《核酸提取純化方法評價通則GBT+37874-2019》詳細解讀

《核酸提取純化方法評價通則GB/T37874-2019》詳細解讀contents目錄1范圍2規(guī)范性引用文件3術(shù)語和定義、縮略語4基本要求5指標參數(shù)6評價方法011范圍監(jiān)管機構(gòu)為監(jiān)管機構(gòu)提供了監(jiān)管依據(jù)，有助于保障市場上核酸提取純化試劑盒的質(zhì)量。核酸提取純化試劑盒生產(chǎn)企業(yè)規(guī)范了核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)質(zhì)量要求，為生產(chǎn)企業(yè)提供了統(tǒng)一的標準。核酸提取純化試劑盒使用者為使用者提供了評價核酸提取純化試劑盒質(zhì)量的方法，有助于選擇高質(zhì)量的試劑盒。適用對象覆蓋內(nèi)容術(shù)語和定義明確了核酸提取純化試劑盒相關(guān)的術(shù)語和定義，避免了理解上的歧義。質(zhì)量要求規(guī)定了核酸提取純化試劑盒的質(zhì)量要求，包括外觀、純度、濃度、準確性等指標。評價方法提供了評價核酸提取純化試劑盒質(zhì)量的具體方法，包括實驗設(shè)計、操作步驟、結(jié)果分析等。標志、標簽和說明書規(guī)范了核酸提取純化試劑盒的標志、標簽和說明書的內(nèi)容和要求，確保使用者能夠正確使用。022規(guī)范性引用文件分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法，此標準規(guī)定了實驗室用水的級別、技術(shù)要求和試驗方法等，確保實驗用水的質(zhì)量，進而保證核酸提取純化實驗的準確性和可靠性。GB/T6682實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測，此標準提供了實驗室進行食品微生物檢測時的質(zhì)量控制要求，對于核酸提取純化過程中可能涉及的微生物污染控制有重要指導(dǎo)意義。GB/T27405主要引用文件YY/T1182核酸提取試劑盒（磁珠法），此標準規(guī)定了使用磁珠法進行核酸提取的試劑盒的技術(shù)要求、試驗方法等，與核酸提取純化方法密切相關(guān)。GB19489實驗室生物安全通用要求，此標準規(guī)定了實驗室生物安全管理和技術(shù)要求，確保核酸提取純化實驗過程的安全性。相關(guān)引用文件033術(shù)語和定義、縮略語術(shù)語和定義核酸提取純化試劑盒用于從生物樣本中提取和純化核酸的試劑盒，其包含了進行核酸提取和純化所需的各種試劑及材料。質(zhì)量評價樣本處理對核酸提取純化試劑盒的性能指標進行檢測、驗證和評估的過程，以確保其滿足預(yù)期的使用要求和標準。在進行核酸提取前對生物樣本進行的預(yù)處理操作，如破碎、裂解等，以便于后續(xù)的核酸提取和純化?？s略語0102030405dNTP脫氧核苷三磷酸，是PCR反應(yīng)中的重要原料之一。RNA核糖核酸，在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要的信息傳遞和調(diào)控功能。國家標準推薦性標準，表示該標準為推薦性國家標準。GB/TDNA脫氧核糖核酸，是生物體內(nèi)遺傳信息的載體。PCR聚合酶鏈式反應(yīng)，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于擴增特定的DNA片段。044基本要求4.1提取純化方法的選擇應(yīng)根據(jù)具體實驗需求和樣本類型選擇合適的核酸提取純化方法，確保提取效率和純度滿足實驗要求。提取純化方法應(yīng)具有可重復(fù)性和穩(wěn)定性，以保證實驗結(jié)果的可靠性。4.2提取純化效果的評價應(yīng)對提取純化后的核酸進行質(zhì)量檢測，包括濃度、純度等指標，以確保提取純化效果符合要求?？刹捎枚縋CR、電泳等方法對提取純化效果進行驗證和評價?！啊?.3安全性要求提取純化過程中使用的試劑和耗材應(yīng)符合相關(guān)安全標準，避免對實驗人員和環(huán)境造成危害。實驗操作應(yīng)在符合生物安全要求的實驗室進行，實驗人員應(yīng)做好個人防護。實驗過程中應(yīng)詳細記錄操作步驟、實驗條件、試劑耗材使用情況等信息，以便于結(jié)果分析和問題追溯。實驗結(jié)束后應(yīng)撰寫實驗報告，對提取純化方法和效果進行綜合評價，并提出改進意見。4.4記錄與報告055指標參數(shù)指從樣本中提取出的核酸量與原始樣本中核酸總量的比例。提取效率定義影響因素評價方法包括樣本類型、裂解方式、洗滌條件等。通過對比不同試劑盒或方法在同一樣本中的提取效率，選擇最優(yōu)方案。5.1提取效率指提取出的核酸中目標核酸與雜質(zhì)（如蛋白質(zhì)、鹽類等）的比例。純度定義可能來源于樣本本身或提取過程中引入的污染物。雜質(zhì)來源通過測定提取產(chǎn)物的吸光度比值（如A260/A280）或使用熒光染料等方法評估純度。評價方法5.2純度010203指提取出的核酸分子保持原始長度和序列的完整性。完整性定義可能由于樣本保存不當、提取過程中機械剪切或酶解等因素導(dǎo)致。降解原因通過凝膠電泳觀察核酸分子的長度分布或使用qPCR等方法檢測特定序列的完整性。評價方法5.3完整性重復(fù)性定義包括樣本處理、試劑批次、操作人員等。影響因素評價方法通過計算多次提取結(jié)果的變異系數(shù)（CV）或相對標準偏差（RSD）等統(tǒng)計指標評估重復(fù)性。指在同一實驗條件下，使用相同試劑盒或方法對同一樣本進行多次提取，結(jié)果之間的一致性。5.4重復(fù)性066評價方法提取效率指標通過對比不同試劑盒或方法提取的核酸量，以及提取后核酸的純度，來評價提取效率。評價標準高效的核酸提取方法應(yīng)能夠最大限度地提取樣本中的核酸，并保持核酸的完整性。6.1提取效率評價考察提取后核酸的純度，如是否含有蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)。純化效果指標優(yōu)質(zhì)的純化方法應(yīng)能有效去除雜質(zhì)，獲得高純度的核酸。評價標準6.2純化效果評價6.3重復(fù)性評價評價標準穩(wěn)定的提取純化方法應(yīng)能在不同實驗中保持一致的結(jié)果。重復(fù)性指標通過多次重復(fù)實驗，考察提取和純化結(jié)果