8.動物細胞融合與單克隆抗體

動物細胞融合與單克隆抗體專項2細胞工程蛇身馬首鹿角獸腳鬣尾鷹爪魚鱗虎須。。。受精卵來自精子來自卵細胞一、動物細胞融合1、動物細胞融合的過程不同DNA的兩個細胞AB思考題1、植物體細胞雜交中誘導原生質(zhì)體融合慣用的辦法有哪些？離心、振動和電激等物理辦法；PEG等化學辦法2、動物細胞融合能運用上述兩類方法嗎？尚有其它辦法嗎?能能夠運用滅活的病毒進行誘導滅活病毒誘導細胞融合的原理用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程細胞核病毒顆粒細胞核滅活喪失感染性保存融合活性為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不同DNA的兩個細胞滅活病毒誘導細胞融合融合后的細胞進行有絲分裂AB3、植物體細胞雜交過程應先進行原生質(zhì)體融合再進行組織培養(yǎng)形成完整的個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個體嗎？4、你能歸納出什么叫做動物細胞融合嗎？不能思考題2、動物細胞融合的概念動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一種細胞（單核的雜交細胞）的過程。4、動物細胞融合的應用生物新品種哺育細胞遺傳細胞免疫腫瘤運用動物細胞融合技術誘導形成雜交瘤細胞，制備單克隆抗體3、動物細胞融合的意義突破了有性雜交辦法的局限，使遠緣雜交成為可能。如果你掌握了動物細胞融合技術，你想用它來解決什么問題？植物體細胞雜交和動物細胞融合在原理、細胞融合的辦法、誘導辦法等方面有什么差別呢？小結(jié)：雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細胞壁脫分化愈傷組織再分化植物細胞的融合植物組織培養(yǎng)植物細胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細胞AB去壁去壁人工誘導辦法？增進融合的辦法？融合完畢的標志植物細胞B復習:植物體細胞雜交技術重要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學辦法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學（聚乙二醇）誘導辦法使細胞分散后誘導細胞融合去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合細胞融合的辦法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目植物、動物細胞融合的比較1.抗體是由何種細胞產(chǎn)生的？提問？二、單克隆抗體2.運用已學知識，考慮如何得到抗體？

抗體抗原刺激漿細胞通過免疫的B淋巴細胞（漿細胞）動物體內(nèi)抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)辦法從血清中分離抗體多個漿細胞動物體內(nèi)多個抗體抗原

抗原動物體內(nèi)刺激漿細胞

抗體抗原不純抗體不純不能增殖產(chǎn)生大量抗體二、單克隆抗體產(chǎn)量低、純度低，抗體特異性差3.此辦法得到的抗體的缺點是什么？該法制備抗體的特點：1、如何確?？贵w的純度？如何獲得化學性質(zhì)單一、特異性強的高產(chǎn)抗體？（一）、單克隆抗體的制備設計方案：小鼠骨髓瘤細胞－－能無限增殖2、如何提高抗體的產(chǎn)量？一種B淋巴細胞－－只分泌一種特異性抗體雜種細胞小鼠骨髓瘤細胞－－能無限增殖一種B淋巴細胞－－只分泌一種特異性抗體BB-BB-瘤瘤-瘤瘤3、細胞融合后培養(yǎng)液中有幾個細胞？4、如何從中篩選出雜交瘤細胞？用特定的選擇性培養(yǎng)基進行篩選：在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞5、如何選擇出分泌所需專一抗體的雜交瘤細胞？克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。經(jīng)多次篩選，獲得足夠數(shù)量的能分泌所需專一抗體的細胞。體外大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，可提取大量的單克隆抗體。6、如何獲得大量單克隆抗體？總結(jié):單克隆抗體的制備過程分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把下列代表單克隆抗體制備過程環(huán)節(jié)的圖解的字母按對的次序連接起來。次序是？（一）、單克隆抗體的制備誘導其融合的辦法有哪些？融合后培養(yǎng)液中有幾個細胞如何篩選出雜交瘤細胞，雜交瘤細胞有何優(yōu)點注射特定抗原的目的是什么為什么要進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測，多次篩選大量增殖雜交瘤細胞獲得單克隆抗體的辦法制備過程由單個B淋巴細胞通過無性繁殖（克?。?，形成基因型相似的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。單克隆抗體最重要的優(yōu)點：特異性強、敏捷度高并可能大量制備。①在基礎理論研究中含有重要意義

②（二）、單克隆抗體的應用診療試劑——最廣泛應用精確、高效、簡易、快速同位素標記的單克隆抗體，在特定組織中成像，定位診療有關疾病運載藥品(“生物導彈”—單抗導向，藥品為彈頭)③用于治療疾病和運載藥品比較植物體細胞雜交和單克隆抗體的制備比較項目植物體細胞雜交單克隆抗體的制備原理融合前處理促融方法

用途過程第一步第二步第三步第四步細胞膜的流動性、細胞的全能性膜的流動性、細胞增殖酶解法去壁小鼠免疫解決、細胞分散物理法化學法物理、化學、生物法原生質(zhì)體的制備融合親本細胞的準備原生質(zhì)體的融合與篩選動物細胞融合與兩次篩選雜種細胞的形成與培養(yǎng)產(chǎn)特定抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng)雜種植株的鑒定單克隆抗體的分離提純單抗有助于疾病的診療、治療、防止獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株小結(jié)兩個過程動物細胞融合過程單克隆抗體制備過程三個“一”一種誘導細胞融合的新辦法－－滅活病毒一種新細胞－－雜交瘤細胞一種優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、敏捷度高的優(yōu)勢1、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交瘤細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是A.通過免疫的B淋巴細胞B.不通過免疫的T淋巴細胞C.通過免疫的T淋巴細胞 D.不通過免疫的B淋巴細胞B不要灰心，再來一次！ADC不要灰心，再來一次！不要灰心，再來一次！恭喜你，答對了！再接再厲！知識闖關2、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞融合后要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細胞是①B淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞本身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞本身融合細胞⑤雜交瘤細胞A.①②③④B.①③⑤C.②④D.①③B不要灰心，再來一次！ADC不要灰心，再來一次！不要灰心，再來一次！恭喜你，答對了！再接再厲！3、試管嬰兒、試管苗和克隆羊這三者能夠說是當代生物科技的杰出成果,下列對其生物學原理及技術的敘述,對的的是A.都屬于無性生殖B.都運用了細胞工程的某些技術C.都不會發(fā)生基因重組

D.都體現(xiàn)了已分化的細胞含有全能性B解題思路探究對克隆與組織培養(yǎng)、試管動物(嬰兒)分辨不清克隆組織培養(yǎng)試管動物(嬰兒)生殖方式無性無性有性遺傳物質(zhì)來源2個親本1個親本2個親本性別決定提供核親本一般沒有精子類型用途優(yōu)良種畜快速繁育,可選擇性別快速繁殖無病毒植株解決不孕不育4、將小鼠骨髓瘤細胞與一種B淋巴細胞融合，可使融合的細胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體，其根據(jù)是

A.B淋巴細胞能夠產(chǎn)生抗體，但不能無限增殖

B.B淋巴細胞只有與骨髓瘤細胞融合后才干產(chǎn)

生抗體

C.骨隨瘤細胞能夠無限增殖，但不能產(chǎn)生抗

體

D.骨髓瘤細胞能夠產(chǎn)生抗體，但不能無限增

殖多選題（A、C）下課啦！5、右圖為某同窗根據(jù)雜交瘤技術的辦法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案。據(jù)圖回答：⑴該方案能達成預期效果嗎？因素是⑵圖中②為過程，可在誘導下完畢。雜交瘤細胞繁殖進行的是分裂，該細胞的特點是⑶淋巴細胞能與骨髓瘤融合成一種細胞，兩種細胞膜也能融合在一起，闡明細胞膜不能沒有抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生此種抗體的B細胞細胞融合有絲滅活的病毒或聚乙二醇又能產(chǎn)生專一的抗體。既能快速大量繁殖，含有一定的流動性⑷將誘導后產(chǎn)生的多個細胞，放在含培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。⑸該方案的目的是。單克隆抗體的精擬定義為。A.一類特殊抗體B.無性繁殖系C.單一抗體細胞的無性繁殖系D.單一抗體細胞的有性繁殖系⑹單克隆抗體與普通的血清抗體相比，含有的優(yōu)點是。特定的選擇性制備單克隆抗體C特異性強，敏捷度高并可大量制備抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的含有免疫功效的球蛋白。什么是抗體？已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩條DNA合成途徑，但普通不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不停分裂增殖。小資料：思考與探究1.植物體細胞雜交技術與動物細胞融合技術有什么不同？提示：植物體細胞雜交技術與動物細胞融合技術基本相似，不同的是植物體細胞融合前需去掉細胞壁，然后再融合；動物細胞融合是兩個體細胞直接融合。思考與探究

2.制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞？提示：動物在免疫反映的過程中，每一種B淋巴細胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B淋巴細胞大量增殖。B淋巴細胞含有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細胞是一種癌細胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細胞，它會兼有兩個親本細胞的特性──在體外培養(yǎng)條件下能不停增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。4.為什么不用兩個而要用多個細胞進行動物細胞間的融合？就現(xiàn)在慣用的細胞融合辦法來看，不管是用物理的、化學的辦法，還是生物的辦法，其融合率都不可能是100%。僅用兩個細胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細胞。更重要的是，即使兩個細胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者盼望得到的細胞類型。現(xiàn)在動物細胞融合技術最有價值的應用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來闡明這一問題。我們懂得，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達百萬種以上，但是每一種B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一種脾細胞（含B淋巴細胞）和一種瘤細胞雜交，我們不能擬定該脾細胞分泌的抗體與否正是我們所需要的；若用大量的脾細胞和瘤細胞進行融合，就能夠從融合細胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。5.如何進行雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？融合后的細胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細胞就是雜交瘤細胞。但這些雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞，普通用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細胞稀釋，用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細胞不超出一種，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體（慣用酶聯(lián)免疫吸附實驗法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細胞還不能確保是來自單個細胞，挑選陽性孔的細胞繼續(xù)進行有限稀釋，普通需進行3～4次，直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。對位訓練3.運用細胞工程辦法，以SARS病毒核衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體。下列有關敘述對的的是（）A.用純化的核衣殼蛋白重復注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生的血清抗體為單克隆抗體B.體外培養(yǎng)單個B淋巴細胞能夠獲得大量針對SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合，經(jīng)PEG誘導融合后的細胞均為雜交瘤細胞D.運用該單克隆抗體與SARS病毒核衣殼蛋白特異性結(jié)合的辦法可診療出病毒感染者D1、從母羊甲的體細胞中取出細胞核，注入到母羊乙去掉核的卵細胞中，融合后的細胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生小羊的大多數(shù)性狀() A.難以預測B.像甲C.像乙D.像丙2．（2004年，全國）用動物細胞工程技術獲取單克隆抗體，下列實驗環(huán)節(jié)中錯誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞B．用纖維素酶解決B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞C．用聚乙二醇作誘導劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合D．篩選雜交資金積累細胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體基礎訓練鞏固BB3.動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較