食品中空腸彎曲菌檢測-江蘇出入境課件

空腸彎曲菌檢測

一、空腸彎曲菌的分類和特性：屬于彎曲菌屬。主要包括空腸彎曲菌〔Campylobacterjejuni〕、結腸(或大腸〕彎曲菌〔Campylobactercoli〕、海鷗彎曲菌〔Campylobacterlari〕、烏普色拉彎曲菌〔Campylobacterupsalensis〕、胎兒彎曲菌〔Campylobacterfetus〕等11種。其中空腸彎曲菌〔C.jejuni〕對食品平安的威脅最為嚴重?？漳c彎曲菌的生物學特性

革蘭氏染色陰性。呈弧形，S形或螺旋形；菌體兩端尖，有極鞭毛，能做快速直線或螺旋體狀運動；

1.5～5μm×0.2～0.5μm，無莢膜。微需氧環(huán)境：5%O2、10%CO2和85%N2。最適生長溫度：42-43℃，37℃可生長，30℃以下不生長。空腸彎曲桿菌的流行病學和臨床表現(xiàn)宿主：家禽、野生鳥類為最主要的傳染源。(Rosef等在1981年調(diào)查了129個野生鳥類，結果說明24.8%攜帶空腸彎曲菌)鳥類遷移會造成病原菌對湖水與河水的污染。

細菌分布范圍*該菌分布廣泛，已從多種動物中別離出；也發(fā)現(xiàn)于食物與飲水中，尤其是畜禽肉及臟器與鮮奶。*食用動物中雞的帶菌率為首位，其次為豬。主要分布在活雞的消化系統(tǒng)中如腺胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、直腸、泄殖腔等。*該菌在人或動物的糞便中存活約4周；在被污染的水源中可存活約5周。

感染途徑：

*

傳播途徑主要是由于攝取了該菌污染的食物與飲水后，細菌在人腸道內(nèi)大量生長繁殖，引起急性腸炎。

*

被污染的禽肉與未經(jīng)過巴氏消毒的牛奶是導致發(fā)病的主要原因.

患者臨床表現(xiàn)：

患者表現(xiàn)為發(fā)熱、腹瀉、嘔吐或肌肉痛。潛伏期平均3-5天，病程約7-10天，糞便的特征是有時帶血，鏡檢中有多形核白血球，重癥病例也有痢疾樣血、粘液糞便。根據(jù)美國疾病控制與預防中心〔USA-CDC〕多年的美國食源性病原微生物引起發(fā)病人數(shù)的統(tǒng)計資料，空腸彎曲菌導致的病例數(shù)排名第二。禽肉、生牛奶中的空腸彎曲菌被美國列為重點監(jiān)測食源性致病菌之一。32ndCCFH〔1999年〕提出5組優(yōu)先評估的“病原-食品〞組合,其中包括“禽肉-空腸彎曲菌〞?？漳c彎曲菌在許多興旺國家也是被報告最普遍的胃腸炎致病菌之一，如：美國、英國、丹麥、芬蘭、愛爾蘭、荷蘭、挪威、瑞典、瑞士等?？漳c彎曲菌空腸彎曲菌：

在微需氧條件下42℃生長而25℃不能生長，在選擇性固體培養(yǎng)基上形成特征性菌落，按照本標準檢驗時具有相符合的運動特性、生長特性與生化特性的革蘭氏陰性菌。設備和材料三氣培養(yǎng)箱〔如Binder等)彎曲菌檢驗程序增菌液接種方法一：稀釋處理將24h和48h的增菌液原液分別劃線接種mCCDA平板.〔備注：也可選用CFA顯色平板或SimPlate別離鑒定及定量培養(yǎng)基〕優(yōu)點：經(jīng)濟、方便缺點：可能會有雜菌干擾mCCDA平板上所挑取的可疑菌落通常帶有金屬光澤、扁平、濕潤、沿劃線生長。CFA顯色平板上所挑取的可疑菌落為紅色、突起、濕潤，菌落較小直徑約2～3mm，邊緣有一圈紅色的透明環(huán)，中間有一個圓形的不透明、顏色較深的紅色小點的菌落。將所挑取的3～5個可疑菌接種到不含抗生素的哥倫比亞血瓊脂平板，微需氧條件下42±0.5℃培養(yǎng)24h-48h后，進行后續(xù)的空腸彎曲菌鑒定?？漳c彎曲菌的鑒定快速鑒定

1.形態(tài)與動力性檢測*對挑取菌落進行革蘭氏染色鏡檢，空腸彎曲菌為革蘭氏陰性，彎曲如小逗點狀，兩菌體的末端相接時，呈S形、海鷗展翅狀或螺旋狀。*對挑取可疑菌落制作濕片，鏡檢可見本菌呈螺旋樣運動。

快速鑒定2.氧化酶試驗

使用鉑/銥接種環(huán)或玻璃棒，挑取單個菌落的一局部，然后接種到用氧化酶試劑潤濕的濾紙上，如果在10秒內(nèi)出現(xiàn)紫紅色、紫羅蘭或深藍色為陽性，彎曲菌那么為陽性。

快速鑒定3.過氧化氫酶檢測

挑取一環(huán)菌落培養(yǎng)物，加到在干凈顯微鏡玻片上的一滴3％過氧化氫溶液中，如果在30秒內(nèi)出現(xiàn)氣泡那么判定結果為陽性?？焖勹b定4.馬尿酸鹽水解試驗挑取欲檢測的菌落培養(yǎng)物，加到盛有0.4mL1％的馬尿酸鈉的試管中制成菌懸液，注意不要帶入培養(yǎng)基瓊脂。混合均勻后在37℃水浴中溫育2h或36℃培養(yǎng)箱中溫育4h。輕輕地在馬尿酸鹽溶液的頂部參加0.2mL茚三酮溶液，不要振蕩，在37℃水浴或36℃培養(yǎng)箱中溫育10min后判讀結果。假設出現(xiàn)黑紫色那么為陽性；假設出現(xiàn)淡紫色或沒有顏色變化那么為陰性?？焖勹b定后續(xù)鑒定

1.微需氧條件下25℃生長試驗2.有氧條件下42±0.5℃生長試驗3.先鋒霉素〔頭孢霉素〕的敏感性檢測〔可選〕ISO：奈啶酮酸的敏感性檢測〔越來越多的C.jejuni與C.coli的非特異性菌株出現(xiàn)〕后續(xù)鑒定微需氧條件下25℃生長試驗挑取欲檢測的菌落培養(yǎng)物，接種到哥倫比亞血瓊脂平板上，25℃微需氧條件下培養(yǎng)48±4h，假設為空腸彎曲菌那么不出現(xiàn)生長。后續(xù)鑒定有氧條件下42±0.5℃生長試驗

挑取欲檢測的菌落培養(yǎng)物，接種到哥倫比亞血瓊脂平板上，42±0.5℃有氧條件下培養(yǎng)48±4h，假設為空腸彎曲菌那么不出現(xiàn)生長。后續(xù)鑒定先鋒霉素〔頭孢霉素〕的敏感性檢測〔可選〕挑取菌落培養(yǎng)物，在布氏肉湯中制備成濃度為0.5McFarland的菌懸液，再用布氏肉湯制備1：10的稀釋液，在5％MuellerHinton血瓊脂平板上進行涂布，靜置5min后去除多余液體，將平板在36℃培養(yǎng)箱中放置10min。將先鋒霉素〔頭孢霉素〕藥敏紙片放在瓊脂外表。培養(yǎng)皿蓋子在上面，36℃微需氧條件下將平板培養(yǎng)22±2h。如果細菌緊貼著紙片生長那么為有抗性；如果紙片周圍出現(xiàn)不同程度的細菌抑制生長那么為敏感已試用過的彎曲菌生化鑒定與篩選檢測的商品化試劑微生物API鑒定系統(tǒng)

C.2彎曲菌的篩選檢測方法C.2.1miniVidas用于彎曲菌的初篩，原理為酶聯(lián)熒光免疫分析(ELFA)方法。對于結果陰性的可以直接判定為陰性，對于結果陽性的需進一步確認，可比傳統(tǒng)方法快2天。〔具體參照廠家說明〕C.2.2BAX系統(tǒng)原理為利用PCR進行基因檢測，用于空腸彎曲菌和大腸彎曲菌的篩選