基層醫(yī)院如何開展臨床微生物檢測

基層醫(yī)院如何開展臨床微生物檢測襄陽市中心醫(yī)院臨床檢驗部微生物室鄒玖明為什么要開展臨床微生物檢測？----必要性如何開展臨床微生物檢測？----軟硬件設(shè)施建立！細菌鑒定基本知識及技能！有關(guān)抗菌藥物敏感性實驗的方法學！保證檢驗質(zhì)量的準確性！----質(zhì)量控制為什么要開展臨床微生物檢測？最重要的兩個原因：不斷增加的細菌耐藥性！促進抗生素的合理使用！性文件衛(wèi)醫(yī)發(fā)〔2004〕285號:衛(wèi)生部關(guān)于施行<抗菌藥物臨床應(yīng)用指導原則>的通知衛(wèi)辦醫(yī)發(fā)〔2006〕133號：衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于進一步做好抗菌藥物臨床應(yīng)用和細菌耐藥監(jiān)測工作的通知衛(wèi)辦醫(yī)發(fā)〔〕48號:衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于進一步加強抗菌藥物臨床應(yīng)用管理的通知衛(wèi)辦醫(yī)發(fā)〔〕130號:衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于加強多重耐藥菌醫(yī)院感染控制工作的通知衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔〕38號：衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于抗菌藥物臨床應(yīng)用管理有關(guān)問題的通知衛(wèi)生部文件：

加強對抗菌藥物臨床應(yīng)用的指導和監(jiān)管

醫(yī)療機構(gòu)要加強臨床微生物檢測與細菌耐藥監(jiān)測工作根據(jù)全國和本地區(qū)細菌耐藥監(jiān)測結(jié)果，結(jié)合本機構(gòu)實際情況，建立、完善抗菌藥物臨床應(yīng)用與細菌耐藥預警機制，并采取相應(yīng)的干預措施各級地方衛(wèi)生行政部門要逐步建立、健全本轄區(qū)抗菌藥物臨床應(yīng)用與細菌耐藥監(jiān)測管理體系開展對醫(yī)療機構(gòu)抗菌藥物臨床應(yīng)用的評價和指導抗生素的中國式濫用！

一個鮮明的對比：

醫(yī)院抗菌藥物年使用率

-----2006-2007年度衛(wèi)生部全國細菌耐藥監(jiān)測★世界上沒有哪個國家如此大規(guī)模地使用抗生素★74%中國22%~25%美英等發(fā)達國家VS＊中國的住院患者中抗生素的使用率高達70%，其中外科患者幾乎人人都用抗生素，比例高達97%。如何開展臨床微生物檢測？軟硬件設(shè)施建立：★人員素質(zhì)★儀器設(shè)備★標準化的操作體系人員素質(zhì)◆應(yīng)該掌握臨床微生物基本知識；◆掌握細菌鑒定及藥敏試驗基本操作技能；◆掌握常用培養(yǎng)基的配制；◆熟悉微生物檢驗室內(nèi)質(zhì)量控制規(guī)則。需配備的設(shè)施條件、儀器設(shè)備◆設(shè)施條件：符合生物安全的獨立實驗用房，分區(qū)設(shè)置合理（樣本處理區(qū)、無菌區(qū)、轉(zhuǎn)種區(qū)）?！魞x器設(shè)備：超凈工作臺（生物安全柜）、高壓滅菌器、普通培養(yǎng)箱、CO2培養(yǎng)箱（燭缸）、冰箱、接種環(huán)、電熱滅菌器（酒精燈）、光學顯微鏡等。需配備的設(shè)施條件、儀器設(shè)備◆試劑：接種標本用：哥倫比亞血平板、麥康凱平板、巧克力平板、真菌顯色平板、淋球菌平板等；細菌鑒定用：氧化酶、觸酶、靛基質(zhì)、甲基紅、VP、枸櫞酸鹽、氨基酸脫羧酶、膽汁七葉苷、6.5%NaCL等；藥敏實驗用：各種抗生素紙片、MH平板、HTM平板等；觀察細菌形態(tài)用：革蘭染液、抗酸染液?！糍|(zhì)控菌株：ATCC來源、室間質(zhì)評來源。藥敏質(zhì)控必備的三個菌株：大腸埃希菌ATCC25922銅綠假單胞菌ATCC27853金黃色葡萄球菌ATCC25923

應(yīng)該建立一套微生物檢測的標準化操作體系，其參考資料可以來源于：《全國臨床檢驗操作規(guī)程》、《試劑盒說明書》、定期更新的CLSI文件等。

體系內(nèi)應(yīng)該包含但不限于以下內(nèi)容：各級檢驗人員的職責和權(quán)限實驗室安全措施各類標本采集和處理方法細菌檢驗項目培養(yǎng)基和試劑的配制方法室內(nèi)和室間質(zhì)量控制

★操作體系應(yīng)該每年進行一次評估，適時更新。標準化操作體系細菌鑒定基本知識細菌形態(tài)結(jié)構(gòu)-----顯微鏡下觀察菌落形態(tài)特征如何利用生化反應(yīng)鑒定細菌細菌的形態(tài)

細菌主要有三種形態(tài)，即球形、桿形、螺形。據(jù)此將細菌分為三大類：球菌、桿菌、螺形菌。球菌1、雙球菌如腦膜炎雙球菌2、鏈球菌如乙型溶血性鏈球菌3、葡萄球菌如金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟菌鏈球菌葡萄球菌桿菌單桿菌如大腸桿菌鏈桿菌如炭疽芽孢桿菌棒狀桿菌如白喉棒狀桿菌分枝桿菌如結(jié)核分枝桿菌球桿菌不同桿菌的大小、長短、粗細很不一致。炭疽芽胞桿菌3-10μm大中大腸埃希菌2-3μm小布魯菌0.6-1.5μm桿菌的形態(tài)多樣兩端齊平炭疽芽胞桿菌兩端尖細白喉棒狀桿菌掌握細菌的鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu)對于細菌鑒定很重要！某些特殊細菌的直接鏡檢報告對于臨床疾病具有診斷意義！如：抗酸染色、分泌物涂片查革蘭陰性雙球菌。血液、腦脊液的陽性培養(yǎng)需要即時報告細菌的革蘭染色結(jié)果，根據(jù)細菌的染色性、排列方式、形態(tài)可以初步區(qū)分種類。菌落的肉眼觀察觀察要點：菌落大小、顏色、溶血性、形態(tài)、表面光澤、濕潤或干燥等。菌落大小：腸球菌、鏈球菌菌落小、腸桿菌科細菌菌落大（與培養(yǎng)時間、營養(yǎng)狀態(tài)亦有關(guān)系）；顏色：PAE產(chǎn)綠色素、粘質(zhì)沙雷菌菌落紅色、SAU菌落金黃色；溶血性：α、β、γ溶血；形態(tài)：圓形、凸起、扁平、不規(guī)則鋸齒形；表面光澤：PAE具有特殊的金屬光澤；濕潤/干燥：BCA菌落干燥易破碎、革蘭陰性桿菌菌落濕潤。

菌落形態(tài)大小與培養(yǎng)時間長短、培養(yǎng)基種類有關(guān)系；不同平板上相同的細菌具有不同的形態(tài)特征；不同的細菌在相同的平板上也可以菌落形態(tài)相似。細菌鑒定涂片鏡檢趨向性反應(yīng)實驗根據(jù)不同種屬細菌選擇生化反應(yīng)根據(jù)主要的生化反應(yīng)結(jié)果判定細菌種類商品化的鑒定試劑條、細菌鑒定儀涂片鏡檢：初步判斷細菌革蘭染色陰、陽性，球菌、桿菌、酵母菌等。革蘭陽性

革蘭陰性影響因素：涂片過厚將使脫色不完全，酒精脫色時間過長將導致過度脫色；染液儲存過久由于蒸發(fā)而影響濃度，特別是碘液久存或見光而形成碘酸，失去媒染作用；95%酒精如果密封不佳易揮發(fā)，失去脫色作用；細菌形態(tài)學檢查以對數(shù)生長期的細菌形態(tài)最為典型，菌齡過長易致陰性。趨向性生化反應(yīng)氧化酶實驗觸酶實驗陽性：紫紅色陰性：無色陽性：大量氣泡陰性或弱陽性：無或少量氣泡大部分非發(fā)酵屬細菌、弧菌屬腸桿菌屬、不動桿菌屬、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌葡萄球菌屬鏈球菌屬、腸球菌屬氧化酶觸酶（+）（-）（+）（-）有關(guān)抗菌藥物敏感性實驗的方法學！常用方法：K-B法、微量稀釋法、E-test法；操作步驟注意事項紙片擴散法（Kirby-Bauer法）原理：將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周圍擴散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測試菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的MIC呈負相關(guān)。操作方法：

1.將在約56℃恒溫的無菌M-H瓊脂傾注直徑為90mm

的平板，其厚度4mm。

2.無菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5個菌落。3.置于無菌生理鹽水中，校正其濁度于McFarland

No0.5管。4.用無菌棉簽浸入細菌懸液中，將拭子在試管上壁輕輕擠壓以擠去過多的菌液。棉簽在三個方向均勻抹瓊脂表面（每次轉(zhuǎn)60℃）使菌液均勻分布，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。5.蓋上平板的蓋子，放置培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，放置3~10分鐘后貼上標準抗生素紙片。6.根據(jù)選擇的菌株挑選相應(yīng)的抗菌紙片。◆腸桿菌科：氨芐西林、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢噻肟、環(huán)丙沙星、亞胺培南、氨曲南、慶大霉素；◆銅綠假單胞菌：頭孢他啶、慶大霉素、哌拉西林、阿米卡星、環(huán)丙沙星、頭孢吡肟、亞胺培南；◆葡萄球菌屬：頭孢西丁、青霉素、紅霉素、萬古霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素；且此記錄便于實驗室人員的查看，以便能隨時解決發(fā)生的問題。有關(guān)抗菌藥物敏感性實驗的方法學！孵育，置平板于35℃孵育16～24h。肺炎鏈球菌對苯唑西林的抑菌環(huán)≥20mm的菌株對青霉素亦敏感(MIC≤0.金胺O染液結(jié)核分枝桿菌大腸埃希菌每次衛(wèi)辦醫(yī)發(fā)〔2006〕133號：衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于進一步做好抗菌藥物臨床應(yīng)用和細菌耐藥監(jiān)測工作的通知肺炎鏈球菌對苯唑西林的抑菌環(huán)≥20mm的菌株對青霉素亦敏感(MIC≤0.棒狀桿菌如白喉棒狀桿菌±2℃培養(yǎng)基效期長短應(yīng)參考實驗室保存條件及權(quán)威參考書籍來制定。孵育后形成一橢圓形抑菌圈，抑菌圈和試條的相交處的刻度即為抗菌藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC)。將在約56℃恒溫的無菌M-H瓊脂傾注直徑為90mm

的平板，其厚度4mm。宣傳一些特殊細菌的固有耐藥知識。細菌形態(tài)學檢查以對數(shù)生長期的細菌形態(tài)最為典型，菌齡過長易致陰性。◆熟悉微生物檢驗室內(nèi)質(zhì)量控制規(guī)則。不是所有的抗生素都需要做藥敏實驗，可以根據(jù)已報告的某種藥物進行推定；±0.★需在透射光（Transmittedlight）下閱讀萬古霉素、利奈唑胺和苯唑西林的抑菌圈，遇不敏感的結(jié)果需用稀釋法測定MIC法確證。◆腸球菌屬：青霉素、萬古霉素、四環(huán)素、高濃度慶大霉素、環(huán)丙沙星、氨芐西林；◆不動桿菌屬：頭孢他啶、亞胺培南、阿米卡星、頭孢吡肟、米諾環(huán)素；◆洋蔥伯克霍德菌：頭孢他啶、米諾環(huán)素、甲氧芐啶/磺胺異噁唑；◆嗜麥芽窄食單胞菌：甲氧芐啶/磺胺異噁唑、左氧氟沙星、米諾環(huán)素。7.用無菌鑷子或紙片分配器將抗菌紙片粘貼于M-H瓊脂的表面，一旦紙片貼上，不能移動；各抗菌紙片中心距離應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm。8.經(jīng)過35℃16～24h孵育。9.取抑菌環(huán)直徑，根據(jù)CLSI標準，報告細菌對該抗生素敏感(S)、耐藥(R)、中介(I)。

E-TEST原理：

E試條是一條5mm×50mm無孔試劑載體，一面固定有一系列預先制備的濃度呈連續(xù)指數(shù)增長稀釋抗菌藥物，另一面有讀數(shù)和判別的刻度?？咕幬锏奶荻瓤筛采w有20個MIC對倍稀釋濃度的寬度范圍。將E試條放在細菌接種過的瓊脂平板上，經(jīng)孵育過夜，圍繞試條明顯可見橢圓形抑菌圈，圈的邊緣與試條交點的刻度濃度即為抗菌藥物抑制細菌的最小抑菌濃度，對照CLSI標準判斷其敏感、耐藥、中介。操作方法：1.挑取16～20h的菌落2.用無菌生理鹽水制備成0.5麥氏比濁管濁度的菌液。3.用無菌棉簽浸入細菌懸液中，將拭子在試管上壁輕輕擠壓以擠去過多的菌液。棉簽在三個方向平均涂抹瓊脂表面（每次轉(zhuǎn)60℃）使菌液均勻分布，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。4.用鑷子將E-TEST試條的抗菌藥物的一面貼向瓊脂表面，有刻度的一面向外，直徑140mm的平板可放置6條，9mm平板只能放置1～2試條。5.孵育，置平板于35℃孵育16～24h。6.孵育后形成一橢圓形抑菌圈，抑菌圈和試條的相交處的刻度即為抗菌藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC)。如何來確定常規(guī)報告的抗菌藥物種類？根據(jù)采用的方法學不同：K-B法、MIC法；

★不是所有種類細菌都能采用K-B法報告藥敏結(jié)果；★不是所有細菌都有明確的折點判斷標準。根據(jù)自己醫(yī)院內(nèi)使用的抗菌藥物種類；由醫(yī)院醫(yī)務(wù)處、藥學部、檢驗科微生物室共同商討制定。結(jié)果報告的解釋敏感是指分離菌株能被使用推薦劑量在感染部位通?？蛇_到的抗菌藥物濃度所抑制。中介包括這些菌株，其抗菌藥物MIC接近于血液和組織中通常可達到的水平，而抗微生物藥治療的反應(yīng)率可能低于敏感株?！爸薪椤狈诸愐馕吨幬镌谏頋饧牟课痪哂信R床效力(如尿液中的喹諾酮類和β-內(nèi)酰胺類)或者可用高于正常劑量的藥物進行治療(如β-內(nèi)酰胺類)。結(jié)果報告的解釋耐藥是指分離菌株不被常規(guī)劑量用藥通?？蛇_到的藥物濃度所抑制，和/或證明抑菌環(huán)直徑落在可存在某些特定的微生物耐藥機制范圍(如β-內(nèi)酰胺酶)，并且治療研究顯示藥物對分離菌株的臨床療效不可靠。關(guān)于藥敏報告！不是所有的抗生素都需要做藥敏實驗，可以根據(jù)已報告的某種藥物進行推定；3天之內(nèi)的同患者同部位重復分離株可以不用重復進行藥敏試驗，但除這期間外的重復分離株必須再次測定。

舉例：肺炎鏈球菌對苯唑西林的抑菌環(huán)≥20mm的菌株對青霉素亦敏感(MIC≤0.06μg/ml)，并經(jīng)臨床證實可以認為對氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、頭孢克洛、頭孢地尼、頭孢吡肟、頭孢他美、頭孢克肟、頭孢噻肟、頭孢丙烯、頭孢布烯、頭孢曲松、頭孢呋辛、頭孢泊肟、頭孢唑肟、厄他培南、亞胺培南、氯碳頭孢和美洛培南敏感，所以不需要再測定這些藥。隨著用Ⅲ代頭孢菌素治療時間的延長，腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬和沙雷菌屬可發(fā)展為耐藥。最初分離的敏感菌株在開始治療3~4天內(nèi)可變?yōu)槟退帲虼藢χ貜头蛛x菌株應(yīng)重新進行藥敏試驗。在長期用抗生素治療過程中銅綠假單胞菌可能發(fā)生耐藥，因此，初次分離的敏感菌株在治療3－4天后可能發(fā)生耐藥。測試重復分離菌株可能是必要的。已經(jīng)培養(yǎng)陽性的患者為何還要定期做重復的培養(yǎng)由銅綠假單胞菌引起的嚴重感染，青霉素類藥物若敏感則需提高治療劑量。對這種感染，用單一抗菌藥物常致臨床治療失敗，應(yīng)考慮增加體外對銅綠假單胞菌有抗菌活性的第2種藥物（如氟喹諾酮類、氨基糖苷類）長期應(yīng)用喹諾酮類治療過程中，葡萄球菌屬可發(fā)展其耐藥性。因此，最初敏感的分離株在開始治療3-4天后可以變?yōu)槟退?，?yīng)對重復分離株測試藥敏試驗。已經(jīng)培養(yǎng)陽性的患者為何還要定期做重復的培養(yǎng)正確閱讀紙片法結(jié)果★完全抑制的抑菌圈直徑，包括紙片的直徑不反光的黑色背景、反射光下閱讀結(jié)果；★抑菌圈的界限應(yīng)該是以肉眼觀察沒有明顯的可見細菌生長區(qū)域；★在抑菌圈邊緣微弱生長的、僅能在放大鏡下才能觀察到的細小菌落應(yīng)忽略。正確閱讀抑菌圈內(nèi)的“霾”現(xiàn)象★變形桿菌(遷移生長)以及磺胺類藥物的紙片法藥敏忽略薄紗樣蔓延生長，微弱生長（20%或更少）；★克林霉素對葡萄球菌的抑菌圈內(nèi)如有薄霧狀菌苔應(yīng)報告細菌對克林霉素耐藥,不管其是否顯示“D”抑菌圈；★需在透射光（Transmittedlight）下閱讀萬古霉素、利奈唑胺和苯唑西林的抑菌圈，遇不敏感的結(jié)果需用稀釋法測定MIC法確證。需要檢測MIC的細菌/藥物肺炎鏈球菌

苯唑西林直徑≤19mm,需要明確受試菌對青霉素的敏感性，必須做青霉素的E-試驗革蘭陽性球菌

萬古霉素不敏感時（中介或耐藥），必須測萬古霉素的MIC確認受試菌對萬古霉素的敏感性（包括替考拉寧、利奈唑胺等）草綠色鏈球菌

對青霉素、氨芐西林紙片法藥敏結(jié)果不可靠，必須測MIC藥敏試驗中應(yīng)注意的問題紙片擴散法★培養(yǎng)基標準化：pH、離子濃度、厚度、硬度、表面濕度★特殊培養(yǎng)基：HTM、5%羊血M-H★孵育條件：時間、溫度、氣體★接種菌量：0.5Mcfarland（麥氏標準管的保存及比濁儀的檢定）★藥敏紙片的效價、質(zhì)量、保存、使用★結(jié)果判讀：質(zhì)控菌株保存（低溫保存，避免反復傳代）、卡尺檢定★特殊耐藥細菌的檢測大部分非發(fā)酵屬細菌、弧菌屬紙片擴散法（Kirby-Bauer法）用鑷子將E-TEST試條的抗菌藥物的一面貼向瓊脂表面，有刻度的一面向外，直徑140mm的平板可放置6條，9mm平板只能放置1～2試條。棉簽在三個方向均勻抹瓊脂表面（每次轉(zhuǎn)60℃）使菌液均勻分布，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。在長期用抗生素治療過程中銅綠假單胞菌可能發(fā)生耐藥，因此，初次分離的敏感菌株在治療3－4天后可能發(fā)生耐藥。(90mm平皿+25ml培養(yǎng)基）氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、一代頭孢菌素、頭孢呋新、可立斯丁不斷增加的細菌耐藥性！細菌鑒定基本知識及技能！氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、一代頭孢菌素、頭孢呋新、可立斯丁◆應(yīng)該掌握臨床微生物基本知識；為什么要開展臨床微生物檢測？氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、一代頭孢菌素、頭孢呋新、應(yīng)該定期的進行臨床聯(lián)系！正確的結(jié)果來源于正確的標本采集、轉(zhuǎn)運、保存；一些特殊檢驗標本亦需床邊采集。主動解釋適時更新的藥敏判斷內(nèi)容；醫(yī)院定期組織對新進臨床醫(yī)技人員進行標本采集知識的培訓；有必要向臨床解釋CLSI文件抗生素選擇中“和/或”字的意義。宣傳一些特殊細菌的固有耐藥知識。菌屬和菌種天然耐藥全部腸桿菌科細菌糖肽類、大環(huán)內(nèi)酯類、克林霉素、利萘唑胺、喹奴普丁、莫匹羅星鮑曼不動桿菌氨芐西林、阿莫西林、一代頭孢菌素銅綠假單胞菌氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、一代、二代頭孢菌素、頭孢噻肟、頭孢曲松、萘啶酸、甲氧嘧啶洋蔥伯克霍爾德菌氨芐西林、阿莫西林、一代頭孢菌素、可立斯丁、氨基糖苷類抗生素嗜麥芽窄食單胞菌全部單劑內(nèi)酰胺類抗生素、氨基糖苷類抗生素黃桿菌屬氨芐西林、阿莫西林、一代頭孢菌素克雷伯菌屬、變異枸櫞酸菌氨芐西林、阿莫西林、羧芐西林、替卡西林腸桿菌屬、弗勞地枸櫞酸菌氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、一代頭孢菌素、頭孢西丁摩根摩根菌氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、一代頭孢菌素、頭孢呋新、普羅維登斯菌屬氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、一代頭孢菌素、頭孢呋新、慶大霉素、萘替米星、妥布霉素、可立斯丁、呋喃妥因奇異變形桿菌可立斯丁、呋喃妥因普通變形桿菌氨芐西林、阿莫西林、頭孢呋新、可立斯丁、呋喃妥因沙雷菌屬氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、一代頭孢菌素、頭孢呋新、可立斯丁小腸結(jié)腸炎耶爾森菌氨芐西林、阿莫西林、羧芐西林、替卡西林、一代頭孢菌素流感嗜血桿菌青霉素、紅霉素、克林霉素卡他莫拉菌甲氧嘧啶全部革蘭陽性菌氨曲南、可立斯丁、萘啶酸肺炎鏈球菌甲氧嘧啶、氨基糖苷類抗生素腸球菌除青霉素和氨芐西林外的青霉素類和頭孢菌素類、低濃度氨基糖苷類李斯特菌三代頭孢菌素、氟喹諾酮類保證檢驗結(jié)果的準確性人員素質(zhì)高低；操作規(guī)范與否；室內(nèi)質(zhì)量控制不可少！儀器設(shè)備高壓滅菌器：定期監(jiān)測（至少每月一次）

生物指示劑：嗜熱脂肪芽孢桿菌化學指示劑：變色的指示帶（每批次高壓物品）培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱：至少每日一次溫度觀測并記錄厭氧培養(yǎng)裝置（GENBAG）：

化學指示劑：美藍生物學指標：PAECO2培養(yǎng)箱：

每天檢查箱內(nèi)的CO2濃度并記錄生物安全柜：

定期更換濾網(wǎng)紫外線強度監(jiān)測細菌培養(yǎng)儀：

廠家定期校正（每半年一次）培養(yǎng)瓶進行生長試驗（更換新批次）微生物鑒定儀及時更新軟件（很重要）每批次鑒定卡用標準菌株測定儀器設(shè)備的質(zhì)量控制標準設(shè)備

控制標準

允許范圍高壓滅菌器121℃

≥121℃培養(yǎng)箱35℃

±1℃水浴箱37℃

±0.5℃冰箱4℃

±2℃低溫冰箱-20℃

±5℃CO2培養(yǎng)箱5%~10%<10%培養(yǎng)基自制培養(yǎng)基配制記錄：制作過程必須規(guī)范統(tǒng)一；培養(yǎng)基或添加劑的劑量、pH值、高溫滅菌的時間或溫度，均需遵照規(guī)定（制造商建議）；培養(yǎng)基名稱、配制量、配方、配制日期和責任人都必須詳細記錄。成品培養(yǎng)基外觀檢查：

液體培養(yǎng)基應(yīng)肉眼觀察顏色、透明度，應(yīng)澄清、無渾濁培養(yǎng)基的色澤異常應(yīng)測pH值，不超過預期值的±0.2方可使用平板培養(yǎng)基易脫水，應(yīng)保存于密封容器內(nèi)或塑料袋內(nèi)（兩周左右），試管培養(yǎng)基可保存1-2個月無菌試驗：

每批自制或成品培養(yǎng)基需進行無菌試驗方法：隨機選取5%~10%的量，如果配制大量的培養(yǎng)基，則任意選取10個培養(yǎng)基，35℃下過夜培養(yǎng)，證明無菌生長為合格。培養(yǎng)基量的要求：平板培養(yǎng)基的厚度一般為3mm

(90mm平皿+15~20ml培養(yǎng)基）藥敏試驗用為4mm

(90mm平皿+25ml培養(yǎng)基）斜面不超過試管的2/3性能驗證：

每一批新制或新購的培養(yǎng)基，使用前均需進行標準菌株試驗以鑒定是否能支持、區(qū)分或選擇某類細菌的生長培養(yǎng)基的試驗結(jié)果需要加以記錄，項目包括試驗日期、試驗結(jié)果以及實驗者的簽名等。且此記錄便于實驗室人員的查看，以便能隨時解決發(fā)生的問題。常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基標準菌株結(jié)果血平板

巧克力平板麥康凱平板

SS平板

化膿鏈球菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌大腸埃希菌福氏志賀菌奇異變形桿菌產(chǎn)氣腸桿菌鼠傷寒沙門菌β溶血α溶血生長分解乳糖，菌落紅色不分解乳糖，菌落無色透明不遷徙生長粉紅色菌落無色菌落，中心黑色

培養(yǎng)基的有效期：培養(yǎng)基效期長短應(yīng)參考實驗室保存條件及權(quán)威參考書籍來制定。若購買成品培養(yǎng)基，應(yīng)注意有效期的標示是否正確，如血平板的有效期為3星期，厭氧菌分離培養(yǎng)基為1-2星期等。

試劑、染色液及抗血清染液的質(zhì)量控制染液要標明配制或購入日期，必須選用適當?shù)臉藴示曜麝栃约瓣幮詫φ?，以鑒定染色液的性能。革蘭染色用ATCC25922和ATCC25923制備濃菌懸液，經(jīng)高壓滅菌后冰箱保存，作為革蘭染色的質(zhì)量控制，至少每周一次。各種染液的質(zhì)控菌株染色液陽性對照菌陰性對照菌質(zhì)控頻度革蘭染色液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌每周抗酸染色液結(jié)核分枝桿菌大腸埃希菌每次金胺O染液結(jié)核分枝桿菌