皮膚癬菌病的鏡檢診斷新方法

1/1皮膚癬菌病的鏡檢診斷新方法第一部分檢材采集及制片 2第二部分直接鏡檢方法 3第三部分熒光顯微鏡鏡檢 6第四部分鏡檢指標(biāo)觀察 9第五部分革蘭染色鏡檢 12第六部分培養(yǎng)基培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn) 15第七部分真菌鏡檢診斷要點(diǎn) 16第八部分皮膚癬菌鏡檢意義 20

第一部分檢材采集及制片關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)標(biāo)本采集

1.部位選擇：選擇皮疹邊緣處有鱗屑和水皰的部位，因?yàn)樵搮^(qū)域通常含有大量的真菌孢子。

2.無(wú)菌操作：使用無(wú)菌棉簽或刮刀輕輕刮取標(biāo)本，避免污染。

3.標(biāo)本量：采集足夠的標(biāo)本，以確保顯微鏡檢查有足夠的材料。

標(biāo)本制片

1.直接涂片：將標(biāo)本直接涂抹到載玻片上，并用蓋玻片覆蓋。

2.氫氧化鉀(KOH)溶液澄清：用10%~20%的KOH溶液浸泡標(biāo)本15~30分鐘，以溶解角蛋白，使真菌結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)。

3.染色：使用帕斯染色或蘇木素-伊紅染色，以突出真菌結(jié)構(gòu)的顏色并增強(qiáng)其在顯微鏡下的對(duì)比度。檢材采集及制片

準(zhǔn)確的鏡檢診斷依賴于適宜的檢材采集和制備技術(shù)。對(duì)于皮膚癬菌病，檢材采集的目標(biāo)是獲得含菌量高的樣本，并避免污染。

檢材采集

*皮損刮取物：使用無(wú)菌刮片或刀片輕輕刮取病變部位的鱗屑或皮屑。盡量深入到病變區(qū)域，避免混入正常的表皮細(xì)胞。

*頭發(fā)或指甲：剪取受影響的頭發(fā)或指甲，長(zhǎng)度約為5-10mm。

*分泌物：對(duì)于濕疹樣皮膚癬菌病，可采集膿性或鱗屑樣的分泌物。

*培養(yǎng)基：為了提高檢出率，可以將檢材接種到富含營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基中（例如沙氏培養(yǎng)基或真菌瓊脂培養(yǎng)基），并進(jìn)行培養(yǎng)2-4周。培養(yǎng)后的菌落可用于鏡檢和鑒定。

制片

*直接鏡檢：將檢材置于載玻片上，加入氫氧化鉀(KOH)溶液（濃度為10-20%）并在加熱狀態(tài)下溶解角質(zhì)組織。透清后，在顯微鏡下觀察檢材。

*光學(xué)增白劑染色：這是一種熒光染色技術(shù)，使用卡拉明紅或CalcofluorWhite等光學(xué)增白劑。它可以增強(qiáng)真菌細(xì)胞壁的發(fā)光，使檢材在紫外光下更易于觀察。

*PAS染色：PAS染色是一種組織化學(xué)染色技術(shù)，使用過(guò)碘酸-席夫試劑染色真菌細(xì)胞壁上的多糖。它可以產(chǎn)生清晰的真菌結(jié)構(gòu)圖像，包括分隔菌絲、孢子等。

鏡檢觀察

鏡檢時(shí)，觀察以下特征：

*菌絲：分隔的細(xì)長(zhǎng)絲狀結(jié)構(gòu)，寬度通常在2-10μm之間。

*孢子：真菌無(wú)性繁殖產(chǎn)生的單細(xì)胞或多細(xì)胞結(jié)構(gòu)，形狀和大小可根據(jù)真菌種類而異。

*孢子窩：真菌產(chǎn)生大量孢子的特殊結(jié)構(gòu)，形狀和排列方式可用于輔助診斷。

通過(guò)觀察這些特征，可以初步診斷皮膚癬菌病。然而，對(duì)于某些難以鑒別的真菌，可能需要進(jìn)行額外的分子鑒定或培養(yǎng)來(lái)確認(rèn)診斷。第二部分直接鏡檢方法關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)直接鏡檢方法

1.通過(guò)直接觀察樣本中皮屑或鱗屑中的真菌元素來(lái)診斷皮膚癬菌病。

2.具有簡(jiǎn)單、快捷、成本低廉的優(yōu)點(diǎn)。

3.可使用10%氫氧化鉀(KOH)溶液或真菌染色劑進(jìn)行制片。

KOH直接鏡檢

1.KOH溶液可以溶解角質(zhì)細(xì)胞，使真菌元素清晰可見(jiàn)。

2.可觀察到真菌的菌絲體和孢子，有助于快速區(qū)分真菌感染和非真菌性疾病。

3.需注意假陽(yáng)性結(jié)果，如存在酵母菌或棒狀真菌等非皮膚癬菌真菌。

真菌染色法

1.使用甲基藍(lán)、帕斯染色等方法對(duì)真菌元素進(jìn)行染色。

2.提高了真菌元素的對(duì)比度，便于觀察和識(shí)別。

3.適用于KOH直接鏡檢難以明確診斷或需要進(jìn)一步鑒別真菌種類的情況。

熒光檢測(cè)

1.采用熒光顯微鏡觀察經(jīng)過(guò)熒光染料染色的真菌元素。

2.提高了真菌元素的檢測(cè)靈敏度，可發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)鏡檢難以觀察的早期或淺層感染。

3.適用于疑似皮膚癬菌病但直接鏡檢陰性的病例。

廣場(chǎng)染色法

1.一種改良的KOH直接鏡檢方法，添加了丙烯酸和甲苯藍(lán)。

2.提高了真菌元素的顯著性和易于觀察性。

3.適用于懷疑皮膚癬菌病但常規(guī)KOH直接鏡檢結(jié)果不確定的情況。

衍射相襯顯微鏡

1.一種特殊類型的顯微鏡，利用光的衍射和相襯原理觀察樣本。

2.可提供真菌元素的立體三維圖像，提高觀察的清晰度和準(zhǔn)確性。

3.適用于需要精細(xì)鑒別真菌種類或評(píng)估真菌侵襲深度的病例。直接鏡檢方法

直接鏡檢方法是皮膚癬菌病診斷中最常用的方法，具有簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)等優(yōu)點(diǎn)。

標(biāo)本采集

1.皮膚病變區(qū):用無(wú)菌棉棒或刮匙輕輕刮取病變部位的鱗屑，收集于干凈的載玻片上。

2.毛發(fā)病變區(qū):用無(wú)菌鑷子拔取受感染的毛發(fā)，收集于載玻片上。

3.指甲病變區(qū):用指甲剪剪取少量的病甲，收集于載玻片上。

標(biāo)本制備

1.KOH法：將10%的氫氧化鉀（KOH）溶液滴加到標(biāo)本上，靜置10-15分鐘。KOH可以溶解角質(zhì)細(xì)胞，使癬菌更易于觀察。

2.帕克藍(lán)墨水法：將帕克藍(lán)墨水（派克國(guó)際牌）滴加到標(biāo)本上，靜置5-10分鐘。藍(lán)墨水可以被癬菌吸收，使癬菌結(jié)構(gòu)更清晰。

3.丙烯酸藍(lán)法：將丙烯酸藍(lán)溶液（1g丙烯酸藍(lán)溶解于100ml蒸餾水中）滴加到標(biāo)本上，靜置1-2分鐘。丙烯酸藍(lán)可以特異性地與癬菌的糖蛋白結(jié)合，使癬菌呈藍(lán)色。

鏡檢

1.皮膚病變區(qū)：在顯微鏡下觀察KOH溶解后的標(biāo)本，尋找有無(wú)癬菌絲和孢子。癬菌絲呈透明或微棕色的細(xì)長(zhǎng)管狀結(jié)構(gòu)，而孢子呈圓形或橢圓形，大小不等。

2.毛發(fā)病變區(qū)：觀察毛發(fā)周圍有無(wú)癬菌菌鞘。菌鞘是癬菌入侵毛發(fā)時(shí)形成的保護(hù)性結(jié)構(gòu)，呈不規(guī)則的管狀或鞘狀，包裹著毛發(fā)。

3.指甲病變區(qū)：觀察指甲碎片有無(wú)癬菌侵襲的跡象，如癬菌絲或孢子。

陽(yáng)性結(jié)果的判定

1.KOH法：觀察到有真菌絲和孢子。

2.帕克藍(lán)墨水法：觀察到癬菌結(jié)構(gòu)被藍(lán)墨水染色。

3.丙烯酸藍(lán)法：觀察到癬菌結(jié)構(gòu)呈藍(lán)色。

注意事項(xiàng)

1.標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)避免污染，以免影響結(jié)果。

2.標(biāo)本制備時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免破壞癬菌結(jié)構(gòu)。

3.鏡檢時(shí)應(yīng)注意觀察細(xì)節(jié)，如癬菌絲的形態(tài)、孢子的形狀和大小等。

4.直接鏡檢方法僅能初步診斷皮膚癬菌病，確診仍需結(jié)合其他檢查，如真菌培養(yǎng)和分子檢測(cè)等。第三部分熒光顯微鏡鏡檢關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)熒光顯微鏡鏡檢

1.熒光顯微鏡的工作原理

-利用特定波長(zhǎng)的激發(fā)光照射樣本，某些物質(zhì)會(huì)吸收光能并發(fā)射出熒光。

-通過(guò)熒光濾鏡組觀察樣本，可區(qū)分不同波長(zhǎng)的熒光，從而識(shí)別樣本中特定結(jié)構(gòu)或成分。

2.熒光染料在皮膚癬菌病診斷中的應(yīng)用

-熒光染料（如卡羅紅、考馬仕藍(lán)）可以特異性地與皮膚癬菌細(xì)胞壁上的成分結(jié)合。

-在熒光顯微鏡下，結(jié)合了染料的皮膚癬菌細(xì)胞會(huì)發(fā)出熒光，與未結(jié)合染料的背景細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。

3.皮膚癬菌病熒光顯微鏡鏡檢的優(yōu)點(diǎn)

-快速準(zhǔn)確：熒光顯微鏡鏡檢可以快速識(shí)別皮膚癬菌，準(zhǔn)確率高。

-非侵入性：只需要采集少量皮膚樣本，不會(huì)對(duì)患者造成太大的創(chuàng)傷。

-區(qū)分物種：不同種類的皮膚癬菌對(duì)熒光染料的結(jié)合能力不同，可用于區(qū)分物種。

卡羅紅染色

1.原理：

-卡羅紅是一種苯并噁嗪熒光染料，可與皮膚癬菌細(xì)胞壁上的葡聚糖結(jié)合。

-在熒光顯微鏡下，結(jié)合了卡羅紅的皮膚癬菌細(xì)胞發(fā)出蘋果綠色的熒光。

2.優(yōu)點(diǎn)：

-靈敏度高：即使是少量的皮膚癬菌也能被檢測(cè)到。

-特異性強(qiáng)：卡羅紅對(duì)皮膚癬菌具有特異性，很少出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

-操作簡(jiǎn)單：染色過(guò)程簡(jiǎn)便，結(jié)果易于觀察。

考馬仕藍(lán)染色

1.原理：

-考馬仕藍(lán)是一種二苯氧氮卓類熒光染料，可與皮膚癬菌細(xì)胞壁上的幾丁結(jié)合。

-在熒光顯微鏡下，結(jié)合了考馬仕藍(lán)的皮膚癬菌細(xì)胞發(fā)出藍(lán)綠色的熒光。

2.優(yōu)點(diǎn)：

-滲透性強(qiáng)：考馬仕藍(lán)可以穿透皮膚癬菌的厚壁，與細(xì)胞壁成分結(jié)合。

-背景低：考馬仕藍(lán)對(duì)皮膚和真菌細(xì)胞的背景染色較低，有利于觀察熒光信號(hào)。

-區(qū)分真菌和非真菌：考馬仕藍(lán)對(duì)真菌細(xì)胞壁具有特異性，可以區(qū)分真菌和非真菌性病變。熒光顯微鏡鏡檢

原理：

熒光顯微鏡是一種顯微鏡，利用熒光染料與標(biāo)本中特定成分的結(jié)合特性，在特定波長(zhǎng)的激發(fā)光照射下發(fā)出熒光的原理，實(shí)現(xiàn)對(duì)標(biāo)本的觀察和分析。在皮膚癬菌病鏡檢中，熒光顯微鏡的應(yīng)用主要基于以下機(jī)制：

*癬菌熒光：某些癬菌，如毛癬菌屬（Trichophyton）和表皮癬菌屬（Epidermophyton），在含有熒光染料的介質(zhì)中，其真菌細(xì)胞壁和菌絲會(huì)發(fā)出熒光。

*角蛋白熒光淬滅：角蛋白是皮膚和毛發(fā)角質(zhì)層的組成成分，在受到癬菌侵染后，其結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生變化，導(dǎo)致熒光特性改變。利用熒光顯微鏡，可以通過(guò)觀察受感染角蛋白熒光淬滅的程度，來(lái)判斷癬菌的存在。

染料選擇：

用于皮膚癬菌病熒光顯微鏡鏡檢的染料通常為熒光光團(tuán)劑，如：

*BlankophorB：是一種普遍應(yīng)用的熒光光團(tuán)劑，在與癬菌細(xì)胞壁結(jié)合后發(fā)出藍(lán)色熒光。

*Calcofluor白：另一種熒光光團(tuán)劑，與纖維素和幾?。ㄕ婢?xì)胞壁的組成成分）結(jié)合后發(fā)出綠色或藍(lán)色熒光。

操作步驟：

熒光顯微鏡鏡檢的具體操作步驟如下：

1.標(biāo)本采集：取用患者皮膚或毛發(fā)的病變組織或刮屑物作為標(biāo)本。

2.染色：將標(biāo)本與熒光染料混合，進(jìn)行染色反應(yīng)。

3.洗滌：去除未結(jié)合的染料。

4.載玻片制備：將染色后的標(biāo)本滴加到載玻片上，蓋上蓋玻片。

5.熒光顯微鏡觀察：在熒光顯微鏡下，使用特定的波長(zhǎng)激發(fā)光，觀察標(biāo)本中癬菌的熒光特征。

優(yōu)點(diǎn)：

熒光顯微鏡鏡檢在皮膚癬菌病診斷中具有以下優(yōu)點(diǎn)：

*靈敏性高：熒光顯微鏡鏡檢可以檢測(cè)出活體癬菌和死菌，靈敏性高于傳統(tǒng)顯微鏡鏡檢。

*特異性強(qiáng)：熒光顯微鏡鏡檢可以通過(guò)特定染料的結(jié)合特性，識(shí)別出癬菌與其他微生物。

*快速簡(jiǎn)便：操作過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，結(jié)果出具時(shí)間短。

*方便觀察：熒光顯微鏡鏡檢不需要復(fù)雜的前處理步驟，可以直接觀察標(biāo)本。

不足：

熒光顯微鏡鏡檢也存在一定的局限性：

*設(shè)備要求高：熒光顯微鏡鏡檢需要使用專門的熒光顯微鏡設(shè)備，成本相對(duì)較高。

*受染色技術(shù)影響：染色技術(shù)的不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。

*不能區(qū)分種類：熒光顯微鏡鏡檢只能識(shí)別癬菌的存在，無(wú)法區(qū)分具體的癬菌種類。第四部分鏡檢指標(biāo)觀察關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)直接涂片法

1.直接涂片法是最簡(jiǎn)單、最快速的皮膚癬菌病鏡檢診斷方法之一。

2.直接涂片法操作簡(jiǎn)便，取材部位皮膚表面菌斑或鱗屑，加入10%氫氧化鉀溶液，輕輕壓片蓋玻片，待角質(zhì)軟化后，在顯微鏡下直接觀察。

3.直接涂片法可觀察到真菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和排列方式，有利于真菌類型的初步判斷。

毛發(fā)涂片法

1.毛發(fā)涂片法適用于感染部位為毛發(fā)的皮膚癬菌病，如頭癬、體癬等。

2.毛發(fā)涂片法操作步驟與直接涂片法類似，但需將感染部位毛發(fā)拔除，連同鱗屑一起放入10%氫氧化鉀溶液中，軟化后鏡檢。

3.毛發(fā)涂片法不僅可以觀察到毛發(fā)表面真菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，還能發(fā)現(xiàn)毛發(fā)內(nèi)部的真菌侵犯情況，提高真菌感染部位定位的準(zhǔn)確性。

培養(yǎng)法

1.培養(yǎng)法是皮膚癬菌病鏡檢診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，具有確診意義。

2.培養(yǎng)法操作步驟較為繁瑣，需在無(wú)菌條件下取材，并接種于專用培養(yǎng)基上，在特定溫度和濕度條件下培養(yǎng)一定時(shí)間。

3.培養(yǎng)法不僅可以分離出致病真菌，還可進(jìn)行真菌藥敏試驗(yàn)，為臨床用藥選擇提供依據(jù)。

組織病理學(xué)檢查

1.組織病理學(xué)檢查是皮膚癬菌病診斷的重要輔助手段，可觀察到真菌在組織中的分布、侵犯程度和宿主反應(yīng)。

2.組織病理學(xué)檢查需要取皮膚活檢組織，制成病理切片，在顯微鏡下觀察真菌侵犯的情況，有利于鑒別皮膚癬菌病與其他皮膚疾病。

3.組織病理學(xué)檢查還可以提供真菌侵犯的深度、炎癥反應(yīng)程度等信息，指導(dǎo)臨床治療方案的制定。

分子生物學(xué)檢測(cè)

1.分子生物學(xué)檢測(cè)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的皮膚癬菌病鏡檢診斷新技術(shù)，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏的特點(diǎn)。

2.分子生物學(xué)檢測(cè)主要通過(guò)擴(kuò)增和檢測(cè)真菌特異性基因序列來(lái)識(shí)別真菌類型，可提高皮膚癬菌病診斷的敏感性和特異性。

3.分子生物學(xué)檢測(cè)還可以進(jìn)行真菌分型，了解真菌的致病力、耐藥性等信息，為臨床診療提供更精準(zhǔn)的依據(jù)。鏡檢指標(biāo)觀察

鏡檢是皮膚癬菌病診斷的重要方法，主要通過(guò)檢查臨床標(biāo)本中的菌絲和孢子來(lái)確診。常用的鏡檢指標(biāo)包括：

1.菌絲觀察

*菌絲形態(tài)：細(xì)長(zhǎng)、分枝、透明、折光性強(qiáng)。

*菌絲直徑：一般為2-10μm，不同種類的癬菌菌絲直徑有所不同。

*菌絲分隔：菌絲上有規(guī)則或不規(guī)則的分隔，分隔間距大小和形狀因菌種而異。

*菌絲壁結(jié)構(gòu)：菌絲壁由內(nèi)外兩層組成，外層為透明的蛋白鞘，內(nèi)層為透電子致密的幾丁質(zhì)。

2.孢子觀察

*孢子形態(tài)：根據(jù)孢子形狀和分隔特點(diǎn)，可分為大孢子和小孢子。大孢子通常呈梭形、錘形或棒狀，小孢子呈梨形、球形或橢圓形。

*孢子大小：大孢子一般長(zhǎng)30-150μm，寬8-15μm；小孢子一般直徑為2-10μm。

*孢子隔膜：大孢子通常有多個(gè)隔膜，小孢子一般為無(wú)隔膜或僅有幾個(gè)隔膜。

*孢子壁結(jié)構(gòu)：孢子壁由兩層或多層組成，外層為蛋白鞘，內(nèi)層為幾丁質(zhì)。

3.其他觀察指標(biāo)

*革蘭染色：癬菌為革蘭陽(yáng)性菌，染色后呈藍(lán)紫色。

*熒光顯微鏡檢查：某些癬菌在熒光顯微鏡下發(fā)射熒光，可以輔助診斷。

*分子生物學(xué)檢測(cè)：通過(guò)PCR或基因測(cè)序等方法，可以對(duì)癬菌進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的鑒定。

鏡檢注意事項(xiàng)

*標(biāo)本采集：應(yīng)取用病灶邊緣的鱗屑或皮膚碎片。

*標(biāo)本處理：可用10%氫氧化鉀溶液浸泡標(biāo)本，溶解角質(zhì)層，便于菌絲和孢子的顯微鏡觀察。

*鏡檢過(guò)程：使用復(fù)合顯微鏡和100倍油浸物鏡進(jìn)行觀察，注意菌絲和孢子的形態(tài)、大小、結(jié)構(gòu)和分隔等特征。

*診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)菌絲和孢子的觀察結(jié)果，結(jié)合臨床表現(xiàn)和輔助檢查，綜合判斷是否為皮膚癬菌病。第五部分革蘭染色鏡檢關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【革蘭染色鏡檢】

1.染色原理：革蘭染色鏡檢利用革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性的細(xì)胞壁成分不同，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌染色呈藍(lán)紫色，而對(duì)革蘭氏陰性菌染色呈紅紅色或桃紅色。

2.染色步驟：采用結(jié)晶紫染色、碘液固定、脫色液處理和番紅染色，通過(guò)脫色步驟區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌。

3.鏡檢觀察：在顯微鏡下觀察革蘭染色后的玻片，根據(jù)菌體的顏色形態(tài)進(jìn)行初步鑒定。

【應(yīng)用前景】

革蘭染色鏡檢

革蘭染色鏡檢是一種經(jīng)典的顯微鏡技術(shù)，用于區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。該技術(shù)基于細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的差異，革蘭氏陽(yáng)性菌具有較厚的肽聚糖層，而革蘭氏陰性菌具有較薄的肽聚糖層和外膜。

原理

革蘭染色程序包括以下步驟：

1.革蘭氏晶體紫染色：將晶體紫染液涂抹在樣本上，使染料滲透細(xì)胞壁。

2.革蘭氏碘處理：碘溶液被加入，與晶體紫形成晶體紫-碘復(fù)合物。

3.脫色：使用乙醇或丙酮等脫色劑，除去革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中的晶體紫-碘復(fù)合物。

4.反染：使用番紅或中性紅等反染劑，對(duì)革蘭氏陰性菌進(jìn)行染色。

步驟

材料：

*樣本

*革蘭氏晶體紫染液

*革蘭氏碘溶液

*脫色劑（乙醇或丙酮）

*反染劑（番紅或中性紅）

*載玻片

*顯微鏡

方法：

1.將樣本涂抹在載玻片上并風(fēng)干。

2.將晶體紫染液滴在樣本上，孵育1分鐘。

3.將碘溶液滴在樣本上，孵育1分鐘。

4.用脫色劑輕輕沖洗樣本10-15秒。

5.用反染劑滴在樣本上，孵育1分鐘。

6.沖洗樣本并風(fēng)干。

7.在顯微鏡下觀察。

結(jié)果

*革蘭氏陽(yáng)性菌：細(xì)胞以藍(lán)色或紫色呈現(xiàn)，細(xì)胞壁較厚。

*革蘭氏陰性菌：細(xì)胞以紅色或粉紅色呈現(xiàn)，細(xì)胞壁較薄。

優(yōu)勢(shì)

革蘭染色鏡檢的優(yōu)勢(shì)包括：

*簡(jiǎn)單易行：技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單，操作方便。

*快速：染色過(guò)程通?？稍?0分鐘內(nèi)完成。

*經(jīng)濟(jì)有效：所需的試劑和設(shè)備成本低。

*區(qū)分性：可有效區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。

局限性

革蘭染色鏡檢也有一些局限性：

*形態(tài)學(xué)變化：某些細(xì)菌在特定條件下可能表現(xiàn)出異常的染色特性。

*主觀解讀：結(jié)果可能取決于觀察者的主觀判斷。

*無(wú)法識(shí)別某些細(xì)菌：少數(shù)細(xì)菌，如衣原體和支原體，無(wú)法通過(guò)革蘭染色進(jìn)行區(qū)分。

應(yīng)用

革蘭染色鏡檢廣泛應(yīng)用于細(xì)菌性感染的診斷，包括：

*皮膚癬菌?。焊锾m氏真菌會(huì)表現(xiàn)為無(wú)性分枝菌絲和孢子。

*細(xì)菌性肺炎：革蘭氏陽(yáng)性鏈球菌和革蘭氏陰性肺炎球菌是常見(jiàn)的致病菌。

*尿路感染：革蘭氏陰性大腸桿菌是常見(jiàn)的致病菌。

*傷口感染：革蘭氏陽(yáng)性葡萄球菌和革蘭氏陰性假單胞菌是常見(jiàn)的致病菌。

總的來(lái)說(shuō)，革蘭染色鏡檢是一種簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)且有用的技術(shù)，用于區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。盡管存在一些局限性，但它仍然是細(xì)菌性感染診斷的重要工具。第六部分培養(yǎng)基培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)【培養(yǎng)基選擇】：

1.Sabouraud培養(yǎng)基：該培養(yǎng)基富含葡萄糖、蛋白胨和瓊脂，可促進(jìn)皮膚癬菌生長(zhǎng)，并抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。

2.瓊脂培養(yǎng)基：瓊脂可使培養(yǎng)基凝固，形成固體培養(yǎng)基，便于觀察菌落形態(tài)和進(jìn)行亞培養(yǎng)。

【培養(yǎng)溫度和時(shí)間】：

培養(yǎng)基培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)

皮膚癬菌病的鏡檢診斷中，培養(yǎng)基培養(yǎng)是重要的確診方法，規(guī)范的培養(yǎng)操作對(duì)于提高檢出率和準(zhǔn)確性至關(guān)重要。本研究中采用以下培養(yǎng)基培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)：

培養(yǎng)基類型

*薩布羅瓊氏葡萄糖瓊脂（Sabouraud'sDextroseAgar，SDA）：含葡萄糖、蛋白胨、瓊脂等成分，為皮膚癬菌常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

*改良狄克森培養(yǎng)基（ModifiedDixonAgar，MDA）：在SDA的基礎(chǔ)上添加氯霉素和環(huán)丙沙星，抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)，可選擇性培養(yǎng)皮膚癬菌。

*皮膚癬菌選擇性培養(yǎng)基（DermatophyteSelectiveAgar，DSA）：含氯霉素、環(huán)丙沙星、環(huán)己咪唑等抗菌藥，進(jìn)一步提高皮膚癬菌的檢出率。

培養(yǎng)溫度和時(shí)間

*培養(yǎng)溫度：25～28℃（室溫）

*培養(yǎng)時(shí)間：2～4周

接種方法

*用無(wú)菌移液管或接種環(huán)取標(biāo)本，接種于培養(yǎng)基表面，形成直徑約5mm的接種點(diǎn)。

*多點(diǎn)接種，確保標(biāo)本均勻分布在培養(yǎng)基上。

培養(yǎng)環(huán)境

*將接種后的培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

*培養(yǎng)箱內(nèi)濕度保持在50～60%，以防止培養(yǎng)基干燥。

*避免培養(yǎng)基暴露于強(qiáng)光，以防止光線抑制皮膚癬菌的生長(zhǎng)。

培養(yǎng)觀察

*培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基，記錄菌落的形態(tài)、顏色、質(zhì)地等特征。

*皮膚癬菌的菌落通常在培養(yǎng)2～4周后出現(xiàn)，呈棉絮狀、粉紅色或白色，質(zhì)地為絨毛狀或革質(zhì)狀。

注意點(diǎn)

*標(biāo)本采集前避免使用抗真菌藥物，以免影響培養(yǎng)結(jié)果。

*培養(yǎng)期間避免培養(yǎng)基受到交叉污染，以免影響診斷準(zhǔn)確性。

*培養(yǎng)基使用前應(yīng)檢查是否有細(xì)菌和霉菌污染，并及時(shí)更換。

*培養(yǎng)結(jié)果需由專業(yè)人員進(jìn)行鑒定，結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷。第七部分真菌鏡檢診斷要點(diǎn)關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)鏡檢標(biāo)本采集

1.采集鱗屑或拔毛：選擇皮損邊緣、紅斑、丘疹或水皰部位，用刮刀或鑷子輕輕刮取鱗屑或拔出毛發(fā)。

2.采集培養(yǎng)標(biāo)本：對(duì)于深部真菌感染或疑似非皮膚癬菌感染，需要取組織標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)。

3.消毒清潔：采集部位和工具應(yīng)嚴(yán)格消毒，避免污染標(biāo)本。

鏡檢方法

1.直接鏡檢：取少量標(biāo)本置于載玻片上，滴加10%氫氧化鉀溶液，覆蓋蓋玻片，加熱或室溫放置，待標(biāo)本透明后觀察菌絲、孢子等真菌形態(tài)。

2.染色鏡檢：將標(biāo)本染色，如帕斯染色或格羅科特染色，以增強(qiáng)真菌結(jié)構(gòu)的顯色性，提高檢出率。

3.免疫熒光染色：使用抗真菌抗體和熒光標(biāo)記物，結(jié)合熒光顯微鏡觀察，提高真菌的可視化和特異性。

菌絲形態(tài)觀察

1.分隔菌絲：真菌菌絲由橫隔和分生孢子隔開(kāi)，表現(xiàn)為細(xì)胞狀結(jié)構(gòu)，常見(jiàn)于皮膚癬菌。

2.無(wú)分隔菌絲：真菌菌絲沒(méi)有橫隔，呈管狀或帶狀結(jié)構(gòu)，常見(jiàn)于念珠菌和隱球菌。

3.假菌絲：酵母菌在特定條件下形成的菌絲，形態(tài)上類似于真菌菌絲，但并非真正的菌絲。

孢子形態(tài)觀察

1.厚壁孢子：皮膚癬菌的特征性孢子，呈圓形、橢圓形或梭形，具有厚厚的壁，不易被壓碎。

2.薄壁孢子：念珠菌和隱球菌等真菌產(chǎn)生的孢子，壁較薄，易被壓碎，常呈圓形、橢圓形或發(fā)芽狀。

3.小分生孢子：由皮膚癬菌的菌絲直接分生產(chǎn)生的孢子，大小較小，常呈圓形或卵形。

其他形態(tài)觀察

1.酵母菌：橢圓形或圓形的單細(xì)胞真菌，常呈芽生狀，常見(jiàn)于念珠菌感染。

2.假絲酵母菌：介于酵母菌和真菌菌絲之間的形態(tài)，具有芽生和菌絲生長(zhǎng)特征，常見(jiàn)于隱球菌感染。

3.孢子囊：真菌產(chǎn)生的球形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含孢子，常見(jiàn)于某些真菌，如毛霉菌。

報(bào)告解讀

1.陽(yáng)性報(bào)告：標(biāo)本中檢出真菌形態(tài)，包括菌絲和/或孢子，提示真菌感染的存在。

2.陰性報(bào)告：標(biāo)本中未見(jiàn)真菌形態(tài)，但不能完全排除真菌感染，可能需要結(jié)合其他檢查手段確診。

3.需進(jìn)一步培養(yǎng)：鏡檢存在真菌形態(tài)，但不能明確診斷，需要進(jìn)行真菌培養(yǎng)進(jìn)一步鑒別。真菌鏡檢診斷要點(diǎn)

1.標(biāo)本采集

*皮損邊緣或鱗屑

*使用刮刀或手套收集

*標(biāo)本應(yīng)裝入無(wú)菌容器并送往實(shí)驗(yàn)室

2.直接鏡檢

*氫氧化鉀（KOH）濕片檢查：將標(biāo)本置于10%KOH溶液中，加熱溶解角質(zhì)，真菌元件顯露。

*觀察要點(diǎn)：

*菌絲：無(wú)隔或多隔、分枝或不分枝

*孢子：分節(jié)孢子、厚壁孢子、微小孢子等

*酵母樣真菌：出芽細(xì)胞或假菌絲

3.組氨酸菌素染液檢查

*熒光性光學(xué)顯微鏡下觀察

*適用于真菌含有組氨酸成分的物種

*真菌元件發(fā)出藍(lán)色或綠色熒光

4.蘇木精-曙紅染色

*光學(xué)顯微鏡下觀察

*適用于所有類型的真菌

*觀察要點(diǎn)：

*無(wú)隔菌絲：紅色

*多隔菌絲：藍(lán)色

*孢子：紅色或藍(lán)色，取決于細(xì)胞壁成分

5.PAS染色

*周期酸-希夫染色

*顯示真菌細(xì)胞壁中多糖成分

*觀察要點(diǎn)：真菌元件呈紫紅色

6.格羅科特染色

*銀浸染色

*顯示真菌細(xì)胞壁中多糖和真菌多糖成分

*觀察要點(diǎn)：真菌元件呈黑色

7.培養(yǎng)

*將標(biāo)本接種到選擇性培養(yǎng)基，如沙保羅葡糖體瓊脂或尼克森瓊脂

*培養(yǎng)條件：室溫或30-37℃，濕度高

*觀察要點(diǎn)：

*菌落形態(tài)：大小、顏色、質(zhì)地

*真菌分生孢子

*鏡檢培養(yǎng)物以確認(rèn)真菌種類

8.真菌DNA檢測(cè)

*聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）或測(cè)序

*通過(guò)放大或測(cè)序真菌特異性核酸序列來(lái)鑒定真菌

*靈敏度和特異性高

診斷標(biāo)準(zhǔn)

*直接鏡檢發(fā)現(xiàn)真菌元件

*培養(yǎng)得到真菌，或通過(guò)組氨酸菌素染液檢查或基因檢測(cè)鑒定出真菌第八部分皮膚癬菌鏡檢意義關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點(diǎn)皮膚真菌鏡檢的診斷價(jià)值

1.鏡檢是診斷皮膚癬菌病的最方便、快捷、經(jīng)濟(jì)的方法。

2.通過(guò)鏡檢可以觀察真菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)，