖和發(fā)育健康檢測和評價當實驗動物或動物實驗需要進行動物生殖健康和發(fā)育健康評價時，根據(jù)需要及時進行個體性或群3GB／T39647—2020體性的檢測和質量評價。7.2采樣過程質量控制表1群體性評價的抽樣數(shù)量<100100~500500>≥5≥10≥20注1：可根據(jù)實驗動物種類、群體的不同和抽樣目的的不同，確定抽樣數(shù)量。注2：嚙齒類實驗動物的遺傳表型分析，可根據(jù)需要至少抽取7對。7.2.1.2可根據(jù)實驗動物種類、群體的不同和檢測目的的不同，確定動物個體的采樣數(shù)量；嚙齒類實驗動物的遺傳表型分析，可根據(jù)需要至少抽取7對。7.2.1.3動物實驗時的必要檢測和評價：可按照試驗的需要，進行個體或全部動物個體的采樣。育健康檢測動物的日（月）齡應在其發(fā)育期至體成熟。7.2.2采集樣品的質量群體性采集樣品符合隨機性，在不同的實驗動物種群或不同環(huán)境的實驗動物群內隨機抽樣。采集樣品避免人為污染和采樣誤差7.2.3采集樣品的編號每一樣品應附有唯一的編號和標志，及寫明實驗動物的年齡或日齡、樣品的來源、品種品系、級別、數(shù)量、檢測項目、采樣時間和采集者姓名等必要信息。7.3.1生殖健康檢測及評價指標7.3.1.1哺乳類實驗動物生殖健康應根據(jù)檢測目的和評價的需求，從以下指標中選取：a)雌雄動物的發(fā)情和交配能力無異常；d)妊娠過程無異常，無意外流產；e)分娩過程無異常；f)仔代出生健康，無肉眼可見出生缺陷，新生仔死亡率無異常；g)產仔數(shù)及性別比例無異常；h)離乳率或幼子成活率無異常；i)無孕期死亡；j)無生殖系統(tǒng)感染；k)有性周期的物種，性周期規(guī)律；4GB／T39647—2020l)內外生殖器無可見的形態(tài)學異常，包括先天性和繼發(fā)性的異常；排卵無異常；正常形態(tài)o)性器官及功能的衰老無異常；p)無其他明顯的肉眼可見的生殖系統(tǒng)病理性異常。7.3.1.2卵生類實驗動物生育期內的繁殖力檢測及評價指標，見附錄A。7.3.2發(fā)育健康檢測及評價指標7.3.2.1哺乳類實驗動物發(fā)育健康應根據(jù)檢測目的和評價的需求，從以下指標中選取：a)受精卵著床或胚胎發(fā)育正常；d)無出生體重異常；f)生長發(fā)育體重曲線符合其品種、種系特點；g)無生殖系統(tǒng)形態(tài)學發(fā)育明顯異常；h)性成熟期及體成熟期無異常；i)性別特征無異常；j)交配功能無異常、性活動無異常；k)無其他明顯的肉眼可見的發(fā)育期病理性異常。7.3.2.2卵生類實驗動物發(fā)育期內的健康檢測及評價，詳細見附錄B。7.4檢測方法及質量判定7.4.1實驗動物生殖健康質量控制的檢測方法及健康質量判定如下：a)卵生類實驗動物繁殖力檢測方法及生殖健康質量判定，按A.6規(guī)定；b)生殖健康病理形態(tài)學和生理學檢測方法及健康質量判定，按附錄C規(guī)定；c)生殖過程健康指標檢測及健康質量判定，按附錄D中D.2和D.3規(guī)定；d)實驗動物繁殖力檢測方法及健康質量判定，按附錄E規(guī)定。7.4.2實驗動物發(fā)育健康質量控制的檢測方法及健康質量判定如下：a)發(fā)育過程體重增長曲線檢測方法及健康質量判定，按B.4規(guī)定；b)發(fā)育健康病理形態(tài)學及生理學檢測方法及質量判定，按附錄C規(guī)定；c)發(fā)育過程健康指標檢測及健康質量判定，按D.1和D.3規(guī)定。5GB／T39647—2020附錄A（規(guī)范性附錄）卵生類實驗動物繁殖力檢測方法及生殖健康質量判定A.1原理概述通過測定實驗動物的產卵率和孵化率指標，判定其繁殖力及生殖健康質量。A.2試驗條件卵生類實驗動物繁殖力測定的設施和環(huán)境條件指標應符合4.1的要求。A.3樣品實驗動物樣品的抽樣要求按照7.2規(guī)定進行。A.4測定產卵率方法A.4.1個體實驗動物產卵率，測定一只動物特定時間內如一年、一月、一周、一天的產卵率?？蓽y定一只實驗雞、實驗斑馬魚、劍尾魚性成熟期開產后，一月、一年內共產了多少卵，得出這只雞的年產卵量，與該品種、品系正常動物進行比對，判定其繁殖力。A.4.2群體實驗動物產卵率，測定一群動物特定時間內如一年、一月、一周、一天的產卵率。可測定一群實驗雞、實驗斑馬魚、劍尾魚性成熟期開產后，一月、一年內共產了多少卵，得出這群實驗動物的年產卵量，與該品種、品系正常動物進行比對，判定其繁殖力。A.5測定孵化率方法孵化率受交配的雌雄性實驗動物生殖健康水平、飼養(yǎng)水平和卵孵化環(huán)境條件的影響外，還受精、卵的質量及成熟程度的影響（在人工授精的條件下上述指標需記錄在試驗測試的條件控制指標中?？偡趸蕼y定。一定時間內一只動物或一群動物所有產出卵的成功孵化的比率。凈孵化率等于成功孵化的卵數(shù)除以孵化的總卵數(shù)（無精蛋）。測試結果數(shù)值經與該品種、品系正常動物進行統(tǒng)計學比對，判定其繁殖力。A.6繁殖力判定方法和指標通過測定總孵化率，評價卵生類實驗動物的繁殖力，在動物生育期的產卵季的判定指標：及以上的，判為高繁殖力實驗動物、生殖健康高質量合格實驗動物；及以下的，判為低繁殖力實驗動物、生殖健康質量不合格實驗動物；介于與b)兩者之間的，判為繁殖力正常實驗動物、生殖健康質量合格實驗動物；d)雌雄動物連續(xù)合籠自然交配后的24個產卵周期（實驗來航雞為1天，實驗斑馬魚為1周）以上，動物總孵化率仍為零的，判為不孕不育癥實驗動物、生殖健康質量不合格實驗動物。6GB／T39647—2020附錄B（規(guī)范性附錄）發(fā)育過程體重增長曲線檢測方法及健康質量判定B.1.1檢測儀器為經過校驗的稱重天平。根據(jù)不同種類、品系實驗動物出生體重和體成熟體重，選擇天平合適的量程和分度值d。選擇量程為被測動物體成熟體重的1.5倍~2倍，d值應精確到動物出生體重的1/10。嚙齒類實驗動物量程為500g~1000g,d=0.1g;實驗斑馬魚和劍尾魚量程為20g~B.1.2稱量容器設備：陸生實驗動物包括禽類的稱重容器為稱重籠具；實驗魚等水生實驗動物的稱重容器和設備為平皿或相應大小的器皿和不銹鋼或化纖的小型撈魚網(wǎng)。檢測實驗動物取樣的日齡范圍為出生或孵化出殼的當日(0日齡）至動物個體體成熟日齡。也可根據(jù)特殊檢測需要，確定動物的檢測日齡區(qū)間。B.3試驗步驟B.3.1稱重前，標清實驗動物個體號碼。陸生動物直接放入稱重籠具內，魚等水生動物先放入盛有水的器皿中，再稱重、記錄?？傊亓浚Q重籠具或盛水器皿的重量＝動物的體重。稱重時，避免動物受到驚擾，待其安靜時稱重。B.3.2測量頻度，每周測量一次，或按照特殊測試需要調整頻度為1日或1月一次。嚙齒類實驗動物體重精確度0.1g,斑馬魚和劍尾魚等小型魚類精確到0.01g,其他大中型實驗動物體重測量精確到B.3.3動態(tài)稱量和記錄動物體重變化，同時按照第6章和7.3.2中的指標檢查記錄動物的發(fā)育過程指標情況，包括有無發(fā)育異常情況，包括動物畸形、器官缺如、隱睪。B.3.4動物發(fā)育過程體重增長曲線的制作，以周齡（或日齡、月齡）為橫坐標，以被測動物體重值為縱坐標，從動物的0日齡起至體成熟日齡，畫出生長曲線。也可根據(jù)測量的特殊需要，繪制特定日齡區(qū)間的生長發(fā)育曲線。B.4發(fā)育健康檢測方法和質量判定B.4.1經過生物學統(tǒng)計，當被測實驗動物符合該種類或品種品系正常生長曲線值時，判為發(fā)育健康合格實驗動物，否則判為發(fā)育健康不合格實驗動物。B.4.2當體重增速顯著超出正常值時，判為發(fā)育過度動物。B.4.3當體重增速顯著小于正常值時，判為發(fā)育遲緩動物。7GB／T39647—2020附錄C（規(guī)范性附錄）生殖和發(fā)育健康的病理形態(tài)學及生理學檢測方法及質量判定通過形態(tài)學和生理學觀察和記錄，采用常規(guī)的病理形態(tài)學和生殖生理學及常規(guī)的發(fā)育指標測定方法進行檢測和健康質量評價。C.2試驗條件實驗動物生殖和發(fā)育健康的病理形態(tài)學及生理學檢測的設施和環(huán)境條件指標應符合4.1的要求。C.3樣品實驗動物樣品的抽樣要求按照7.2規(guī)定進行。C.4試驗步驟生殖健康質量可通過實驗動物的繁殖試驗檢測方法或品種、品系培育過程中個體動物和種群繁殖數(shù)據(jù)的觀測記錄方法，測定實驗動物的生殖健康指標是否符合其品種或品系特點，與其動物種群間有無統(tǒng)計學顯著性差異。發(fā)育健康質量可通過實驗動物個體或群體的發(fā)育過程的試驗觀測方法，測定該實驗動物與其品種或品系種群間有無統(tǒng)計學顯著性差異；用性成熟指標的觀測方法，測定不同品種、品系動物的性成熟開始和動物性功能衰退時的月齡，是否符合該品種或品系特點，與其動物種群間有無統(tǒng)計學顯著性差異，判斷其有無發(fā)育指標顯著性遲緩、早熟或早衰。根據(jù)不同試驗的具體需求，選擇7.3.1或7.3.2中的指標進行形態(tài)學檢測，并注明檢測的具體項目、檢測方法和實測指標的數(shù)值。精液質量檢測：精子存活率檢測采用伊紅或者伊紅-苯胺黑染色法；精子形態(tài)檢測采用改良巴氏染色方法。C.5質量判定試驗不合格的，判為生殖健康不合格的實驗動物。上不合格的，判為發(fā)育健康不合格的實驗動物。8GB／T39647—2020附錄D（規(guī)范性附錄）發(fā)育和生殖過程健康指標檢測及質量判定D.1發(fā)育過程健康指標檢測及質量評價實驗大鼠和小鼠發(fā)育過程健康指標檢測及質量評價如下：內，無胎兒死亡。胎兒可自尋母乳頭，吸吮初乳，可見胃部乳白充盈。小鼠為1.2胎兒尾部特征：紅潤粗而短。尾部長度范圍大鼠長小鼠長。日齡~3日齡，皮膚出現(xiàn)著色，耳殼開始張開。日齡~5日齡，臍帶疤痕脫落，能翻身，被毛長出。日齡~7日齡，耳聳立，能自如爬行。日齡~9日齡，全身開始覆蓋被毛。日齡~11日齡，全身被毛完整，耳殼變薄。日齡~14日齡，開眼，對環(huán)境聲光變化有敏感的反應。日齡~18日齡，能跳躍，可自行采食，夜間活動開始活躍。日齡~50日齡，雌性小鼠陰門開啟，開始性成熟，可接受交配及懷孕；45日齡~60日齡，雄性小鼠睪丸下降至陰囊，開始性成熟，出現(xiàn)追逐雌鼠、可完成交配。日齡~60日齡，雌性大鼠陰門開啟，可接受交配及懷孕，開始性成熟；50日齡~70日齡，雄性大鼠睪丸下降至陰囊，產生精子，開始性成熟，出現(xiàn)追逐雌鼠、可完成交配。日齡~80日齡，小鼠完成身體發(fā)育成熟過程，達到體成熟。雌雄動物個體體重差別加大，個雄鼠20雌雄性別特征明顯。d,雄鼠可常年發(fā)情。日齡~90日齡，大鼠完成身體發(fā)育成熟過程，達到體成熟。雌雄動物個體體重差別加大并雄鼠300雌雄性別特征明顯。雌雄鼠可常年發(fā)情。D.2生殖過程健康指標檢測及質量評價實驗大鼠和小鼠生殖過程健康指標檢測及質量評價如下：從性成熟至360日齡~400日齡的生育期內，應符合7.3.1要求。400日齡后生殖功能開始生理性衰退，終止發(fā)情。從性成熟至450日齡~550日齡的生育期內，應符合7.3.1要求。550日齡后生殖功能開始生理性衰退，終止發(fā)情。D.3質量判定實驗大鼠和小鼠發(fā)育和生殖過程質量判定方法如下：a)質量判定發(fā)育過程符合D.1健康指標的，判定為發(fā)育健康的實驗動物。不符合的，判定為發(fā)育9GB／T39647—2020健康不合格的實驗動物。雖然達到D.1健康指標，但遲于相對應的日齡規(guī)定范圍的，判定為發(fā)育遲緩實驗動物。早于相對日齡范圍的，判為發(fā)育早熟實驗動物。生殖過程符合D.2健康指標的，判定為生殖健康的實驗動物。不符合的，判定為生殖健康不合格的實驗動物。早于D.2所述生殖功能衰退時間范圍的，判為生殖早衰實驗動物。GB／T39647—2020附錄E（規(guī)范性附錄）實驗動物繁殖力檢測方法及質量判定采用雌雄實驗動物合籠交配繁殖的方法，測定動物的生育期內繁殖相關的指標，判定動物的實際繁殖能力和生殖健康質量。E.2試驗條件實驗動物繁殖試驗測定的設施和環(huán)境條件指標應符合4.1的要求。實驗動物樣品的抽樣要求，按照7.2規(guī)定進行。E.4具有生殖周期的嚙齒類等實驗動物繁殖力檢測方法及健康質量判定E.4.1雌雄動物合籠自然交配（或人工授精）后的