血清藥理學(xué)方法

關(guān)于血清藥理學(xué)方法一、中藥血清藥理學(xué)的概況

中藥血清藥理學(xué)是指將中藥或中藥復(fù)方經(jīng)口給動(dòng)物灌服一定時(shí)間后采集動(dòng)物血液、分離血清，用此含有動(dòng)物成分的血清進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。經(jīng)過(guò)十幾年研究取得一定進(jìn)展，但其理論體系還有待完善，具體實(shí)驗(yàn)操作也亟需規(guī)范。第2頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月中藥血清藥理學(xué)主要針對(duì)中藥及其復(fù)方復(fù)雜多樣的化學(xué)成分特點(diǎn)，用含藥血清代替煎劑或粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。該法克服了將中藥復(fù)方制劑直接用于體外實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn)，通過(guò)含藥血清在體外的藥理效應(yīng)來(lái)反映藥物在機(jī)體內(nèi)的作用，提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信性。結(jié)合現(xiàn)代化學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理、臨床等學(xué)科。中藥血清藥理學(xué)得到了進(jìn)一步的開展，并引起了國(guó)內(nèi)外從事中藥研究人員的極大關(guān)注。血清藥理研究方法正不斷地被應(yīng)用于一些中藥復(fù)方及西藥的藥效評(píng)價(jià)及藥理學(xué)研究，并取得了新的進(jìn)展。第3頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月二、中藥血清藥理學(xué)的產(chǎn)生

中藥藥理的離體實(shí)驗(yàn)多是運(yùn)用粗提物直接進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，在方法學(xué)上存在一些問(wèn)題和缺陷，比如說(shuō)中藥成分復(fù)雜，粗提物理化性質(zhì)（如雜質(zhì)、酸堿度、鞣質(zhì)等）不十分穩(wěn)定，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能影響藥效的判斷和評(píng)價(jià)?；诖?，日本國(guó)力京都醫(yī)院內(nèi)分泌疾病中心的田代真一在第一屆和漢醫(yī)藥學(xué)會(huì)會(huì)議(1984年)上提出了含藥血清實(shí)驗(yàn)方法的設(shè)想，并進(jìn)行了一系列富有成效的研究工作?！昂幯濉睂?shí)驗(yàn)方法即指給動(dòng)物或人服用一定量的藥物后，經(jīng)過(guò)一定的時(shí)間采血獲得血清，然后進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的一種研究方法，田代真一將這種方法命名為血清藥理學(xué)。這一設(shè)想受到了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。第4頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月三、血清藥理學(xué)在我國(guó)的研究現(xiàn)狀

1、血清藥理學(xué)的時(shí)效關(guān)系研究利用含藥血清來(lái)評(píng)價(jià)藥效，何時(shí)能夠采集到含藥量較高的血清，找出給藥后的最佳采血時(shí)間以避免由于藥效物質(zhì)代謝消耗或尚未吸收造成的假陰性結(jié)果，是非常重要的問(wèn)題。由于血清中確切的藥效成分并不清楚，因此往往以藥效指標(biāo)來(lái)評(píng)判給藥時(shí)間和采血時(shí)間的優(yōu)劣，即“時(shí)效關(guān)系”的研究。研究者們對(duì)不同給藥時(shí)間和采血時(shí)間的藥效進(jìn)行了研究。第5頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月給藥時(shí)間上，目前常用的方法有：１次給藥，或間隔２～４ｈ給藥，或每天１～３次，連續(xù)３～１０ｄ。研究認(rèn)為，根據(jù)藥動(dòng)學(xué)理論，固定給藥時(shí)間的間隔，相同劑量多次重復(fù)給藥后，血漿藥物濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度，并將在此濃度下不同采血時(shí)間取得的含藥血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，均表現(xiàn)較高且相似的藥理作用強(qiáng)度。采血時(shí)間上，較理想的采血時(shí)間應(yīng)在血藥濃度的高峰期。

第6頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月2、血清藥理學(xué)的量效關(guān)系研究

給藥劑量目前尚無(wú)定論，其量的大小主要取決于：一是動(dòng)物的給藥量，在一定程度上，給藥量愈大則血清中的含藥量愈高；二是培養(yǎng)體系或反應(yīng)體系中的含藥血清濃度，血清濃度愈高則藥量愈大。但因含藥血清加入體外反應(yīng)體系后，濃度被稀釋，使反應(yīng)體系藥物濃度達(dá)不到在體條件下的藥物濃度。第7頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月四、血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法在我國(guó)科學(xué)研究中的應(yīng)用1、血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法在中藥新藥研制中的應(yīng)用目前，中藥的開發(fā)和研制主要是尋找藥物的有效成分或有效部位、制備精煉的中藥制劑、提高臨床療效和降低毒副作用。血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法的建立，使這一目的的實(shí)現(xiàn)變得更為切實(shí)可行。主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①在體外藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)一步驗(yàn)證和評(píng)價(jià)藥物的療效，運(yùn)用含藥血清對(duì)有效藥物或藥物的有效成分進(jìn)行初步篩選；②血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)、中藥分析化學(xué)、中藥藥動(dòng)學(xué)，尤其是中藥胃腸藥動(dòng)學(xué)、中藥血清藥動(dòng)學(xué)、中藥證治藥動(dòng)學(xué)等相結(jié)合，將有利于藥物有效成分或部位的尋找和鑒定；③對(duì)藥物的制劑工藝進(jìn)行比較和篩選；④對(duì)藥物的作用機(jī)理做更深入的研究。

第8頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月2、血清藥理學(xué)在方劑藥動(dòng)學(xué)（ＰＫ）的應(yīng)用

黃席等將證治方劑藥動(dòng)學(xué)中的復(fù)方方劑藥動(dòng)學(xué)修正為復(fù)方效應(yīng)成分動(dòng)力學(xué)假說(shuō)。其方劑血清靶成分也是探索復(fù)方的藥效成分物質(zhì)基礎(chǔ)的。不僅如此，還研究靶成分在機(jī)體內(nèi)的藥時(shí)曲線、數(shù)學(xué)模型，其ＰＫ參數(shù)可直接指導(dǎo)臨床用藥，進(jìn)行治療藥物監(jiān)測(cè)（ＴＤＭ），從而有力地提高療效，因此是單純方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)探索的深入和發(fā)展。而血清藥理學(xué)研究過(guò)程是服用方劑后進(jìn)行含藥血清的體外藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)探討與方劑療效相關(guān)的成分間接地闡明藥效物質(zhì)。

第9頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月3、血清藥理學(xué)方法在腫瘤研究中的應(yīng)用

離體實(shí)驗(yàn)是研究中藥抗腫瘤機(jī)理的重要方法之一。對(duì)于抗腫瘤復(fù)方中藥來(lái)說(shuō)，在其配伍的多種中藥的血清中的有效成分的定量分析檢測(cè)尚未見突破性的進(jìn)展情況下，血清藥理學(xué)方法是抗腫瘤復(fù)方研究的一條行之有效的途徑。

目前，此法被廣泛用于中藥抗腫瘤機(jī)理研究。研究層面包括腫瘤細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)、腫瘤細(xì)胞凋亡及分化的誘導(dǎo)、腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)及端粒酶活性調(diào)控等方面。

第10頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月4、血清藥理學(xué)方法在神經(jīng)藥理學(xué)研究中的應(yīng)用

神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物研究涉及到許多的體外模型，運(yùn)用這些模型有助于快速、高效地篩選出治療疾病的藥物。合理使用血清藥理學(xué)方法，結(jié)合疾病的體外模型，可以幫助我們對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行分析，可較好地反映中藥藥效。

第11頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月五、對(duì)血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)中藥血清藥理學(xué)作為一種新興的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和研究方法，引起了廣泛的關(guān)注，其理論體系也在不斷的完善，目前主要研究集中于以下幾個(gè)方面：①中藥復(fù)方體外實(shí)驗(yàn)的方法學(xué)研究；②含藥血清藥力作用強(qiáng)度與體內(nèi)給藥的量效關(guān)系研究；③給藥方案研究；④反映體系中含藥物血清加入量的確定、采血時(shí)間的確定及時(shí)效關(guān)系研究；⑤含藥血清低溫保存和血清滅活對(duì)效應(yīng)的影響等。10余年來(lái)，這一方法在中藥研究中發(fā)揮了一定的作用，表明它是一個(gè)可行的研究方法，但也存在一些問(wèn)題和局限性。第12頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月中藥血清藥理學(xué)的優(yōu)點(diǎn)1)可以排除中藥復(fù)方粗制劑本身理化性質(zhì)的干擾。中藥粗制劑中含有的各種電解質(zhì)、鞣質(zhì)、不同的pH值、滲透壓等都會(huì)在一定程度上給中藥復(fù)方研究帶來(lái)干擾。

2)避免了直接體外實(shí)驗(yàn)可能得出的錯(cuò)誤結(jié)論。含藥血清含有中藥制劑真正有效成分，克服了中藥制劑的體內(nèi)代謝物或機(jī)體反應(yīng)物等有效成分引起的假陰性及機(jī)體非吸收物質(zhì)的體外作用造成的假陽(yáng)性，真實(shí)體現(xiàn)了復(fù)方藥物的體內(nèi)生化轉(zhuǎn)化效應(yīng)。

3)可以真實(shí)的反映體內(nèi)血藥濃度及其變化，是研究中藥藥動(dòng)學(xué)的有力工具。

第13頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月中藥血清藥理學(xué)的優(yōu)點(diǎn)4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與在體實(shí)驗(yàn)有較好的一致性，能夠通過(guò)有效成分在血中的動(dòng)態(tài)變化更好地反映中藥復(fù)方的配伍原則和藥物的量效關(guān)系；而且還能反映有可能由藥物誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)源性成分所產(chǎn)生的作用及中藥和其可能的代謝產(chǎn)物的藥理作用，為復(fù)方制劑的藥理研究奠定了基礎(chǔ)。

5)采用含藥血清培養(yǎng)細(xì)胞，便于應(yīng)用細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)手段，從基因、基因產(chǎn)物、藥物受體和酶活性等諸方面闡述藥理機(jī)制。

6)操作相對(duì)簡(jiǎn)單，費(fèi)用較低。

7)使現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)有了一個(gè)切實(shí)可行的結(jié)合點(diǎn)，推動(dòng)中醫(yī)中藥的科技進(jìn)步。第14頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月中藥血清藥理學(xué)的缺點(diǎn)1)血清本身內(nèi)源性成分復(fù)雜，給中藥血清藥理學(xué)研究帶來(lái)了極大困難。2)中藥復(fù)方制劑經(jīng)口服后，血清藥物濃度較低，特別是中藥復(fù)方制劑中微量成分及蛋白結(jié)合率較高的成分，給藥物檢測(cè)和藥理實(shí)驗(yàn)提出了難題。3)不同種屬、不同年齡的動(dòng)物對(duì)藥物吸收有一定差異，從而影響到血清中含藥成分及其含量，因此，開展中藥血清藥理學(xué)研究有待于規(guī)范動(dòng)物的種屬和年齡。4)因給藥劑量、采血時(shí)間不同，血清中含藥成分及其含量也不盡相同，故必須充分把握好給藥劑量及采血時(shí)間。第15頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月中藥血清藥理學(xué)的缺點(diǎn)5)在體外培養(yǎng)體系，不可能添加100%濃度的血清，含藥血清在培養(yǎng)液中的濃度一般不能超過(guò)20%，這使得體外培養(yǎng)難以達(dá)到體內(nèi)的真實(shí)血藥濃度；而且不是所有的中藥都通過(guò)血液起作用，有的藥物是對(duì)消化道的直接作用，難以在血液中體現(xiàn)，這也是血清藥理學(xué)不能解決的問(wèn)題。6)含藥血清取自不同生理病理的個(gè)體，會(huì)出現(xiàn)含藥血清差異;經(jīng)過(guò)體內(nèi)反應(yīng)，藥物含量進(jìn)一步被稀釋，成分更加復(fù)雜，增加了質(zhì)控難度。7)血清中部分物質(zhì)已是藥物作用機(jī)體細(xì)胞的反應(yīng)產(chǎn)物，如果細(xì)胞存在反饋機(jī)制，血清二次重復(fù)作用于細(xì)胞，將可能掩蓋藥物血清的實(shí)際作用。第16頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月中藥血清藥理學(xué)的缺點(diǎn)8)含藥血清對(duì)離體系統(tǒng)同樣也有干擾，如血清本身對(duì)體外酶活性的影響等。9)辨證論治是中醫(yī)診治疾病的方法和特點(diǎn)，盡管實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)已經(jīng)有人將實(shí)驗(yàn)和證型相結(jié)合，但在實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)中往往忽視中醫(yī)的內(nèi)涵、多采取辨病論治的方法，由于辨證可以客觀反映疾病的內(nèi)在規(guī)律，疾病又是辨證論治的依據(jù)，如何將二者結(jié)合起來(lái)是中藥血清藥理學(xué)需要探討的問(wèn)題。因此，中藥血清藥理學(xué)存在著一定的局限性需要在以后的工作中加以改進(jìn)和克服。第17頁(yè),共19頁(yè)，星期六，2024年，5月六、展望目前中藥血清藥理學(xué)已經(jīng)應(yīng)用到越來(lái)越多的研究領(lǐng)域中，雖然中藥血清藥理學(xué)方法的工作起步較晚，在許多方面還需要經(jīng)驗(yàn)和數(shù)據(jù)