原發(fā)性支氣管肺癌5 -1課件

二、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體原發(fā)性支氣管肺癌5-1細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合

受精作用人工條件下，如何促成動(dòng)物體細(xì)胞的融合？原發(fā)性支氣管肺癌5-1（一）動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合誘導(dǎo)劑：滅活的病毒、（其它物理化學(xué)手段同植物體細(xì)胞雜交）

滅活的病毒有絲分裂應(yīng)用：主要用于制備單克隆抗體原發(fā)性支氣管肺癌5-1滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。原發(fā)性支氣管肺癌5-1主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較原發(fā)性支氣管肺癌5-1

如果患者想知道自己是否得了乙型肝炎，一般是先檢查血液里是否有病毒的蛋白質(zhì)，也就是病毒的抗原等原發(fā)性支氣管肺癌5-1

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1ABC血清中的抗體有時(shí)患者體內(nèi)無乙肝病毒，但是用血清抗體進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的免疫反應(yīng)（即假陽性）。如何得到單一的抗體A或B？原發(fā)性支氣管肺癌5-1人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是什么？原發(fā)性支氣管肺癌5-1細(xì)胞融合、細(xì)胞重組、雜交瘤技術(shù)細(xì)胞融合將兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞（雜交細(xì)胞）。細(xì)胞重組把不同細(xì)胞的部件重新組裝，包括核移植、葉綠體移植、核糖體重建及線粒體裝配等。雜交瘤技術(shù)通過細(xì)胞融合產(chǎn)生特異雜交瘤細(xì)胞，用于生產(chǎn)單克隆抗體。原發(fā)性支氣管肺癌5-1單克隆抗體制備的原理及流程原發(fā)性支氣管肺癌5-1（二）單克隆抗體1）注射特定抗原4）篩選雜交瘤細(xì)胞3）雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)1制備過程：5）細(xì)胞培養(yǎng)（克隆）6）提取單克隆抗體2單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高①②③④⑤2）效應(yīng)B細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞→雜交瘤細(xì)胞⑥原發(fā)性支氣管肺癌5-11）作為體外診斷試劑3應(yīng)用原發(fā)性支氣管肺癌5-1結(jié)合藥物的單克隆抗體2）運(yùn)載藥物如制備生物導(dǎo)彈原發(fā)性支氣管肺癌5-1鼠源性的嵌合的用于治療是很受限制的。原因是：人源性的對(duì)鼠源化抗體進(jìn)行改造-------蛋白質(zhì)工程直接生產(chǎn)人源化抗體-------基因工程原發(fā)性支氣管肺癌5-1原發(fā)性支氣管肺癌5-1

MonoclonalAntibodiesK?hler和Milstein75年建立的技術(shù)，通過雜交瘤技術(shù)獲得的針對(duì)單一抗原決定簇的高特異性抗體。原發(fā)性支氣管肺癌5-11。細(xì)胞融合（1）動(dòng)物與抗原免疫：加強(qiáng)免疫（2）骨髓瘤細(xì)胞：體外無限繁殖并不分泌抗體；HGPRT基因缺失，經(jīng)8-氮鳥嘌呤培養(yǎng)基篩選；對(duì)數(shù)期（3）免疫B細(xì)胞懸液制備：擠壓脾臟（4）飼養(yǎng)細(xì)胞：細(xì)胞生長需要一定密度；融合細(xì)胞大量死亡需要清除；加入同種活細(xì)胞（飼養(yǎng)細(xì)胞）——小鼠腹腔細(xì)胞（巨噬細(xì)胞；分泌促細(xì)胞生長因子和“清道夫”）；脾臟細(xì)胞和成纖維細(xì)胞（5）細(xì)胞融合：早期用仙臺(tái)病毒，現(xiàn)在用PEG，使細(xì)胞膜上脂質(zhì)結(jié)構(gòu)重新排列；瘤細(xì)胞：B細(xì)胞=1：5；加瘤細(xì)胞和B細(xì)胞對(duì)照（6）基礎(chǔ)培養(yǎng)系統(tǒng)：胎牛血清；無牛抗體；加抗生素原發(fā)性支氣管肺癌5-12。選擇性培養(yǎng)（1）HAT培養(yǎng)液：細(xì)胞合成DNA有兩條途徑：一為主要途徑，利用糖和氨基酸合成核苷酸，氨基碟呤可阻斷；二為補(bǔ)救途徑，通過磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶（HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶（TK）利用次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷合成核苷酸。所以骨髓瘤細(xì)胞缺乏HGPRT和TK，死亡；B細(xì)胞具有HGPRT，但在體外不能長期培養(yǎng)，自然死亡；只有雜交瘤細(xì)胞從B細(xì)胞獲得HGPRT或TK基因在HAT培養(yǎng)基上生長繁殖。（2）陽性克隆篩選：用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢驗(yàn)特異性抗體（3）克隆化培養(yǎng)：1個(gè)細(xì)胞/孔3。McAb擴(kuò)大生產(chǎn)：（1）腹腔積液型（2）細(xì)胞生物反應(yīng)器4。McAb鑒定與純化（1）單克隆抗體的鑒定（2）純化：辛酸或硫酸銨鹽析；二抗采用蛋白A或蛋白G層析原發(fā)性支氣管肺癌5-1Monoclonalantibodies:均一；純度、效價(jià)高；特異性強(qiáng)原發(fā)性支氣管肺癌5-1原發(fā)性支氣管肺癌5-1

細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能在體外無限增殖；骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，可以在體外無限增殖。將這兩種細(xì)胞在試管中混合，可以獲得兩兩融合的細(xì)胞。如何從融合的細(xì)胞中分離出雜交瘤細(xì)胞？HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞原發(fā)性支氣管肺癌5-1

將雜交瘤細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)。測(cè)定時(shí)，加入相應(yīng)的抗原等物質(zhì)，檢測(cè)各孔的上清液中細(xì)胞分泌的抗體，產(chǎn)生有色反應(yīng)的為陽性。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)篩選特定的雜交瘤細(xì)胞

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1原發(fā)性支氣管肺癌5-1

將雜交瘤細(xì)胞（細(xì)胞表面攜帶抗體）固定于微孔板上。測(cè)定時(shí)，加入抗原、酶標(biāo)抗體，清洗游離的成分之后，加入酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生有色反應(yīng)即為陽性。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)篩選特定的雜交瘤細(xì)胞反應(yīng)底物

酶標(biāo)抗體某種抗原

表面抗體

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1原發(fā)性支氣管肺癌5-1有限稀釋法

分離單一的雜交瘤細(xì)胞原發(fā)