蘆丁中黃酮對(duì)光老化裸鼠皮膚的修復(fù)作用

蘆丁中黃酮對(duì)光老化裸鼠皮膚的修復(fù)作用

摘要：目的了解蘆丁中黃酮提取物所制成的乳膏用于光老化裸鼠皮膚修復(fù)的具體作用。方法比較正常組（未接受光老化處理）、模型組（光老化處理后接受生理鹽水涂抹治療）、實(shí)驗(yàn)組（光老化處理后接受黃酮軟膏涂抹治療）裸鼠皮膚組織中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型膠原蛋白含量的差異，同時(shí)觀察裸鼠皮膚組織形態(tài)特征。結(jié)果實(shí)驗(yàn)后測(cè)三組裸鼠皮膚中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型膠原蛋白的含量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均有P<0.05），其差異主要來源是實(shí)驗(yàn)組和正常組、實(shí)驗(yàn)組和模型組之間的差異。結(jié)論蘆丁中黃酮提取物所制成的軟膏用于光老化裸鼠的皮膚修復(fù)，有助于裸鼠皮膚組織中多種有益物質(zhì)的生成，最終有助于皮膚完整性的修復(fù)過程。關(guān)鍵詞：蘆丁；黃酮；光老化；裸鼠；皮膚衰老是生物界最基本的自然規(guī)律，皮膚的衰老除了內(nèi)源性原因外，紫外線輻射、吸煙、接觸有害性化學(xué)物質(zhì)等均為導(dǎo)致皮膚老化的環(huán)境因素。隨著大氣平流層的臭氧層的進(jìn)行性破壞，人類受到短波紫外線和部分中波紫外線的暴露機(jī)會(huì)越發(fā)強(qiáng)烈，皮膚老化性主要表現(xiàn)為皮膚粗糙、皺縮、無光澤，損傷嚴(yán)重者會(huì)引發(fā)皮膚免疫抑制反應(yīng)，甚至形成皮膚腫瘤[1]。人類和動(dòng)物皮膚光老化的共同機(jī)理是機(jī)體的氧化和抗氧化功能以及氧自由基的異常增多。生物類黃酮亦稱為維生素P，在自然界中廣泛分布，具有多種生物活性，配合維生素C在臨床上運(yùn)用已久，安全性和穩(wěn)定性在臨床上已經(jīng)獲得了充分肯定[2]。為探討蘆丁中黃酮提取物用于光老化小鼠，對(duì)其皮膚的具體修復(fù)作用，本研究小組特進(jìn)行了對(duì)照實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。1對(duì)象與方法1.1研究對(duì)象：為光老化裸鼠造模，去毛成裸鼠（由長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）50只。在波長(zhǎng)為280-320的UVB燈管（北京士博科技有限公司提供）下模擬紫外線長(zhǎng)期照射（照射距離60厘米，每天照射1次，每次60分鐘，連續(xù)2周），照射期間照常喂食。1.2分組及處理：在造模裸鼠中挑選40只按照體重匹配1：1均分為模型和實(shí)驗(yàn)兩組，分別接受如下處理。

正常組：未經(jīng)過光老化處理，且不做任何處理的正常裸鼠。模型組：經(jīng)過光老化處理，生理鹽水涂抹治療的裸鼠，每12小時(shí)一次，為期1周。實(shí)驗(yàn)組：經(jīng)過光老化處理，蘆丁粉末（山西云鵬制藥有限公司提供）制作成的乳膏進(jìn)行涂抹治療的裸鼠，每12小時(shí)一次，為期1周。1.3蘆丁乳膏制作方法：蘆丁黃酮提取物與乳劑基質(zhì)按照常規(guī)制備工藝制作成水包油型的外用乳膏，其蘆丁黃酮質(zhì)量構(gòu)成比為10%左右。1.4評(píng)定指標(biāo)：取樣皮膚組織進(jìn)行SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型膠原蛋白含量的檢測(cè)（檢測(cè)方法略）；同時(shí)在光學(xué)顯微鏡下觀察裸鼠皮膚結(jié)構(gòu)的變化。1.5統(tǒng)計(jì)分析：采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSSl8.0建立數(shù)據(jù)庫并分析，計(jì)量資料使用（均值±標(biāo)準(zhǔn)差）形式進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，兩組計(jì)量資料的比較使用t檢驗(yàn)，多組計(jì)量資料的比較使用F檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取0.05，雙側(cè)概率。2結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)前測(cè)三組裸鼠基本情況三組裸鼠體重均位于20-25克之間，均為月齡5個(gè)月的雌鼠，每組20只。其中正常組裸鼠體重（22.50±4.63）克、模型組裸鼠體重（23.09±4.19）克、實(shí)驗(yàn)組裸鼠體重（29.15±4.25）克。三組裸鼠實(shí)驗(yàn)初體重、皮膚組織中生物物質(zhì)含量的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均有P>0.05），資料具有可比性。2.2實(shí)驗(yàn)后測(cè)三組裸鼠皮膚中各生化物質(zhì)表達(dá)量的比較實(shí)驗(yàn)后測(cè)三組裸鼠皮膚中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型膠原蛋白的含量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均有P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組與正常組比較，SOD、CSH-Px、CAT含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均有P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組與模型組比較，所有指標(biāo)含量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均有P<0.05）。表1實(shí)驗(yàn)后測(cè)三組裸鼠皮膚中各生化物質(zhì)表達(dá)量的比較組別數(shù)量SODCSH-PxCATMDAⅠ型膠原蛋白正常組20136.66±19.62129.52±16.29312.47±40.5222.45±6.471.20±0.62模型組20101.75±16.52103.41±3.48246.33±30.4329.88±7.540.56±0.09實(shí)驗(yàn)組20132.09±20.44ab120.87±10.44ab276.88±24.62ab24.30±5.18b1.15±0.23bF20.08227.46420.7137.15017.068P0.000*0.000*0.000*0.002*0.000*注：*表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；a實(shí)驗(yàn)組與正常組比較差異顯著；b實(shí)驗(yàn)組與模型組比較差異顯著2.3實(shí)驗(yàn)組裸鼠皮膚結(jié)構(gòu)在光學(xué)顯微鏡（10×50）下觀察顯示，模型組裸鼠皮膚的表皮明顯增厚，組織結(jié)構(gòu)不完整，纖維組織排列較為紊亂，大范圍出現(xiàn)斷裂現(xiàn)象，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，而皮脂腺也出現(xiàn)了不規(guī)則增生現(xiàn)象。正常組和實(shí)驗(yàn)組裸鼠皮膚的表皮角質(zhì)較薄，組織結(jié)構(gòu)完整，各層細(xì)胞清晰，真皮層纖維組織均勻的呈現(xiàn)為波浪狀分布。3討論近年來由于紫外線照射所致皮膚損傷成為臨床研究熱點(diǎn)，有相關(guān)報(bào)道指出，中波紫外線所致的皮膚光老化主要原因在于，刺激皮膚分泌一系列炎癥因子，啟動(dòng)了MAPK信號(hào)通路有關(guān)。黃酮化合物的發(fā)現(xiàn)歷史頗為悠久，早在20世紀(jì)30年代就有藥物化學(xué)家證實(shí)，黃酮（維生素P）的抗壞血作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)勝過維生素C。隨著黃酮提取物生物功效的相關(guān)研究日益深入，臨床中黃酮藥物的應(yīng)用也日趨廣泛[2]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)蘆丁中黃酮進(jìn)行提取后所制成的軟膏，能較好的改善光老化皮膚功能，主要表現(xiàn)在皮膚中活性物質(zhì)的逐步升高。SOD、CSH-Px、CAT均為抗氧化酶，具有清除自由基的作用，這些物質(zhì)含量的升高有助于絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的回復(fù)，從而調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和凋亡過程。而皮膚中MDA（丙二醛）的進(jìn)行性減少也與皮膚抗氧化功能的逐步恢復(fù)密切相關(guān)。顯微結(jié)構(gòu)觀察也發(fā)現(xiàn)，使用黃酮軟膏的裸鼠，其皮膚完整性更好，組織結(jié)構(gòu)也較為清晰，說明黃酮藥物的調(diào)理作用是持久、深層次的[3]。綜上，蘆丁中的黃酮提取物同甘草等物質(zhì)一樣，對(duì)于光老化皮膚具有一定修復(fù)作用，而其療效的優(yōu)勢(shì)具體是黃酮單種物質(zhì)的作用效果，還是蘆丁中其他生物制劑的作用，則有待進(jìn)一步深入研究以考證。參考文獻(xiàn)[1]王燕華，蔡麗敏，楊晶，等.紫外線誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞形態(tài)改變及對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的影響[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2017，（3）：360-363.[2]火萬琴，杜華.光敏性皮炎的中西醫(yī)研究進(jìn)展[J].西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2017，（2）：