藥品衛(wèi)生檢驗方法總則

藥品衛(wèi)生檢驗方法總則

藥品衛(wèi)生檢驗方法總則

1.抽樣

1.1供試品一樣按批號抽樣

1.2抽樣時，凡發(fā)覺有專門或可疑的樣品，應抽選有疑咨詢

的樣品，但因機械損害明顯破裂的包裝不得作為樣品。

1.3凡已能從藥品、瓶口（外蓋內(nèi)側(cè)及瓶口周圍）外觀看出

長蜻、發(fā)霉、蟲蛀以及變質(zhì)的藥品，可直截了當判為不合格品，無需再抽

樣檢驗。

1.4抽樣量一樣應為檢驗用量（2個以上最小包裝單位）的

3倍量。

1.5一樣采納隨機抽樣方法抽樣。

2.供試品儲存

2.1供試品在檢驗之前，應儲存在陰涼干燥處（勿冷藏或冷

凍），以防供試品中的污染菌因保藏條件所引起致死、損害或繁育。

2.2供試品在檢驗之前，應保持原包裝狀態(tài)，嚴禁開啟。包

裝已開啟的樣品不得為供試品。

3.檢驗

3.1供試品檢驗項目按中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的《藥品

衛(wèi)生標準》確定。

3.2檢驗的全過程必須符合無菌技術要求。

3.3除另有規(guī)定外，供試品制備成供試液后，應在平均狀態(tài)

取樣。

3.4供試品制成供試液后，應在1小時內(nèi)注皿操作完畢。

4.檢驗量

4.1所有劑型的檢驗均需取自2個以上包裝單位。

4.2口服固體制劑

中成藥丸劑、片劑、沖劑、散劑、膠劑、茶劑、曲劑、膠囊劑等

檢驗量均為10g。蜜丸除應取自2個以上包裝外，還應取自4丸以上。

化學藥品、生化藥品的粉劑、膠囊劑、片劑、沖劑、滴丸劑等檢驗量為1

0gO

4.3口服液體制劑：糖漿劑、乳劑、合劑、溶液劑、混懸劑、

酒劑等檢驗量為10ml。

4.4半固體制劑：膏劑等檢驗量為10g0

4.5外用液體制劑：滴眼劑、滴鼻劑及其他液體制劑檢驗量

為10ml。

4.6外用栓劑、軟膏劑、眼膏劑等檢驗量為5g。

4.7膜劑，除另有規(guī)定外，中藥膜劑檢驗量取30?50平

方厘米，化學藥及生化藥膜劑取10平方厘米，以上均需取自2個以上包

裝并4片以上。

4.8專門貴重的或極微量包裝的藥品，其檢驗量可酌減。除

另有規(guī)定外，口服固體制劑不得低于3g；液體制劑采納原液者不得少于

6ml、采納供試液者不得少于3ml；外用藥品不得少于5g。

4.9檢查活蜻的取樣量，見活蜻檢驗法。

5.供試液的制備

5.1一樣供試品的供試液制備方法。

5.1.1固體供試品稱取10g,置研缽中，以100m

1稀釋劑（生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（0.1mo1/L）分次加入研磨

細勻，并轉(zhuǎn)移至250ml錐形瓶中，使成1：10供試液。或?qū)⒐┰嚻?/p>

和稀釋劑同置勻漿儀中，以轉(zhuǎn)速3000?5000轉(zhuǎn)/分，開機1一2

分鐘。對吸水膨脹或粘度大的供試品，可制成1：20供試液。

5.1.2液體供試品量取10ml,加入含90ml稀釋

劑的250ml錐形瓶中，混勻成1：10供試液。合劑（含王漿、蜂蜜

者）、滴眼劑等能夠原液為供試液。

5.1.3半固體供試品稱取10g,加入含100m1稀

釋劑的250ml錐形瓶中，混勻成1：10供試液。

5.2專門供試品的供試液制備方法

5.2.1非水溶性基質(zhì)供試品供試液的制備方法

（1）軟膏劑、乳膏劑

吐溫西黃蓍膠（或峻甲基纖維素鈉）法稱取供試品5g,置研

缽或燒杯中，

加吐溫一80①8ml,充分研勻。加入西黃蓍膠或竣甲基纖維素鈉

②2.5g,充分研勻以92m145（的稀釋劑，邊加邊研磨，使成平

均乳劑，并移至250ml錐形瓶中，即為1：20供試液。注①吐溫

—80預先以121。（2高壓滅菌20分鐘。②西黃蓍膠、竣甲基纖維

素鈉預先以140（干熱滅菌30分鐘。一一原注液體石蠟吐溫法稱取

供試品5g,分不量取液體石蠟（液體石蠟，預先以16（TC干熱滅菌2

小時）20ml,吐溫一8020ml,稀釋劑60m1o先將供試品

置研缽中，邊研磨邊加液體石蠟，然后再邊研磨邊滴加吐溫一80,研磨

平均后，再邊加稀釋劑邊研磨，初始每次約1ml,待起團塊時，加入量

可增至約3ml,稍停1分鐘，再輕輕研磨至乳化，將稀釋劑加完為止。

即得1：20供試液。

（2）栓劑稱取供試品5g,置250ml錐形瓶（內(nèi)含玻璃

珠若干粒）中，加適量稀釋劑，置45P水浴浸泡10分鐘使融，加吐溫

—802?4ml,振搖使之乳化，再加稀釋劑（稀釋劑和吐溫總量為5

0ml）制成1：10供試液。

（3）油劑量取供試品10ml,加入1%吐溫一80稀釋劑

90m1,混勻，制成1：10供試液。

5.2.2膠囊劑、膠丸及膠劑供試液制備方法

（1）膠囊劑、膠丸劑稱取供試品10g置錐形瓶中，加入稀

釋劑100m1,于452水浴中振搖至溶，即為1：10供試液。

（2）膠劑取膠劑若干，搗碎，稱取10g,再用研缽研細，

轉(zhuǎn)入250ml錐形瓶中，加入稀釋劑100ml,置于45。（2水浴中，

振搖使溶，即為1：10供試液。

5.2.3腸溶膠囊（片）劑供試液制備方法

稱取供試品10g,置錐形瓶中并放入45C水浴，加入PH

6.8磷酸鹽緩沖液（附錄二2）100ml,保溫、振搖，使腸衣溶解,

混勻，即得1：10供試液。

5.2.4氣霧劑供試液制備方法。

將供試品置冰室內(nèi)2小時后，取出，用滅菌鋼錐小心鉆孔，便拋

射劑緩慢開釋，然后再用滅菌注射器加入適量稀釋劑，混勻后吸取相當于

10g或10m1的供試品，再稀釋成1：10供試液。

5.2.5膜劑供試液制備方法

中藥膜劑除另有規(guī)定外，取30—50平方厘米，將藥膜剪成

碎片，置錐形瓶中，加稀釋劑適量，使每10ml含1平方厘米濃度，浸

泡10?15分鐘，搖勻，即得?；瘜W藥膜劑除另有規(guī)定外，取10平

方厘米，置錐形瓶中，加稀釋劑100ml,浸泡、振蕩使溶，即得。必

要時，可置452水浴中助溶。

5.3含抑菌成分供試品的供試液制備方法。

凡含有防腐劑或抑菌成分且阻礙檢驗（陽性對比操縱菌不生長）

的供試品，可按照供試品的性質(zhì)，操縱菌的特性及檢驗條件等按下列方法

之一（或兩種以上方法聯(lián)合應用）及其他適宜方法處理后，作操縱菌檢驗。

5.3.1離心沉淀法

可溶性供試液取供試液10ml,置入刻度離心管中，以30

00轉(zhuǎn)/分以上離心沉淀30分鐘，用毛細吸管吸取上清液棄掉，留下管

底約2ml殘余液，將其全部洗入增菌培養(yǎng)基中，作操縱菌檢驗?；鞈夜?/p>

試液取供試液10ml,置刻度離心管中，先以500轉(zhuǎn)/分離心沉淀

5分鐘，取其上層液移入另一離心管中，再經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分以上離心沉

淀30分鐘，棄去上清液，保留約2ml殘余液，全部洗入增菌培養(yǎng)基中，

作操縱菌檢驗。

本法適用于一些抑菌作用不強的中、西藥品，如蜜丸、水丸、片

劑、散劑、沖劑、膠囊劑及液體制劑。應用本法須嚴防操作污染，并注意

上層液或上清液和管底殘渣的分離，幸免沉渣混入其中。

5.3.2薄膜過濾法

取規(guī)定量的供試液，按1m1加生理鹽水約10ml的比例，混

勻，置入薄膜過濾器內(nèi)，減壓過濾至干，再以生理鹽水或其他適宜溶劑沖

洗濾膜3次，每次50m10取出濾膜，剪成2—4片，使每片相當于供

試品1g或1m1。放入增菌培養(yǎng)基中，作操縱菌檢驗。

本法適用于水溶性抑菌成分的中、西藥品和滴眼劑等的制劑“滅

活”處理。

安放濾膜時，注意濾膜與濾器應密合，防止濾膜破舊、漏液。本

法所用微孔濾膜孔徑應為0.45±0.02um。

5.3.3鈍化劑中和法

磺胺類藥物中和法取規(guī)定量供試液，加入含1%對氨基苯甲酸

0.5ml的100m1增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。

本法適用于含磺胺較少的制劑、如三磺軟膏、消炎眼藥水、斑馬

眼藥水等。

應用本法可因供試品不同，對氨基苯甲酸的用量，可適當調(diào)整。

含重金屬藥物中和法取規(guī)定量供試液，加入硫乙醇酸鈉一胱氨

酸增菌液(附錄三36)100m1中，作增菌培養(yǎng)即得。

本法適用于含重金屬鹽類藥物的檢驗，如磺胺啥唳銀軟膏等。

含洗必泰等制劑中和法取規(guī)定量供試液，加入含適量吐溫一8

0等表面活性劑的增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。

本法適用于洗必泰含片、洗必泰栓、霉滴栓及其他含抑菌成分的

供試品。

應用本法須注意，由于供試品不同，用量應預試，表面活性劑的

用量應預試，

用量不可過大，否則本身亦產(chǎn)生抑菌作用。

5.3.4沉降法

(1)取規(guī)定量供試液，自然沉降5分鐘，吸取上層液于增菌液

中，作增菌培養(yǎng)即得。

(2)取規(guī)定量供試液，自然沉降5分鐘，吸取上層液于含1%

對氨基苯甲酸1ml的增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。

本法適用于水溶性小的抗菌制劑檢驗，如磺胺類藥。（1）法適用

于單一成分固體制劑，如磺胺喀咤片檢驗；（2）法適用于復方磺胺制劑，

如復方磺胺喀嗅片、復方新諾明片等檢驗。

應用本法時，供試品應充分研細，并與稀釋劑充分搖勻，使污染

菌分散于液相中；沉降時刻不宜超過5分鐘，以防菌細胞下沉；取上層液

時，幸免吸入藥渣。

5.3.5稀釋法

取供試液10ml,加入較大量增菌液中（使該供試品稀釋至陽

性對比菌能生長的濃度），作增菌培養(yǎng)即得。

本法適用于抑菌作用不強的中藥、化學藥品檢驗。

6.對比試驗

6.1陰性對比試驗測試檢驗全過程無菌技術的可靠性。

6.1.1菌數(shù)測定陰性對比試驗：用吸管從供用的稀釋劑中

各吸取1m1于4個無菌平皿中，分不按細菌數(shù)、霉菌數(shù)測定方法注皿培

養(yǎng)、檢查，不得長菌。

6.1.2操縱菌檢驗陰性對比試驗：用吸管從供用的稀釋劑

中吸取1ml于增菌液中，按操縱菌檢驗方法檢查，不得長菌。

6.2陽性對比試驗檢查供試品是否對操縱菌生長產(chǎn)生干擾

作用及檢查培養(yǎng)條件是否適宜。

6.2.1陽性對比試驗方法同供試品檢驗，于供試液中加

入一定量的相應對比菌，作平行試驗。

6.2.2規(guī)定陽性對比菌株：大腸桿菌（CMCC（B）4

4102）、

沙門氏菌（CMCC（B）50094、綠膿桿菌（CMCC（B）

10104）

、金黃色葡萄球菌（CMCC（B）26003）及破傷風桿菌（C

MCC(B)

64067)o

6.2.3對比菌的加入量為50?100個，可事前預試確

定。需氣菌常用計數(shù)方法，取37（培養(yǎng)18?20小時的新奇肉湯培養(yǎng)

物，10倍遞增稀釋至0.000006,取其0.1ml于一般肉湯瓊

脂平板表面涂抹或取0.0000007稀釋液1m1以注皿法進行菌數(shù)

測定。

6.2.4當供試品未檢出供試菌時，而陽性對比試驗也未能

檢出，不能做出供試品未檢出操縱菌的結論。

6.2.5陽性對比試驗操作必須與供試品檢驗操作嚴格分開,

幸免交叉污染。

7.檢驗報告單位

7.1細菌數(shù)、霉菌數(shù)和酵母菌數(shù)的測定一樣以1g或lm1

為單位的菌落數(shù)表示。中藥膜劑以10平方厘米、化學藥及生化藥膜劑以

1平方厘米為單位的菌落數(shù)表示。眼科用藥的霉菌和酵母菌數(shù)以1g或1

m1為單位的菌落數(shù)或“未檢出”表示。

7.2操縱菌檢驗報告一樣以1g或1ml、中藥膜劑以1

0平方厘米、

化學及生化藥膜劑以1平方厘米為單位報告“檢出”或“未檢出”。

8.復試

8.1菌數(shù)測定不合格者應復試。操縱菌檢驗以1次檢出為準,

不再復試，

但應保留檢出菌株1個月備查。

8.2復試項目以不合格項目為準，作單項復試。

8.3復試需另取同批號樣品，測定2次。

8.4復試報告以3次測定結果的算術平均值報告。

8.5眼科用藥的霉菌和酵母菌數(shù)復試報告，須以二次復試結

果均不得長菌，方可判定合格。

9.專門抽樣

不符合部頒藥品衛(wèi)生標準規(guī)定的藥品，經(jīng)衛(wèi)生行政部門審批準予

在不阻礙外觀與質(zhì)量的前提下，充許采取適宜措施進行處理，處理后的藥

品抽樣按本款進行。

9.1抽樣方法

大包裝抽樣，按出廠的大包裝，10件以下抽1件，10件以上

每增加20件加抽1件，最后不足10件者不加抽，超過10件加抽1件。

小包裝抽樣，按規(guī)定手續(xù)，從大包裝中隨機抽取小包裝2個以上單位為供

成品。

9.2檢驗項目：按部頒《藥品衛(wèi)生標準》規(guī)定檢驗，不得單項

檢驗。

9.3檢驗報告

9.3.1測定菌數(shù)報告：以各次測定結果全部平均值報告。

9.3.2操縱菌按全部復試檢驗結果報告①，如全部復試均未

檢出操縱菌時，報告為：“按規(guī)定抽樣檢驗結果未檢出XX菌"；①如全部

抽樣中任一樣品檢出操縱菌時，報告為：“按規(guī)定抽樣檢驗，檢出XX菌,

不符合藥品衛(wèi)生標準規(guī)定注①報告中寫出具體的操縱菌名稱。

細菌數(shù)測定

細菌數(shù)是指規(guī)定單位的非規(guī)定滅菌藥品制劑中污染活細菌的數(shù)

量。是判定藥品受到細菌污染程度的標志。其內(nèi)含是多義的。細菌數(shù)愈多,

表明藥品受到致病微生物污染的可能性以及藥品制劑的變質(zhì)可能性也愈

大，安全性也就越差。同時細菌數(shù)測定也是對生產(chǎn)單位的藥品原輔料、器

具設備、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛(wèi)生狀況進行衛(wèi)生學評判的綜合

依據(jù)之一。

細菌數(shù)測定采納平板菌落計數(shù)法，是一種活菌計數(shù)法。測定結果

只反映出在規(guī)定條件下生長的細菌數(shù)，不可能包括在本法條件下不生長的

細菌，因而測定數(shù)只可能低于實際的污染數(shù)。此外，測定中1個細菌可能

繁育成1個菌落，而一群也可能只形成1個菌落，以及污染的不平均性等

等緣故，極易造成測定差異。故在測定細菌數(shù)時，必須嚴格按本法所規(guī)定

條件操作。

1.培養(yǎng)基、試劑

1.1肉湯瓊脂（或0.001%TTC肉湯瓊脂）（附錄三2,

4）

1.2PH7.2磷酸鹽緩沖液（0.Imol/L）或生理

鹽水（附錄二）

2.檢驗程序

制備稀釋

-稀釋---------------

I供試品I----------I1:10I------------I1:10

0I---------->I1：1000I

---------I供試液II供試液

II供試液I

?---------------------

llmlI1m

1I1m1

I平皿II平皿

I|平皿|

I2?3個II2?3

個II2?3個I

I注皿

I干

I培養(yǎng)

30?35℃148

±2小時

I菌落計

數(shù)I

I報告

3.操作步驟

3.1供試液制備，經(jīng)陰性對比取樣后，按各類制劑制備供試

液的方法（總

則5）制備。

3.2稀釋及吸樣

稀釋級一樣應采納3級。

稀釋取1ml吸管1支，吸取混勻的1：10供試液（或原液、

1：20供試液）1ml,在離稀釋劑液面上約1cm處，沿管壁注入裝

有9ml的稀釋劑的試管中，混勻成1：100（或1：10、1：20

0）的稀釋液。

吸樣用上述吸管分不取1：10供試液（或原液、1：20供

試液）1ml,注入2?3個平皿中。

以另一支1ml吸管，按上述操作，作下一級的稀釋與吸樣。

操作時，應專門注意每次吸液前必須使稀釋液充分混勻（吸管反

復吹吸數(shù)次或充分震蕩），以使菌體充分平均分散，降低測定誤差。

3.3傾注瓊脂（注皿）與干燥

3.3.1事先將肉湯瓊脂融解、置45C水浴中，備用

3.3.2當供試液及各級稀釋液均注入平皿后，以上述瓊脂

傾注入平皿，

每皿約15ml,趕忙轉(zhuǎn)動平皿，使樣液與瓊脂混勻后置水平臺上待

凝。

3.3.3干燥瓊脂凝固后，在凈化條件下開蓋倒置或換滅

菌的陶瓦蓋，

使平板干燥，減少平板表面的水分，防止菌落蔓延生長。干燥時刻一

樣在3小時左右，干燥時刻計入培養(yǎng)時限。

3.4將上述平板倒置于30?35匕培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48±

2小時。

4.菌落計數(shù)

4.1細菌菌落是1個菌細胞或菌細胞團在局限位置上，經(jīng)一

定條件繁育成肉眼可見的細菌群體。由于細菌種類繁多，形成菌落大小、

形狀、色澤、透亮度等皆因種而異，差不甚大。計數(shù)時一樣用透射光于平

板背面或正面認真觀看。不要漏計瓊脂層內(nèi)和平板邊緣生長的菌落。并須

注意細菌菌落與藥渣或培養(yǎng)基的沉淀物，酵母菌及霉菌菌落的區(qū)不。必要

時，用顯微鏡鑒不。

4.2用肉眼直截了當計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然

后用5?10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.3若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可辨論時仍以

2個或2個以上菌落計數(shù)。

4.4平板上有片狀菌落或花斑樣菌落蔓延生長以及平板受到

污染的情形，該平板計數(shù)無效。

4.5運算各稀釋級平均平板菌落數(shù)。

4.5.1當用一稀釋級使用2個平板時，應采納2個平板菌

落數(shù)的均值為平均平板菌落數(shù)。若2個平板菌落數(shù)相差在1倍以上時，該

稀釋級不宜采納，但不包括2個平板菌落數(shù)均在15個以下的情形①。

注①15以下兩平板菌落數(shù)承諾幅度0?4、1?7、2?9、

3?10、

4?12、5?14、6?15、7?17、8?18、9?19、

10?20o

4.5.2當同一稀釋級使用3個平板時，應采納3個平板菌

落數(shù)的均值為平均菌落數(shù)。若其中1個平板菌落數(shù)與其他2個相近的平板

菌落數(shù)的均值相差1倍以上時，該平板菌落數(shù)不能參與平均，但不包括平

板菌落數(shù)均在10個以下的情形②。注②10以下3平板最大與最小菌

落數(shù)的承諾幅度，0?3、1?5、2?7、3?9、4?10、5?1

2、6?13、7?14。

5.菌數(shù)報告規(guī)則

一樣宜選取平均平板菌落數(shù)在30~300間的稀釋級，作為菌

數(shù)運算的依據(jù)。

5.1若有1個稀釋級的平均平板菌落數(shù)處在30?300時,

將該稀釋級的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，為報告菌數(shù)。

5.2若有2個稀釋級的平均平板菌落數(shù)處在30?300時,

先運算兩稀釋級菌落數(shù)的比值。

高稀釋級的平均平板菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)

比值=-------------------------------------

低稀釋級的平均平板菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)

5.2.1當比值W2時，以兩級的菌落數(shù)均值為報告菌數(shù)。

5.2.2當比值＞2時，以低稀釋級平均平板菌落數(shù)乘以稀

釋倍數(shù)為報告菌數(shù)。

5.3若有3個稀釋級的平均平板菌落數(shù)均處在30?300

時，采納后2個稀釋級運算級間比值。

5.3.1當比值W2時，以兩級的菌落數(shù)的均值為報告菌數(shù)。

5.3.2當比值＞2時，以低稀釋級平均平板菌落數(shù)乘以稀

釋倍數(shù)為報告菌數(shù)。

5.4若各稀釋級平均平板菌落數(shù)均在300以上，按最高的

稀釋級的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報告菌數(shù)，或適當增加稀釋級，

重作測定后報告結果。

5.5若各稀釋級的平均平板菌落數(shù)均不在30?300間，

其中一稀釋級的平均平板菌落數(shù)大于300,相鄰稀釋級的平均平板菌落

數(shù)又小于30時，以最接近30或300的稀釋級平均平板菌落數(shù)乘以稀

釋倍數(shù)為報告菌數(shù)。

5.6若各稀釋級平均平板菌落數(shù)均小于30時，按最低稀釋

級的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報告菌數(shù)。但若應用原液為供試液，

當1：10稀釋級與原液的平均平板菌落數(shù)相等或大于時，應以培養(yǎng)基稀

釋法測定，按測定結果報告菌數(shù)。

培養(yǎng)基稀釋法：

吸取供試液（原液或1：10供試液）1ml,注入5個平皿內(nèi)

（每皿0.2

m1,總量為1ml）。共作3份，共15個平皿。每皿傾注融解并冷

至451左右的一般肉湯瓊脂約15m1,旋轉(zhuǎn)混合，冷凝后按規(guī)定培養(yǎng)

溫度與時限培養(yǎng)、計數(shù)。

將每m1注入5個平板的菌落計數(shù)結果合并為每m1菌落數(shù)，共

得3組數(shù)據(jù)。取3組數(shù)據(jù)平均值乘稀釋倍數(shù)，為報告菌數(shù)。

5.7若各稀釋級的平均平板菌落數(shù)均無菌落生長或測定數(shù)在

10個以下時，報告菌數(shù)為V10個。

表1細菌數(shù)報告規(guī)則舉例

III供試品稀釋倍數(shù)I級

間II報告數(shù)I

I規(guī)則I原液I--------------------------------------------1

I菌落數(shù)II

III-11—2I一3|比

值II書寫I

III10I10I10I

I5.1I-

I16400I16X10或160001

IIIIII

1131

15.2.11-127601295146I1.6I

37750I38X10或380001

3

15.2.21-128901271160I2.2

27100127X10或270001

111111

111111

131

15.3.11-1239120213511.7

27600128X10或280001

111111

111111

131

15.3.21-1236|19614212.1

19600120X10或200001

111111

111111

141

15.41—1不可計|4650|5131-—

5131000151X10或5100001

111111

111111

131

15.51-1不可計13051121-—

30:500130X10或300001

15.61-124I19I121-—

2，40124X10或240I

15.6|22.3|27I7I—1—

270127X10或270I

15.71-10.6I0I01—

61<101

6.報告數(shù)書寫

6.1菌落數(shù)在100個以內(nèi)時，按實測數(shù)書寫報告。

6.2菌落數(shù)大于100時，取二位有效數(shù)字，第三位數(shù)按有

效數(shù)字處理規(guī)則處理，為簡便計，也可用10的指數(shù)報告。

霉菌和酵母菌數(shù)測定

霉菌和酵母菌數(shù)是指規(guī)定單位非規(guī)定滅菌藥品制劑中污染的霉菌

和酵母菌的活菌數(shù)量。

霉菌和酵母菌廣泛分布于自然界，土壤、空氣及水中都有它們的

菌體及抱子存在。因而在藥品生產(chǎn)、貯藏等各個環(huán)節(jié)均可污染藥品，以致

引起藥品變質(zhì)，危害人體健康。有些霉菌毒素也是重要的致癌物質(zhì)。

霉菌和酵母菌數(shù)是判定藥品受到污染程度的標志之一，也是對藥

品原料、生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)環(huán)境以及操作人員衛(wèi)生狀況進行衛(wèi)生學評判的綜

合依據(jù)之一。

霉菌和酵母菌種屬繁多，采納一種培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，不可能適

合所有霉菌和酵母菌的生長繁育。故本法測定結果只能是在一定條件下平

板生長的霉菌和酵母菌菌落數(shù)。本法規(guī)定，一樣制劑用虎紅瓊脂作霉菌數(shù)

測定（液體制劑包括酵母菌數(shù)）。但含蜂蜜或王漿的合劑另以酵母膏，蛋白

陳、葡萄糖（YPD）瓊脂作酵母菌數(shù)測定，而霉菌數(shù)測定仍用虎紅瓊脂。

1.培養(yǎng)基、試劑

1.1PH7.2磷酸鹽緩沖液（0.lmol/L）（附錄二

2）

1.2生理鹽水（附錄二2）

1.3YPD瓊脂培養(yǎng)基（附錄三6）

1.4虎紅瓊脂培養(yǎng)基（附錄三5）

2.檢驗程序

I供試品I---->11:10供試液I---->I1：100供試

液I-->I1：1000供試液I

----------------?------------------------------------

I合劑（含蜂蜜或

I王漿者）

I

I滴眼劑

I平皿2?3個II平皿2?3個II平皿2?3個

I平皿2?3個I

I虎紅瓊脂，YPD瓊脂I

I（含蜂蜜或王漿的合劑用）注皿I

I培養(yǎng)I

25?28(172±2小時

I菌落計數(shù)

I報告I

3.操作步驟

3.1供試液的制備（總則5）與稀釋，按細菌數(shù)測定項下的

方法進行。稀釋級一樣采納3級。合劑（含蜂蜜或王漿者）和滴眼劑可用

原液作第1級供試液，分不在作10倍遞增稀釋的同時，即可取該稀釋級

的吸管吸取1m1稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋級2?3個平皿。

3.2各稀釋液注入平皿后，應及時將融解并冷至45P左右

的虎紅瓊脂培養(yǎng)基（如供試品為含蜂蜜或王漿的合劑，加用YPD瓊脂培

養(yǎng)基測定酵母菌數(shù)）約15ml傾注平皿內(nèi)，搖勻待凝。

3.3凝固后，置25?28C培養(yǎng)箱內(nèi)，一樣培養(yǎng)72±2

小時，如有可疑，可標記后適當延長培養(yǎng)時刻。

4.菌落計數(shù)方法

4.1菌落形狀

4.1.1霉菌菌落形狀：具有放射狀或樹狀分枝的菌絲是霉

菌菌落的特點。初形成時，多無色透亮，有明顯的折光性，在較暗的背景

下，以透射光觀看，易于識不。少數(shù)生長在瓊脂表面的菌落，初起時，似

為1小塊水跡，需借助暗反射光才能看清。成熟的霉菌菌落多數(shù)有各種顏

色的袍子形成，隨種而異，極易判定。

4.1.2酵母菌菌落形狀：在虎紅瓊脂平板上，多數(shù)為圓形

凸起，邊緣整齊，表面光滑潮濕，呈不透亮乳脂狀，乳白色或粉紅色。少

數(shù)表面粗糙或皺褶，有的菌落周邊呈細分枝狀。位于瓊脂內(nèi)的菌落，可呈

鐵餅形、三角形及多角形。菌落外觀與細菌菌落不易區(qū)不時，應挑取菌落,

用水制片，置高倍顯微鏡下觀看，其細胞個體比細菌大數(shù)倍，多為圓形或

卵圓形，絕大多數(shù)為出芽繁育。當平板內(nèi)酵母菌菌落甚多時，常有酒香氣。

在YPD瓊脂平板上的菌落與虎紅平板上的形狀相似，但稍大，

多數(shù)為乳白色。

4.2菌落計數(shù)：一樣在平板背面用肉眼直截了當點數(shù)，必要

時用放大鏡檢查，

以防遺漏。若有根霉或毛霉蔓延生長時，為幸免阻礙其它霉菌和酵母

菌計數(shù)，應及時將平板取出計數(shù)或從平板背面觀看霉菌生長中心點或霉菌

蔓延生長區(qū)域來計數(shù)。固體制劑僅計數(shù)霉菌菌落；液體制劑應計數(shù)霉菌菌

落和酵母菌菌落的總數(shù)；含王漿或蜂蜜的合劑則應將虎紅平板上的霉菌數(shù)

加上YPD平板上的酵母菌數(shù)為霉菌和酵母菌總數(shù)，運算各稀釋級的平均

平板菌落數(shù)。

5.菌數(shù)報告規(guī)則

5.1選擇菌落數(shù)在30?100之間的稀釋級平板計數(shù)，以

該稀釋級的平均平板菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)作為報告菌數(shù)。

5.2若鄰近的2個稀釋級平均平板菌落數(shù)均在30?100

之間，運算級間比值。當比值W2時，以兩級菌落數(shù)的平均值為報告菌數(shù);

比值＞2時，按低稀釋級平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)為報告菌數(shù)。

5.3各稀釋級平均菌落數(shù)均不足30時，以最低稀釋級平均

菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)為報告菌數(shù)。

6.菌數(shù)報告的書寫

6.1固體制劑報告霉菌數(shù)；液體制劑及半固體制劑報告霉菌

和酵母菌的總數(shù)。

6.2菌數(shù)報告的書寫參照細菌數(shù)測定。

6.3眼科用藥各稀釋級（含原液）均未生長菌落時，報告“未

檢出二

大腸桿菌檢驗法

大腸桿菌為腸桿菌科埃希氏菌屬細菌，是人和溫血動物腸道內(nèi)的

常住菌，隨糞便排出體外，可直截了當或間接污染藥品及藥品生產(chǎn)的各個

環(huán)節(jié)。藥品中檢出大腸桿菌表明該樣品已受到糞便污染，服用后有可能被

糞便中存在的腸道致病菌或寄生蟲卵等病原體感染。因此，大腸桿菌被列

為糞便污染指示菌，是非規(guī)定滅菌口服藥品的常規(guī)必檢項目。

1.培養(yǎng)基、試劑

1.1一般肉湯培養(yǎng)基（附錄三1）

1.2膽鹽乳糖（BL）增菌液（附錄三7）

1.3乳糖發(fā)酵管（附錄三13）或5%乳糖發(fā)酵管（附錄三

14）

1.4蛋白陳水培養(yǎng)基（附錄三10）

1.5磷酸鹽葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基（附錄三11）

1.6西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基（附錄三12）

1.7伊紅美藍（EMB）瓊脂（附錄三8）

1.8麥康凱瓊脂（附錄三9）

1.9柯凡克試劑（附錄二4）

1.10甲基紅指示劑（附錄二4）

1.11V-P試劑（附錄二4）

1.12革蘭氏染色液（附錄二1）

2.檢驗程序

I供試品I

I供試液I

BL增菌液

36±1(I18?24小時

IEMB或麥康凱瓊脂I

36±1℃；18?24小時

疑似菌落生長無菌落

生長

I一般肉湯瓊脂斜面II報

告I

36±1℃I18?24小時

I革鏡II乳II靛I甲I

V|檸|

I蘭IIIII

III檬I

I氏IIII基I基I

PI酸I

I染IIIIII

試I鹽I

I色檢II糖II質(zhì)I紅I

驗II

36±1℃24?48小

時I

I報告I

3.操作步驟

3.1增菌培養(yǎng)取供試液（總則5）10m1,加入備妥的

100m1BL增菌液內(nèi)，置36±1（培養(yǎng)18?24小時。增菌液出

現(xiàn)混濁。液面可見或未見氣泡都表明有菌生長，如未見明顯混濁，可延長

增菌培養(yǎng)時刻至48小時。

3.2分離培養(yǎng)將上述增菌培養(yǎng)液輕微搖動，以接種環(huán)沾取

1?2環(huán)劃線接種于EMB或麥康凱瓊脂平板上。置36±1P培養(yǎng)1

8?24小時（必要時延長培養(yǎng)時刻），觀看菌落生長情形，大腸桿菌在E

MB瓊脂平板上的典型菌落呈深紫黑色或中心深紫色，圓形，稍凸起，邊

緣整齊，表面光滑，常有金屬光澤；在麥康凱瓊脂平板上的典型菌落呈桃

紅色或中心桃紅、圓形，扁平，光滑潮濕。由于藥物阻礙或非典型菌的存

在，大腸桿菌可顯現(xiàn)非典型形狀；在EMB瓊脂平板上出現(xiàn)淺紫、粉紫、

粉色，無明顯暗色中心；在麥康凱瓊脂平板上出現(xiàn)微紅色或粉色，菌落形

狀、質(zhì)地也有改變。以上形狀均應作為疑似菌落進行鑒定，切勿遺漏。

分離平板上無菌落或無疑似菌落生長，可作出未檢出報告。

以接種針輕輕接觸單個疑似菌落的中心，沾取培養(yǎng)物，每次應挑

取2個或更多個疑似菌落，接種于一般肉湯瓊脂斜面或三糖鐵瓊脂斜面上。

置36±1匕培養(yǎng)18?24小時，供革蘭氏染色鏡檢及生化試驗用。

在上述檢驗過程中若發(fā)覺疑似的其它規(guī)定操縱菌時，亦應連續(xù)鑒

定。

3.3革蘭氏染色鏡檢將上述一般肉湯瓊脂斜面培養(yǎng)物涂片,

作革蘭氏染色鏡檢。大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽泡短桿菌。由于菌齡等緣

故，菌體長短可有變化。

3.4生化反應

3.4.1將上述斜面培養(yǎng)物接種于乳糖發(fā)酵管，置36±1匕

培養(yǎng)24?

48小時，觀看結果。大腸桿菌應發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，或產(chǎn)酸不產(chǎn)

氣。產(chǎn)酸者，

以酸性復紅為指示劑的培養(yǎng)基顯紅色；以澳麝香草酚藍為指示劑的培

養(yǎng)基顯黃色。產(chǎn)氣者，倒管內(nèi)有氣泡。

為幸免遲緩發(fā)酵乳糖造成假陰性，可選用5%乳糖發(fā)酵管。絕大

多數(shù)遲緩發(fā)酵乳糖的細菌可于24小時內(nèi)顯現(xiàn)陽性反應。

3.4.2IMViC試驗

靛基質(zhì)試驗將斜面培養(yǎng)物接種于蛋白陳水培養(yǎng)基中，置36土

1。（2培養(yǎng)48±2小時。沿管壁加入柯凡克試劑0.3~0.5ml,輕

微搖動，觀看液面顏色。陽性反應為玫瑰紅色；陰性反應為試劑本色。

甲基紅試驗將斜面培養(yǎng)物接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基

中，置36±1P培養(yǎng)48±2小時。于每m1培養(yǎng)液中加入甲基紅指示

劑1滴，趕忙觀看結果，陽性反應培養(yǎng)液為鮮紅色或桔紅色；陰性反應呈

黃色。

V—P試驗將斜面培養(yǎng)物接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基

中，置36±1匕培養(yǎng)48±2小時。于每2m1培養(yǎng)液中加入V-P試

劑甲液（6%a一蔡酚酒精溶液）1ml,混勻，再加V-P試劑乙液（4

0%KOH）0.4ml,充分振搖，觀看結果。陽性反應趕忙或數(shù)分鐘

后顯現(xiàn)紅色。加試劑后4小時無紅色反應時為陰性，如顯現(xiàn)紅色亦應判為

陽性。

檸檬酸鹽利用試驗將斜面培養(yǎng)物接種于西蒙氏檸檬酸鹽斜面，

置36±1（培養(yǎng)48±2小時，觀看結果。斜面有菌苔生長，培養(yǎng)基由

綠色變?yōu)樗{色時為陽性反應；斜面無菌苔生長，培養(yǎng)基顏色無改變?yōu)殛幮?/p>

反應。若斜面有微量菌苔生長或顏色改變等可疑現(xiàn)象時，應將待檢菌株重

新分離、純化后，再行試驗。

大腸桿菌JMViC反應模式應為+H或—Io對顯現(xiàn)

可疑反應的培養(yǎng)物，應將所分離的待檢菌株于EMB或麥康凱瓊脂平板上

重新劃線分離后，再作生化試驗證實。

表2大腸桿菌同有關細菌的IMViC鑒不及應用

1靛基質(zhì)甲基紅VP1檸檬酸鹽1

111

1典型大腸桿菌++

1非典型大腸桿菌—+

111

1典型中間型+++1

1非典型中間型—++1

111

1典型產(chǎn)氣腸桿菌—一+1+1

1非典型產(chǎn)氣腸桿菌+—+1+1

4.結果報告完全符合以下結果時，判定為檢出大腸桿菌

(1)染色鏡檢是革蘭氏陰性無芽抱桿菌；

(2)乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣，或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；

(3)IMViC試驗反應為+H-------或—I--------o

沙門氏菌檢驗法

沙門氏菌為腸桿菌科沙門氏菌屬細菌，廣泛分布于自然界，是人

畜共患的腸道病原菌，常引起傷寒、腸炎、腸熱癥和食物中毒，危害人類

健康。沙門氏菌可通過人類、畜、禽的糞便或帶菌者直截了當或間接污染

藥品，生產(chǎn)環(huán)境及生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)，專門是以動物、臟器為原料的藥品污

染機率較高。受到污染的藥品，不僅直截了當阻礙服用者的安全，并可造

成沙門氏菌的傳播和流行。故對某些藥品必須檢查沙門氏菌。

藥品中污染的沙門氏菌常在生產(chǎn)過程中受到損害而處于瀕死狀

態(tài)，故檢驗時須先在無選擇性的增菌液中使其復蘇，然后再進行選擇性增

菌。

1.培養(yǎng)基、試劑

1.1一般肉湯培養(yǎng)基（附錄三1）

1.2四硫磺酸鹽增菌液（附錄三15）

1.3膽鹽硫乳（DHL）瓊脂（附錄三17）

1.4沙門氏菌屬志賀氏菌屬（S.S）瓊脂（附錄三18）

1.5EMB瓊脂（附錄三8）

1.6麥康凱瓊脂（附錄三9）

1.7三糖鐵（TSI）瓊脂（附錄三16）

1.8蛋白陳水培養(yǎng)基（附錄三10）

1.9尿素瓊脂培養(yǎng)基（附錄三19）

1.10氟化鉀培養(yǎng)基（附錄三20）

1.11賴氨酸脫竣酶培養(yǎng)基（附錄三21）

1.12糖發(fā)酵培養(yǎng)基（附錄三13）

1.13半固體肉湯瓊脂（附錄三3）

1.14沙門氏菌屬A—F“0”多價血清

1.15革蘭氏染色液（附錄二1）

1.16柯凡克試劑（附錄二4）

2.檢驗程序（見下頁）

3.操作步驟

3.1增菌培養(yǎng)取供試液（總則5）10ml,加入備妥的

100ml一般肉湯內(nèi)，混勻。置36±1。（2培養(yǎng)18?24小時。輕微

搖動培養(yǎng)液，取1m1加入含10m1四硫磺酸鹽增菌液的試管內(nèi)，再置

36±1℃培養(yǎng)24±2小時。

如有菌生長，增菌培養(yǎng)液變混。

I供試品I

I供試液I

營養(yǎng)肉湯

36±1℃I18?24小時

I四硫磺酸鹽增菌液

36±1℃I24±2小時

IDHL瓊脂平板EMB瓊脂平板I

I（或SS瓊脂平板）（或麥康凱瓊脂平板）I

36±1℃I24±2小時

ITSI瓊脂斜面I

36±1℃I24±2小時

革半

4固

氏I體IMII尿II賴I

I氟II血I

染I肉IIIIIMI

I清I

色I湯I基II素II酸I

I化II學I

鏡I瓊IIIII脫I

I試I

檢I脂I質(zhì)II酶II羚I

I鉀II驗I

IIIIIBI

I報告I

3.2分離培養(yǎng)輕微搖動增菌培養(yǎng)液，以接種環(huán)沾取1?2

環(huán)接種于DHL（或S.S）瓊脂平極及EMB（或麥康凱）瓊脂平板各

1個。于36±1七培養(yǎng)24±2小時，檢查平板上有無疑似沙門氏菌落。

沙門氏菌在上述平板上典型菌落形狀見表3。

表3沙門氏菌在選擇性平板上的菌落特點

I培養(yǎng)基I菌落特征

IDHL瓊脂I無色至淺橙色，半透亮，多數(shù)菌株菌落中心帶黑

色或幾乎I

II全黑色

ISS瓊脂I無色至淺橙色，半透亮或不透亮，有的菌株菌落

中心帶黑I

II色

IEMB瓊脂I無色至淺橙色，透亮或半透亮，光滑潮濕

I麥康凱瓊脂I無色至淺橙色，透亮或半透亮，有時中心暗色

由于藥物的阻礙或非典型菌株的存在，沙門氏菌菌落可出現(xiàn)非典

型形狀，如色

澤變深，菌落粗糙等，應注意選擇。

3.3初步選擇試驗以接種針輕輕接觸菌落的中心部位，沾

取選擇性平板

的疑似菌落2個或更多個，劃線接種于TSI瓊脂斜面并穿剌底層。

置36±1P

培養(yǎng)24±2小時觀看結果。沙門氏菌在TSI瓊脂斜面的反應為：

斜面呈堿性（

紅色），底層呈酸性（黃色），硫化氫陽性（底層黑色）或陰性（無黑

色）。

沙門氏菌及有關細菌在TSI瓊脂上的反應見表4。

表4沙門氏菌及其它細菌在TSI瓊脂的反應結果

I序號I斜面I底層I產(chǎn)氣I硫化氫I可能

的菌屬