人凝血酶原復(fù)合物制造及檢定規(guī)程

人凝血酶原復(fù)合物制造及檢定規(guī)程

RequirementsforProthrombinComplex

本品系由健康人的血漿，經(jīng)低溫乙醇蛋白分離法或經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的其他方法提制，并經(jīng)病毒滅活處理而得的凍干制劑，內(nèi)含凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及適宜穩(wěn)定劑。不含防腐劑和抗生素。1基本要求

1.1.1設(shè)施與生產(chǎn)質(zhì)量管理

按中國《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求實施。廠房設(shè)施必須專用，不得與其他異種蛋白制劑混用。1.1.2原料及輔料

生產(chǎn)中所用的稀釋劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、滅活劑、佐劑，及其他化工原料，其質(zhì)量應(yīng)符合現(xiàn)行《中國藥典》或《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》的要求。

輔料品種與用量應(yīng)當(dāng)無害，不影響制品的安全性和有效性，并應(yīng)對規(guī)定的檢定方法無干擾。

化工及食品原料作為原料時，必須制定符合藥用要求的標(biāo)準(zhǔn)，并需經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。1.1.3生產(chǎn)用水

生產(chǎn)用水源水應(yīng)符合飲用水標(biāo)準(zhǔn)，純化水、注射用水及滅菌注射用水應(yīng)符合現(xiàn)行《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)。1.1.4生產(chǎn)用器具

直接用于生產(chǎn)的金屬或玻璃等器具，必須專用，并經(jīng)過嚴(yán)格清洗及去熱原質(zhì)處理或滅菌處理。2制造

2.1原料血漿

2.1.1血漿的來源、采集及質(zhì)量應(yīng)符合本版規(guī)程通則《原料血漿采集規(guī)程》要求。血漿應(yīng)無凝塊，無纖維蛋白析出，非脂血，無溶血。

2.1.2去除冷沉淀、凝血因子Ⅷ的血漿及組分Ⅲ沉淀均可用于生產(chǎn)。

2.1.3組分Ⅲ沉淀存放于-30℃以下，保存時間不得超過6個月。2.2原液制備

2.2.1可采用直接從血漿中用凝膠吸附法或低溫乙醇和聚乙二醇分離蛋白并經(jīng)凝膠吸附法制備，亦可用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的其他方法制備。生產(chǎn)過程中不能加任何防腐劑或抗生素。

2.2.2蛋白質(zhì)透析和濃縮，應(yīng)采用超濾法。澄清及除菌過濾，應(yīng)使用無石棉的介質(zhì)。

2.2.3原液檢定

按3.1項進(jìn)行。2.3半成品制備

2.3.1配制

按出品規(guī)格配制，制品內(nèi)可加適宜的穩(wěn)定劑。若加肝素，則每１.0IU因子Ⅸ肝素加量不超過0.5IU。

2.3.2半成品檢定

按3.2項進(jìn)行。2.4成品制備

2.4.1分批

應(yīng)符合本版規(guī)程通則《生物制品分批規(guī)程》的有關(guān)規(guī)定。

2.4.2分裝及凍干

按本版規(guī)程通則《生物制品分裝規(guī)程》進(jìn)行。除菌過濾分裝的制品應(yīng)立即凍結(jié)。凍干過程制品溫度不得超過35℃，真空封口。

2.4.3規(guī)格

每瓶人凝血因子Ⅸ的效價可分為100、200、300、400、1000IU5種，同時制品還含有人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ。

2.4.4包裝

應(yīng)符合本版規(guī)程通則《生物制品包裝規(guī)程》的有關(guān)規(guī)定。2.5病毒去除和滅活

生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的去除和滅活脂包膜和非脂包膜病毒處理。如果應(yīng)用滅活劑（如有機(jī)溶劑、去污劑）滅活病毒，則應(yīng)規(guī)定人用安全的滅活劑殘留量最高限值。3檢定

3.1原液檢定

3.1.1pH值

按3.3.3.2項進(jìn)行。

3.1.2活性測定

3.1.2.1人凝血因子Ⅸ活性及比活性

每1ml人凝血因子Ⅸ效價應(yīng)不低于10IU（附錄1），比活性應(yīng)不低于0.3IU/mg蛋白。3.2半成品檢定

3.2.1熱原質(zhì)試驗

按本版規(guī)程通則《生物制品熱原質(zhì)試驗規(guī)程》進(jìn)行。注射劑量按家兔體重每1kg注射30IU人凝血因子Ⅸ，應(yīng)符合規(guī)定。

3.2.2無菌試驗

按本版規(guī)程通則《生物制品無菌試驗規(guī)程》A項進(jìn)行，符合規(guī)定。3.3成品檢定

每批制品應(yīng)抽樣作全面質(zhì)量檢定，不同機(jī)柜凍干的制品分別抽樣做無菌試驗和水分測定。以下檢定項目除真空度、溶解時間、水分外，其余項目按制品標(biāo)示量加入滅菌注射用水溶解后進(jìn)行檢定。

3.3.1鑒別試驗

按《中國生物制品規(guī)程》2002年增補本《血液制品鑒別試驗》A法進(jìn)行。僅與抗人的血清產(chǎn)生沉淀線，與抗馬、抗牛、抗豬、抗羊血清不產(chǎn)生沉淀線。

3.3.2物理檢查

3.3.2.1外觀

應(yīng)為白色或灰綠色疏松體，復(fù)溶后應(yīng)為無色、淡黃色、淡藍(lán)色或黃綠色澄明溶液，不應(yīng)有異物或沉淀。

3.3.2.2真空度

以高頻火花真空測定器檢測，瓶內(nèi)應(yīng)出現(xiàn)藍(lán)紫色輝光。

3.3.2.3溶解時間

向已平衡至20～25℃的制品，加入標(biāo)示量的20～25℃滅菌注射用水，輕輕搖動，應(yīng)于15分鐘內(nèi)完全溶解。

3.3.3化學(xué)檢定

按本版規(guī)程附錄《生物制品化學(xué)及其他檢定方法》進(jìn)行。

3.3.3.1水分

應(yīng)不高于3.0%。

3.3.3.2pH值

在20℃±2℃測定，pH值為6.5～7.5。

3.3.3.3PEG含量

應(yīng)不高于0.5g/L。

3.3.3.4鈉離子含量

應(yīng)不高于160mmol/L。

3.3.3.5枸櫞酸離子含量

應(yīng)不高于25mmol/L。

3.3.4效價測定

3.3.4.1人凝血因子Ⅸ

3.3.4.1.1效價

按附錄1法測定，凝血因子Ⅸ活性應(yīng)不低于10IU。按3.3.2.3項加入的溶劑量，計算每瓶人凝血因子Ⅸ效價，應(yīng)為標(biāo)示量的80%～140%。

3.3.4.1.2比活性

應(yīng)不低于0.3IU/mg蛋白質(zhì)。

3.3.4.2人凝血因子Ⅱ效價

按3.3.2.3項加入的溶劑量及每1ml人凝血因子Ⅱ活性（附錄2），計算每瓶人凝血因子Ⅱ效價，應(yīng)不低于標(biāo)示量的80%。

3.3.4.3人凝血因子Ⅶ效價

按3.3.2.3項加入的溶劑量及每1ml人凝血因子Ⅶ活性（附錄3），計算每瓶人凝血因子Ⅶ效價，應(yīng)不低于標(biāo)示量的80%。

3.3.4.4人凝血因子Ⅹ效價

按3.3.2.3項加入的溶劑量及每1ml人凝血因子Ⅹ活性（附錄4），計算每瓶人凝血因子Ⅹ效價，應(yīng)不低于標(biāo)示量的80%。

3.3.5人凝血酶活性

按附錄5方法測定。不得有凝塊或纖維蛋白析出。

3.3.6肝素含量

按附錄6法測定，每1IU人凝血因子Ⅸ肝素含量應(yīng)不高于0.5IU。

3.3.7活化的凝血因子

按附錄7方法測定，凝固時間應(yīng)不低于150秒。

3.3.8無菌檢查

按本版規(guī)程通則《生物制品無菌試驗規(guī)程》A項進(jìn)行，符合規(guī)定。

3.3.9異常毒性檢查

按本版規(guī)程通則《生物制品異常毒性試驗規(guī)程》進(jìn)行。豚鼠每只注射供試品5ml（每1ml含10IU人凝血因子Ⅸ），小鼠每只注射供試品0.5ml（每1ml含10IU人凝血因子Ⅸ），應(yīng)符合規(guī)定。

3.3.10熱原質(zhì)檢查

按本版規(guī)程通則《生物制品熱原質(zhì)試驗規(guī)程》進(jìn)行。注射劑量按家兔體重每1kg注射30IU人凝血因子Ⅸ，應(yīng)符合規(guī)定。

3.3.11HBsAg

按試劑盒說明書測定，應(yīng)為陰性。

3.3.12根據(jù)病毒滅活方法，應(yīng)增加相應(yīng)的檢定項目。若采用磷酸三丁酯和吐溫-80法滅活病毒，則應(yīng)檢測磷酸三丁酯和吐溫-80殘留量。

3.3.12.1磷酸三丁酯殘留量