2014年姜黃素對家鴨脂肪肝模型肝脂與血脂的干預(yù)效果及機(jī)制研究【藥學(xué)論文】

1/12014年姜黃素對家鴨脂肪肝模型肝脂與血脂的干預(yù)效果及機(jī)制研究【藥學(xué)論文】藥學(xué)論文-姜黃素對家鴨脂肪肝模型肝脂與血脂的干預(yù)效果及機(jī)制研究作者：

任永麗，徐宗佩，梁汝圣，劉鵬，李玉紅，蘇菁【摘要】目的考查姜黃素對家鴨脂肪肝模型肝脂、血脂的干預(yù)效果，并研究其作用機(jī)制。

方法復(fù)制家鴨脂肪肝模型，并用姜黃素進(jìn)行干預(yù)，考查肝脂、血脂、肝脂酶、肝病理變化、一般情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

結(jié)果姜黃素具有降低家鴨脂肪肝模型肝TG、血TG、體重、肝指數(shù)，改善肝組織病理的作用，其中高、中劑量組顯著低于模型組（P0.01，P0.05)。

姜黃素有升高家鴨脂肪肝模型肝脂酶的作用，其中高劑量組顯著高于模型組（P0.05)。

結(jié)論姜黃素具有降低家鴨脂肪肝模型肝脂、血脂的作用，且具有劑量依賴性。

其作用機(jī)制可能與增加肝脂酶活性，促進(jìn)脂質(zhì)代謝，保護(hù)肝細(xì)胞有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】姜黃素；脂肪肝；家鴨；肝脂；血脂；肝脂酶Abstract：

ObjectiveToobservetheinterventionaleffectsofcurcuminonliverlipidandserumlipidinamodelduckswithfattyliveranditsmechanism.MethodsDuckmodelwithfattyliverwasestablishedfirstly.Aftertreatmentwithcurcumin,liverlipid,serumlipid,hepaticlipase,hepaticpathologicalchangesandthegeneralphysicalstatewereobservedinmodelduck.ResultsComparedwiththemodelgroup,highandmediumdoseofcurcumincouldobviouslydecreaselivertriglyceride,serumtriglyceride,thebodyweight,liverindexandameliorateliverpathologicalchangesofmodelducks.（P0.01，P0.05).Comparedwiththemodelgroup,highdoseofcurcumincouldobviouslyincreasetheHLactivitiesofmodelducks,（P0.05).ConclusionCurcuminmaydecreaseliverlipid,serumlipidinadose-dependentmannerandthetherapeuticmechanismmayberelatedtoImprovingtheHLactivities，increasinglipidmetabolismandprotectinglivercells.Keywords：

Curcumin；Fattyliver；Duck；Liverlipid；Bloodlipid；HL天津中醫(yī)藥大學(xué)張伯禮院士根據(jù)中醫(yī)理論和多年臨床經(jīng)驗(yàn)建立了治療脂肪肝的經(jīng)驗(yàn)效方降脂清肝方。

在前期實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)成功地建立了家鴨脂肪肝模型，并對降脂清肝方全方及拆方進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明降脂清肝方全方及拆方中姜黃、何首烏具有顯著的抗脂肪肝作用。

為了深入研究該方的抗脂肪肝作用，本次實(shí)驗(yàn)主要考查了姜黃中主要成分姜黃素對家鴨脂肪肝模型肝脂、血脂的干預(yù)效果及作用機(jī)制。

現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與儀器1.1動(dòng)物及分組45日齡北京鴨70只，雌雄各半，由天津市精武禽類養(yǎng)殖有限公司提供。

采用隨機(jī)列表法分為7組，每組10只，即空白對照組（空白組）；脂肪肝模型組（模型組）；姜黃素高劑量組（高劑量組）；姜黃素中劑量組（中劑量組）；姜黃素低劑量組（低劑量組）；水煎姜黃組（姜黃組）；東寶甘泰組（東寶組）；1.2試劑血清總膽固醇(TC)測定試劑盒、血清甘油三酯(TG)測定試劑盒、高密度脂蛋白（HDL）試劑盒、低密度脂蛋白（LDL）試劑盒由北京中生北控生物科技股份有限公司提供；肝脂酶(HL)由南京建成生物工程研究所提供。

1.3主要儀器200型半自動(dòng)生化分析儀，荷蘭威圖；超速低溫離心機(jī)，德國貝克曼；JJ2000型精密電子天平，常熟雙杰測試儀器廠；友聲ACS-A型電子秤，上海申衡電子有限公司制造；鴨填飼機(jī)，北京市澤恩德平科技開發(fā)有限責(zé)任公司；722RS型分光光度計(jì)，上海第二分析儀器廠。

2方法2.1用藥及造模方法采用標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物的等效劑量折算系數(shù)法［1］參照家兔系數(shù)確定給藥劑量。

以成人等效劑量2倍作為姜黃素低劑量，4倍為中劑量，8倍為高劑量，姜黃和東寶肝泰劑量均為等效劑量的2倍。

如下：

姜黃素高劑量80mgkg-1d-1ig；中劑量40mgkg-1d-1ig；低劑量20mgkg-1d-1ig。

由天津一方科技提供（純度95%）。

姜黃1.4gkg-1d-1ig。

由天津中醫(yī)藥大學(xué)研究中心提供。

東寶甘泰0.35gkg-1d-1ig，市售，通化東寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

產(chǎn)品批號：

050707。

采用高糖飲食復(fù)制家鴨脂肪肝模型［2］。

造模同時(shí)每日按上述藥物與劑量于餐后30min灌胃1次，空白組、模型組給予等量蒸餾水。

2.2檢測指標(biāo)2.2.1一般情況觀察實(shí)驗(yàn)期間家鴨的毛發(fā)、形態(tài)、進(jìn)食、糞便及死亡情況。

2.2.2體重實(shí)驗(yàn)開始前（0d），7d，14d，21d，28d稱量各組家鴨體重。

2.2.3肝指數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)束（28d），剖腹取肝稱重，計(jì)算肝指數(shù)(肝指數(shù)=肝濕重/體重100%)。

2.2.4肝臟TG，TC取肝右葉同一部位0.3g肝組織，用無水乙醇∶丙酮（1∶1）制成10%勻漿液抽提脂質(zhì)，4℃，3000r/min離心10min，靜置48h后，取上清液用半自動(dòng)生化分析儀測定TG，TC含量。

2.2.5血清TG，TC，HDL，LDL實(shí)驗(yàn)結(jié)束，停止供食供水12h，頸靜脈取血,據(jù)試劑盒說明檢測TG，TC，HDL，LDL。

2.2.6肝脂酶(HL)活性取肝右葉同一部位0.3g肝組織，用生理鹽水制成10%勻漿液，4℃，2500r/min離心10min，取上清液0.05ml按試劑盒操作表進(jìn)行檢測，同時(shí)應(yīng)用考馬斯亮藍(lán)法檢測勻漿上清液蛋白含量，并依據(jù)公式計(jì)算出HL的活性。

2.2.7肝臟的病理學(xué)改變實(shí)驗(yàn)四周末剪斷頸靜脈放血處死，迅速剖腹，去除網(wǎng)膜及附屬組織，取出完整的肝臟，首先進(jìn)行肉眼觀察其顏色、形態(tài)。

再取肝右葉相同部位肝組織2cm2cm0.3mm做病理標(biāo)本，所有標(biāo)本均用10%中性甲醛液固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色，光鏡下評估肝脂肪變性程度。

判斷標(biāo)準(zhǔn)按照脂變細(xì)胞占肝細(xì)胞的比例進(jìn)行脂變程度分級［3］。

見表1。

表1肝細(xì)胞脂肪變性程度判斷標(biāo)準(zhǔn)2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用Spss11.5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)用s表示，計(jì)量資料比較用方差分析（ONE-WAYANOVA）；計(jì)數(shù)資料比較用非參數(shù)檢驗(yàn)（NonparametricTests）。

3結(jié)果3.1一般情況空白組家鴨毛發(fā)光澤，體態(tài)活潑，反應(yīng)敏捷，食量、排泄物均正常，無死亡情況；模型組毛色欠光澤，活動(dòng)明顯減少，個(gè)別家鴨見青綠色糞便；姜黃素各組以及姜黃組、東寶組各種外在表現(xiàn)均優(yōu)于模型組。

3.2體重實(shí)驗(yàn)初始，各組家鴨體重?zé)o顯著差異（P0.05）；實(shí)驗(yàn)期間，各組體重均直線升高。

實(shí)驗(yàn)第21天時(shí)，模型組體重3.79kg，顯著高于空白組3.64kg，P0.05；給藥組高，中劑量組為3.62，3.64kg，顯著低于模型組3.79，P0.05。

實(shí)驗(yàn)第28天時(shí)，體重變化規(guī)律同21d時(shí)。

見表2。

表2各組家鴨體重的比較與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05；n=103.3肝臟TG，TC及肝指數(shù)模型組家鴨肝組織TG非常顯著高于空白組，P0.01；各給藥組TG較模型組均有降低，其中高、中劑量組、姜黃組、東寶組，非常顯著低于模型組，P0.01。

模型組家鴨肝組織TC較空白組無顯著差異，P0.05；給藥組中高劑量組、姜黃組、東寶組非常顯著低于模型組，P0.01。

模型組家鴨肝指數(shù)非常顯著高于空白組，P0.01；各給藥組肝指數(shù)較模型組均顯著降低（P0.01，P0.05）。

見表3。

3.4血清TG，TC，HDL，LDL模型組家鴨血清TG非常顯著高于空白組，P0.01；各給藥組TG較模型組均有降低，其中高劑量組、姜黃組、東寶組，非常顯著低于模型組，P0.01；中、低劑量組，顯著低于模型組，P0.05。

模型組家鴨血清TC，非常顯著高于空白組，P0.01；各給藥組TC較模型組均有降低，其中高、中劑量組，顯著低于模型組P0.05。

表3各組家鴨肝組織TG及TC的比較與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；n=10模型組家鴨血清HDL，非常顯著高于空白組，P0.01；各給藥組HDL較模型組無顯著差異，P0.05。

模型組家鴨血清LDL，顯著高于空白組，P0.05；給藥組中東寶組，顯著低于模型組，P0.05；其余各組較模型組無顯著差異，P0.05。

見表4。

表4各組家鴨血清TG，TC，HDL，LDL的比較與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；n=103.5肝組織HL空白組及各給藥組HL活性均高于模型組，其中高劑量組、東寶組，顯著高于模型組，P0.05。

見表5。

表5各組家鴨肝組織HL的比較與模型組比較，△P＜0.05；n=103.6肝臟的病理學(xué)改變大體肉眼觀察：

空白組家鴨肝臟外觀顏色鮮紅,邊緣銳利,質(zhì)軟而富有彈性。

模型組家鴨肝臟外觀呈奶油黃或紅黃相間,體積明顯增大,邊緣變鈍,質(zhì)地變軟,切面略帶油膩感。

各給藥組肝臟外觀有不同程度的改善。

空白組10例鴨肝組織均未見脂肪變性。

模型組10例鴨肝組織均存在脂肪變性，其中++脂肪變性1例，+++6例。

鏡下可見肝細(xì)胞出現(xiàn)彌漫性大泡為主脂肪變性，且1～2區(qū)較3區(qū)為重，部分肝細(xì)胞胞漿疏松，未見明顯炎細(xì)胞浸潤及脂肪肉芽腫，匯管區(qū)大致正常，界板完整。

東寶組、姜黃組以及高、中、低劑量組均僅有部分例數(shù)鴨肝組織存在脂肪變性。

東寶組僅1例為＋脂肪變性，而中劑量姜黃素?zé)o＋脂肪變性例數(shù)。

其余各組脂變程度不同。

組織學(xué)評分由專業(yè)的病理老師評估，模型組比較空白組，脂變程度非常顯著加重，P＜0.01；各給藥組較模型組均能顯著降低家鴨肝臟的脂變程度（P＜0.05，P＜0.01）。

見表6。

表6肝細(xì)胞組織學(xué)的影響4討論脂肪肝是多種疾病和原因引起的肝內(nèi)脂質(zhì)(主要為甘油三酯)蓄積過多的一種病理狀態(tài)。

當(dāng)肝內(nèi)脂質(zhì)含量超過肝臟濕重的5%或肝組織切片光鏡下每單位面積見1/3以上肝細(xì)胞有脂滴存在時(shí)，稱為脂肪肝［3］。

近年來，我國脂肪肝的發(fā)病率逐年提高，已占到平均人口的10%［4］。

其中非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)在一般人群中的患病率大約為20%,且可能是所有肝病中最常見的疾患［5］。

因此防治脂肪肝的發(fā)生與發(fā)展具有重要意義。

現(xiàn)代臨床上多用保肝、降血脂類西藥和健脾補(bǔ)腎、化濁祛瘀類中藥進(jìn)行干預(yù)，收到了一定效果。

在實(shí)驗(yàn)研究中，中藥復(fù)方雖層出不窮，但總體上對復(fù)方的研究還比較表淺，為此我們有必要對有效復(fù)方進(jìn)行深入探究。

在前期實(shí)驗(yàn)中，我們已經(jīng)成功的復(fù)制出高糖飲食誘導(dǎo)的家鴨脂肪肝模型，且已證實(shí)降脂清肝方防治脂肪肝確有顯著效果。

并進(jìn)一步對其進(jìn)行拆方研究，探討了全方中不同藥味組成對脂肪肝的影響，發(fā)現(xiàn)單味藥中姜黃及何首烏治療脂肪肝效果顯著，且姜黃降肝TG效果更突出。

中藥姜黃，性溫、味辛苦，入肝、脾經(jīng)，有活血行氣作用。

姜黃中含有姜黃素、揮發(fā)油、糖及微量元素等，其中姜黃素是主要活性成分，具有一定的生理活性。

為了深入探討姜黃降脂肪肝的作用機(jī)制，我們對其主要成分姜黃素進(jìn)行了進(jìn)一步研究。

近年來，許多實(shí)驗(yàn)研究也表明姜黃及其主要成分姜黃素具有調(diào)節(jié)糖脂代謝和一定的保肝作用，因此被廣泛運(yùn)用于高血脂、肝炎等相關(guān)性疾病的防治中［6］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，姜黃及其姜黃素能明顯減輕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重、肝脂數(shù)，還能明顯的調(diào)節(jié)血脂和肝脂水平，并有升高肝脂酶的作用。

在病理客觀指標(biāo)上姜黃素各劑量組與姜黃組、東寶組均能改善脂肪變性程度，且姜黃素高、中劑量組優(yōu)于陽性對照藥組。

提示姜黃素抗脂肪肝與劑量呈一定的量效關(guān)系，總體上姜黃素高、中劑量優(yōu)于低劑量姜黃素的抗脂肪肝作用。

姜黃素防治脂肪肝的主要機(jī)制為：

①降低肝臟和血液TG、TC含量，以降TG明顯，抑制內(nèi)源性TG的合成，改善脂質(zhì)在體內(nèi)的分布及在內(nèi)臟器官的沉積；②增加肝細(xì)胞膜及肝細(xì)胞中HL的活性，加強(qiáng)肝臟中TG的分解，以達(dá)到減少肝細(xì)胞TG堆積的作用，