血液學(xué)血細(xì)胞化學(xué)染色

關(guān)于血液學(xué)血細(xì)胞化學(xué)染色

學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握：細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟；鐵染色、過氧化物酶染色、酯酶染色、過碘酸-希夫染色、堿性磷酸酶染色、酸性磷酸酶染色的正常血細(xì)胞染色反應(yīng)和臨床意義。2.熟悉：細(xì)胞化學(xué)染色的概念和臨床應(yīng)用。3.了解：細(xì)胞化學(xué)染色的原理和影響因素。第2頁,共156頁，星期六，2024年，5月第一節(jié)概述

一、概念細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而形成的一門科學(xué)。它以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)的原理對血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)成分(酶類/脂類/糖類/鐵/蛋白質(zhì)/核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。第3頁,共156頁，星期六，2024年，5月要求：血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求是在原位顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)，反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)是有色沉淀物，具有一定的穩(wěn)定性。血細(xì)胞化學(xué)染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質(zhì)等。第4頁,共156頁，星期六，2024年，5月二、必要性從形態(tài)學(xué)觀察，存在較多的主觀性；有些原始細(xì)胞形態(tài)較相似，難以鑒別；結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色，提高疾病的診斷率。第5頁,共156頁，星期六，2024年，5月三、臨床應(yīng)用1.輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型2.輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷3.觀察疾病的療效和預(yù)后4.疾病發(fā)病機(jī)制的探討第6頁,共156頁，星期六，2024年，5月白血病的診斷：MICM分型

M：morphologyI：immunology

C：cytogeniticsM：molecularbiology形態(tài)學(xué)分型：進(jìn)行初步的診斷免疫學(xué)分型：明確細(xì)胞種類細(xì)胞遺傳學(xué)分型：與疾病預(yù)后有關(guān)分子生物學(xué)分型：提高到分子水平第7頁,共156頁，星期六，2024年，5月四、基本步驟1.固定（1）物理法：干燥、火焰（2）化學(xué)法：A、蒸氣固定：甲醛B、液體固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。第8頁,共156頁，星期六，2024年，5月2.顯示：有色沉淀反應(yīng)（1）偶氮偶聯(lián)法：酯酶染色（2）聯(lián)苯胺法：POX（3）普魯士藍(lán)反應(yīng)：Fe（4）希夫反應(yīng)：PAS（5）金屬沉淀法：NAP（6）物理顯色法：SBB第9頁,共156頁，星期六，2024年，5月3.復(fù)染：使各種細(xì)胞能顯示出來鐵染色----中性紅、伊紅PAS-------甲基綠核：中性紅、甲基綠、沙黃等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。第10頁,共156頁，星期六，2024年，5月五、研究對象

外周血和骨髓新鮮涂片單個(gè)細(xì)胞中的化學(xué)物質(zhì)：

酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等

第11頁,共156頁，星期六，2024年，5月

第二節(jié)常用細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

鐵染色過氧化物酶染色蘇丹黑B染色酯酶染色過碘酸-希夫反應(yīng)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色

第12頁,共156頁，星期六，2024年，5月一、鐵染色

（ferricstain）第13頁,共156頁，星期六，2024年，5月亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵(藍(lán)色沉淀在含F(xiàn)e部位)鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍(lán)反應(yīng)骨髓小粒中的含F(xiàn)e血黃素（細(xì)胞外鐵）骨髓中貯存鐵幼紅細(xì)胞內(nèi)的Fe（細(xì)胞內(nèi)鐵）原理第14頁,共156頁，星期六，2024年，5月

二、結(jié)果判斷

1.細(xì)胞外鐵(骨髓小粒－含鐵血黃素)鐵顆粒、鐵小珠、鐵團(tuán)塊第15頁,共156頁，星期六，2024年，5月細(xì)胞外鐵(低倍鏡觀察)（－）：無顆粒（＋）：有少量鐵顆粒或偶見鐵小珠（＋＋）：有較多的鐵顆粒或鐵小珠（＋＋＋）：有很多的鐵顆粒、鐵小珠和少數(shù)鐵小塊（＋＋＋＋）：有極多鐵顆粒、小珠和很多鐵小塊，密集成堆。第16頁,共156頁，星期六，2024年，5月2.細(xì)胞內(nèi)鐵(中晚幼紅細(xì)胞，油鏡觀察)（1）分級(按鐵顆粒數(shù)量的多少及大小)

細(xì)小顆粒：細(xì)沙樣鐵小粒，不易看清。粗大顆粒：很容易看清的顆粒。（2）陽性率

觀察100個(gè)中晚幼紅細(xì)胞，計(jì)算出鐵粒幼紅細(xì)胞的百分比。第17頁,共156頁，星期六，2024年，5月【結(jié)果判斷】

幼紅細(xì)胞核染色為鮮紅色,鐵粒呈藍(lán)綠色。

第18頁,共156頁，星期六，2024年，5月細(xì)胞內(nèi)鐵(油鏡觀察幼紅細(xì)胞)

Ⅰ型：1～2個(gè)小鐵顆粒；

Ⅱ型：3～5個(gè)小鐵顆粒；

Ⅲ型：6～10個(gè)小鐵顆?；?～4個(gè)大顆粒；

Ⅳ型：

10個(gè)以上小鐵顆?；?個(gè)以上大顆粒。第19頁,共156頁，星期六，2024年，5月

環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞(ringedsideroblast)

幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)鐵顆粒>6個(gè)，圍繞核周2/3以上者。鐵粒幼紅細(xì)胞(sideroblast)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。鐵粒紅細(xì)胞(siderocyte)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的成熟紅細(xì)胞。第20頁,共156頁，星期六，2024年，5月綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；藍(lán)色箭頭示：鐵粒紅細(xì)胞第21頁,共156頁，星期六，2024年，5月1.細(xì)胞外鐵：

（+）~（++）2.細(xì)胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率大約12~44%，I~II型（I型為主），無Ⅲ型、Ⅳ型、環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞及鐵粒紅細(xì)胞。三、參考范圍第22頁,共156頁，星期六，2024年，5月四、臨床意義

鐵染色是評估鐵缺乏最實(shí)用的方法，是反映儲(chǔ)存鐵的金標(biāo)準(zhǔn)，是臨床應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞化學(xué)染色之一。第23頁,共156頁，星期六，2024年，5月

1.缺鐵性貧血：外鐵（－），內(nèi)鐵<10%；治療有效后，內(nèi)外鐵

。

2.鐵粒幼細(xì)胞性貧血：外鐵

；內(nèi)鐵陽性率

，環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多，可見粗顆粒的Ⅲ、Ⅳ型鐵粒幼紅細(xì)胞。第24頁,共156頁，星期六，2024年，5月

3.MDS-RAS：內(nèi)外鐵增多，環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞>15%。

4.非缺鐵性貧血：溶貧、巨幼貧、再障、白血病等，內(nèi)外鐵正?；蛟龆?。

5.感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等：外鐵增多。第25頁,共156頁，星期六，2024年，5月五、應(yīng)用評價(jià)鐵染色是臨床常用的一種細(xì)胞化學(xué)染色，雖不如血漿鐵蛋白敏感，但是反映機(jī)體儲(chǔ)存鐵的金標(biāo)準(zhǔn)。

外鐵：反映骨髓中鐵的儲(chǔ)存量；

內(nèi)鐵：反映骨髓中可利用的鐵量。

第26頁,共156頁，星期六，2024年，5月二、過氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

第27頁,共156頁，星期六，2024年，5月一、原理

粒細(xì)胞和部分單核細(xì)胞的溶酶體顆粒中含有過氧化物酶(POX)，它可分解H2O2釋放出新生態(tài)的氧，后者氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶所在的活性部位。

二甲基聯(lián)苯胺法（DAB）原理第28頁,共156頁，星期六，2024年，5月POX

新生態(tài)氧[O]↑過氧化氫（基質(zhì)中）四甲基聯(lián)苯胺（無色）聯(lián)苯胺藍(lán)（藍(lán)色）亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)色顆粒（漿內(nèi)酶部位）粒、單核細(xì)胞胞漿【原理】第29頁,共156頁，星期六，2024年，5月二、ICSH推薦的三種方法

二氨基聯(lián)苯胺法（DBA）二鹽酸聯(lián)苯胺法過氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法

第30頁,共156頁，星期六，2024年，5月三、結(jié)果判斷

在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒為陽性反應(yīng)。（二氨基聯(lián)苯胺法）第31頁,共156頁，星期六，2024年，5月二氨基聯(lián)苯胺法第32頁,共156頁，星期六，2024年，5月二鹽酸聯(lián)苯胺法第33頁,共156頁，星期六，2024年，5月二鹽酸聯(lián)苯胺法第34頁,共156頁，星期六，2024年，5月【結(jié)果判斷】

-、±、+、++、+++、++++弱陽性顆粒小，分布稀疏陽性顆粒稍粗，分布較密集強(qiáng)陽性顆粒粗大，密布于整個(gè)胞漿第35頁,共156頁，星期六，2024年，5月POX結(jié)果判斷細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。（－）無顆粒沉著；（a）（±）顆粒細(xì)小，分布稀疏；（b）（+）顆粒較粗，局灶分布；（c）（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/2~2/3；（d）（+++）顆粒粗大，呈團(tuán)塊分布；（e）（++++）全部胞質(zhì)均部滿顆粒，可覆蓋胞核（f）。第36頁,共156頁，星期六，2024年，5月【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】1.粒細(xì)胞系統(tǒng)

POX主要存在于粒系細(xì)胞中。

分化差的原粒細(xì)胞陰性;

分化好的原粒細(xì)胞至中性成熟粒細(xì)胞各階段均呈陽性，陽性反應(yīng)程度隨細(xì)胞的成熟逐漸增強(qiáng)。

中性分葉核粒細(xì)胞：強(qiáng)陽性嗜酸粒細(xì)胞：陽性最強(qiáng)嗜堿粒細(xì)胞：（－）第37頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)陰性或弱陽性

3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)紅細(xì)胞系統(tǒng)巨核細(xì)胞系統(tǒng)陰性漿細(xì)胞組織細(xì)胞

第38頁,共156頁，星期六，2024年，5月第39頁,共156頁，星期六，2024年，5月第40頁,共156頁，星期六，2024年，5月第41頁,共156頁，星期六，2024年，5月第42頁,共156頁，星期六，2024年，5月四、臨床意義鑒別急性白血病的類型首選（1）急淋和急性髓細(xì)胞系的鑒別：急淋：（－），陽性率<3%；急單：弱陽性；急粒：陽性（+～+

+

+）。

第43頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：（－）或弱（+），陽性顆粒少而細(xì)小。

3.其它系統(tǒng)細(xì)胞：淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)、巨核細(xì)胞系統(tǒng)、漿細(xì)胞、組織細(xì)胞（－）。

第44頁,共156頁，星期六，2024年，5月【臨床評價(jià)】

急性髓細(xì)胞白血病急性淋巴細(xì)胞白血病

鑒別第45頁,共156頁，星期六，2024年，5月

1.急性髓細(xì)胞白血病

（1）急性粒細(xì)胞白血病

陽性反應(yīng)

（2）急性單核細(xì)胞白血病

弱陽性反應(yīng)第46頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.急性淋巴細(xì)胞白血病

陰性反應(yīng)或陽性率<3%(殘留原粒細(xì)胞)第47頁,共156頁，星期六，2024年，5月ALL第48頁,共156頁，星期六，2024年，5月ALL第49頁,共156頁，星期六，2024年，5月原粒陰性第50頁,共156頁，星期六，2024年，5月原粒弱陽性第51頁,共156頁，星期六，2024年，5月原粒陽性第52頁,共156頁，星期六，2024年，5月早幼粒強(qiáng)陽性第53頁,共156頁，星期六，2024年，5月

一、原理

蘇丹黑B是一種脂溶性重氮染料，可溶解細(xì)胞內(nèi)含脂結(jié)構(gòu)(中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇)，而使脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色(粒細(xì)胞：豐富；單核細(xì)胞：少量)。三、蘇丹黑B染色（SudanblackB，SBB）第54頁,共156頁，星期六，2024年，5月正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)與POX染色基本一致臨床意義與POX染色相似第55頁,共156頁，星期六，2024年，5月二、SBB與POX區(qū)別：

1.POX特異性高于SBB，而敏感性低于SBB；2.POX染色要求涂片新鮮，保持酶活性，SBB染色可用陳舊涂片。第56頁,共156頁，星期六，2024年，5月第57頁,共156頁，星期六，2024年，5月第58頁,共156頁，星期六，2024年，5月

1.特異性酯酶（specificesterase）

主要存在于粒細(xì)胞，又稱“粒細(xì)胞酯酶”

－氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）。

一、分類四、酯酶染色第59頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.非特異性酯酶(nonspecificesterase)單核、組織細(xì)胞中含量較多，粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中含量少，且氟化鈉抑制單核細(xì)胞中的非特異性酯酶，而不抑制粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及其他細(xì)胞。第60頁,共156頁，星期六，2024年，5月

醋酸AS-D奈酚酯酶：NAS-DAE

α-醋酸奈酚酯酶：α-NAE

α-丁酸奈酚酯酶：α-NBE酸性α-醋酸奈酚酯酶：ANAE

(α-NBE敏感性不如NAS-DAE但特異性較之強(qiáng))

第61頁,共156頁，星期六，2024年，5月（

一）特異性脂酶染色1.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

NaphtholAS-Dchloroacetateesterase第62頁,共156頁，星期六，2024年，5月

1.原理氯乙酸AS-D萘酚AS-D萘酚

不溶性的有色(紅)沉淀。NAS-DCE幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞，其特異性高，因此又稱為“粒細(xì)胞酯酶”NAS-DCE

重氮鹽(堅(jiān)牢藍(lán)紫醬)第63頁,共156頁，星期六，2024年，5月氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色第64頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

①粒系(酶活性不隨細(xì)胞成熟而增強(qiáng))原粒（－）或（+）早幼粒~成熟中性粒細(xì)胞（+）嗜酸性粒細(xì)胞（－）或弱（+）嗜堿性粒細(xì)胞（+）第65頁,共156頁，星期六，2024年，5月

②單核細(xì)胞系統(tǒng)：（－）③肥大細(xì)胞：（+）

④淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、

巨核細(xì)胞、血小板：（－）第66頁,共156頁，星期六，2024年，5月

3.臨床意義

主要用于輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型：

①急性粒細(xì)胞白血?。海?）

②急性早幼粒細(xì)胞白血?。簭?qiáng)（+）

③急性單核細(xì)胞白血病：（－）

④急粒-單：粒細(xì)胞（+）單核細(xì)胞（－）

⑤急性巨核細(xì)胞性白血?。海ǎ?/p>

⑥急性淋巴細(xì)胞白血病：（－）第67頁,共156頁，星期六，2024年，5月

原理

：

非特異性脂酶在相應(yīng)的pH環(huán)境中，

將基質(zhì)液中相應(yīng)底物水解，產(chǎn)生含萘酚

的物質(zhì)，后者與重氮鹽發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，

形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)

內(nèi)酶所在的部位。（二）非特異性脂酶染色第68頁,共156頁，星期六，2024年，5月根據(jù)pH值的不同分為：酸性：酸性α-醋酸萘酚酯酶染色(ANAE)中性：α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)

醋酸AS-D萘酚酯酶染色(NAS-DAE)堿性：α-丁酸萘酚酯酶染色(α-NBE)第69頁,共156頁，星期六，2024年，5月

名稱pH底物生成物重氮鹽(產(chǎn)物顏色)α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)中α-醋酸萘酚α-萘酚堅(jiān)牢藍(lán)B棕黑,灰黑醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-DNAE)中醋酸AS-D萘酚AS-D萘酚堅(jiān)牢藍(lán)BB藍(lán)α-丁酸萘酚酯酶(α-NBE)堿α-丁酸萘酚α-萘酚堅(jiān)牢紫醬GBC紅酸性α-醋酸萘酚酯酶(ANAE)酸α-醋酸萘酚α-萘酚六偶氮付品紅紅第70頁,共156頁，星期六，2024年，5月

1.α-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholacetateesterase，α-NAE）第71頁,共156頁，星期六，2024年，5月α-醋酸萘酚酯酶（細(xì)胞內(nèi)）α-醋酸萘酚（基質(zhì)液中）α-萘酚

重氮鹽（堅(jiān)牢藍(lán)B）胞漿不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】第72頁,共156頁，星期六，2024年，5月【結(jié)果判斷】

胞漿內(nèi)有灰黑色或棕黑色彌散性顆粒狀沉淀為陽性。第73頁,共156頁，星期六，2024年，5月α-醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色)第74頁,共156頁，星期六，2024年，5月α-醋酸萘酚酯酶染色a:單核b:BPCc:巨核d:LC(+)e:幼紅(-)第75頁,共156頁，星期六，2024年，5月

氟化鈉抑制試驗(yàn)

在基質(zhì)液中加入適量NaF,其余染色方法同上。兩種方法染色后用油鏡計(jì)數(shù)100或200個(gè)被檢細(xì)胞，分別計(jì)算出抑制前和抑制后的陽性率或陽性積分。第76頁,共156頁，星期六，2024年，5月

氟化鈉抑制率=抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分抑制前陽性率或陽性積分100%第77頁,共156頁，星期六，2024年，5月第78頁,共156頁，星期六，2024年，5月

A圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色

原始、幼稚單核細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性

B圖：急性單核細(xì)胞白血病

α-NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細(xì)胞陽性反應(yīng)被氟化鈉抑制（與A圖為同一標(biāo)本）

A

B第79頁,共156頁，星期六，2024年，5月【臨床評價(jià)】急單急粒急性早幼粒急粒單急淋α-NAE+++或-或++陽性-++++弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制主要用于鑒別急性白血病類型第80頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.臨床意義

輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型

急單：單核細(xì)胞陽性，能被NaF抑制。

急粒：粒細(xì)胞弱陽性，不被NaF抑制。第81頁,共156頁，星期六，2024年，5月

M3：強(qiáng)陽性，不能被NaF抑制。

M4：部分陽性細(xì)胞能被NaF抑制，

部分陽性細(xì)胞不能被NaF抑制。

ALL：原幼淋陰性或陽性，不能被NaF抑制。第82頁,共156頁，星期六，2024年，5月【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】1.單核細(xì)胞系統(tǒng)

原始單核細(xì)胞分化差陰性分化好陽性

幼稚及成熟單核細(xì)胞陽性被氟化鈉抑制第83頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.粒細(xì)胞系統(tǒng)

原粒細(xì)胞陰性或弱陽性以下階段為弱陽性

3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)

多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性

不被氟化鈉抑制第84頁,共156頁，星期六，2024年，5月2.α-丁酸奈酚酯酶染色α-NBE

原理：

血細(xì)胞中α-NBE在堿性條件下，基質(zhì)液中的α-丁酸奈酚水解，產(chǎn)生α-奈酚，后者與堅(jiān)牢醬紫GBC偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。第85頁,共156頁，星期六，2024年，5月α-NBE染色反應(yīng)1.粒系：各期（-）2.單核系：分化差的原單（-）；分化好的原單（+）幼單~成熟單核（+），可被NaF抑制3.淋巴系：TC、非T非B（+）BC（+）

4.其他細(xì)胞：巨核、有核紅細(xì)胞、漿細(xì)胞（-）或弱（+）

組織細(xì)胞(+),不被NaF抑制第86頁,共156頁，星期六，2024年，5月3.酸性α-醋酸奈酚酯酶染色ANAE

原理：

血細(xì)胞中的酸性α-醋酸奈酚酯酶（ANAE）在pH弱酸性（pH5.8）的條件下，可水解基質(zhì)液中的α-醋酸奈酚，產(chǎn)生α-奈酚，進(jìn)而與重氮鹽六偶氮付品紅形成不溶性紅色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。第87頁,共156頁，星期六，2024年，5月酸性α-醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）---M5第88頁,共156頁，星期六，2024年，5月ANAE染色反應(yīng)1.單核系：強(qiáng)（+）可被NaF抑制2.淋巴系：TC（+）BC（-）3.其他細(xì)胞：粒系（-）或弱（+）不被NaF抑制

紅系、巨核系（-）

第89頁,共156頁，星期六，2024年，5月

4.酯酶雙染色

在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色特異性酯酶+非特異性酯酶對診斷急性粒-單細(xì)胞白血病有獨(dú)特價(jià)值

α-NAE與NAS-DCE紅色(單)

α-NBE與NAS-DCE蘭色(粒)

第90頁,共156頁，星期六，2024年，5月骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染色顯示，原始粒細(xì)胞胞漿呈藍(lán)色CE陽性反應(yīng)；而原始單核細(xì)胞胞漿呈棕色的NAE陽性反應(yīng)。第91頁,共156頁，星期六，2024年，5月

NAS-DCE：

M1弱(+)/M2(+)/M3強(qiáng)(+)，M5/ALL(－)；

α-NBE：

M5(+)NaF抑制，M1/M2/M3/ALL(－)；

α-NAE/NAS-DAE：

M5強(qiáng)(+)NaF抑制

M3強(qiáng)(+)/M1M2a/ALL(+)NaF不抑制。

第92頁,共156頁，星期六，2024年，5月五、過碘酸-希夫反應(yīng)

(糖原染色)

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）第93頁,共156頁，星期六，2024年，5月雙醛基過碘酸希夫試劑中的無色品紅

紫紅色化合物(附于含多糖類的胞漿內(nèi))乙二醇基(多糖類物質(zhì)含有)氧化【原理】第94頁,共156頁，星期六，2024年，5月

過碘酸是氧化劑，使含有乙二醇基的多糖類物質(zhì)(糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖等)氧化，形成雙醛基。醛基與Schiff’s液中的無色品紅結(jié)合，使無色品紅變成紫紅色化合物，定位于含多糖類的細(xì)胞內(nèi)。

一、原理第95頁,共156頁，星期六，2024年，5月【結(jié)果判斷】陽性胞漿內(nèi)紅色陽性物呈彌散狀、顆粒狀或塊狀。陰性胞漿內(nèi)無色或無顆粒,核淡綠。

第96頁,共156頁，星期六，2024年，5月第97頁,共156頁，星期六，2024年，5月第98頁,共156頁，星期六，2024年，5月

1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：（陽性逐漸增強(qiáng)）

原始粒C（－）或（+）早幼粒C~成熟中性粒C（+）：

細(xì)顆粒均勻紅色嗜酸粒C：顆粒不著色，胞質(zhì)呈紅色。嗜堿粒C：顆粒陽性，胞質(zhì)不著色。

二、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)第99頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差（－）其他（+），

粗顆粒狀。3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：多數(shù)（－）少數(shù)（+），粗顆?；驂K狀。

4.紅細(xì)胞系統(tǒng)：（－），病理情況可（+）。

5.巨核細(xì)胞系統(tǒng)：（+），顆粒狀或塊狀。

6.其它細(xì)胞：漿細(xì)胞（－），巨噬細(xì)胞（+）第100頁,共156頁，星期六，2024年，5月a粒細(xì)胞、b巨核細(xì)胞、c單核細(xì)胞、d幼紅細(xì)胞第101頁,共156頁，星期六，2024年，5月三、結(jié)果判斷

1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：

紅色、彌散狀。各種細(xì)胞陽性反應(yīng)強(qiáng)弱不同

2.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：

粗顆粒狀、小塊狀、大塊狀紅色。第102頁,共156頁，星期六，2024年，5月1、+2、++3、+++4、++++5、－第103頁,共156頁，星期六，2024年，5月

3.紅細(xì)胞系統(tǒng)：

均勻紅色或塊狀

4.單核細(xì)胞系統(tǒng)：

粗顆粒狀

5.巨核細(xì)胞和血小板：

顆粒狀、塊狀。第104頁,共156頁，星期六，2024年，5月1.巨核細(xì)胞和血小板陽性第105頁,共156頁，星期六，2024年，5月

1.幫助鑒別巨幼細(xì)胞性貧血和骨

髓增生異常綜合征、紅白血病:

前者（－），后兩者（+）。四、臨床意義第106頁,共156頁，星期六，2024年，5月第107頁,共156頁，星期六，2024年，5月急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色原始、幼稚淋巴細(xì)胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性第108頁,共156頁，星期六，2024年，5月109急淋PAS陽性細(xì)胞第109頁,共156頁，星期六，2024年，5月110PAS陽性的幼紅細(xì)胞第110頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.幫助鑒別急性白血病的細(xì)胞類型：

急淋：（+）呈粗顆粒狀或塊狀。

急粒：（+）細(xì)顆粒狀或均勻紅色。

急單：（+）細(xì)顆粒狀，均勻分布，有時(shí)胞質(zhì)邊緣顆粒較粗大。

第111頁,共156頁，星期六，2024年，5月

3.其他細(xì)胞：

骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞細(xì)胞呈強(qiáng)陽性

霍奇金淋巴瘤RS細(xì)胞多呈陰性或弱陽性

戈謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽性尼曼-皮克細(xì)胞多呈陰性或弱陽性第112頁,共156頁，星期六，2024年，5月CLLALL第113頁,共156頁，星期六，2024年，5月

六、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（neutrophilicalkaline

phosphatase，NAP）第114頁,共156頁，星期六，2024年，5月磷酸萘酚鈉（基質(zhì)中）中性粒細(xì)胞胞漿中NAP磷酸鈉α-萘酚

重氮鹽（堅(jiān)牢藍(lán)鹽RR）＋紫黑色偶氮染料

（胞漿中）水解【原理】Kaplow偶氮偶聯(lián)法第115頁,共156頁，星期六，2024年，5月【結(jié)果判斷】

胞漿中有紫黑色顆粒為陽性(+~++++）第116頁,共156頁，星期六，2024年，5月【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】中性成熟粒細(xì)胞陽性反應(yīng)NAP主要存在于成熟的中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中。嚴(yán)重的化膿性感染時(shí)，晚幼階段粒細(xì)胞也可見有陽性反應(yīng)。2.其他細(xì)胞基本呈陰性反應(yīng)

第117頁,共156頁，星期六，2024年，5月第118頁,共156頁，星期六，2024年，5月

NAP染色反應(yīng)強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)：

（－）：胞質(zhì)中無顆粒；（＋）：胞質(zhì)含少量顆粒，約占1/4；（＋＋）：胞質(zhì)含中等量顆粒，約占1/2；（＋＋＋）

：胞質(zhì)含較多顆粒，約占3/4；

（＋＋＋＋）：胞質(zhì)充滿顆粒，無空隙。第119頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.NAP積分值計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞（桿狀和分葉）,分別記錄其分級情況：

第120頁,共156頁，星期六，2024年，5月(-)0分(+)1分(++)2分(+++)3分(++++)4分

陽性率全部陽性反應(yīng)細(xì)胞之和

積分值各種陽性程度細(xì)胞的分值之和第121頁,共156頁，星期六，2024年，5月

NAP染色結(jié)果報(bào)告包括陽性率和積分值。陽性率：指計(jì)數(shù)100個(gè)中性成熟粒細(xì)胞，其陽性細(xì)胞的數(shù)量即為陽性率；積分值：指計(jì)數(shù)100個(gè)中性成熟粒細(xì)胞，不同陽性程度細(xì)胞數(shù)量乘以其陽性程度之和即為積分值，其計(jì)算公式為：積分值=(＋)數(shù)量×1+(＋＋)數(shù)量×2+(＋＋＋)數(shù)量×3+(＋＋＋＋)數(shù)量×4。

2.NAP染色結(jié)果報(bào)告：第122頁,共156頁，星期六，2024年，5月例：4分占20%

4×20=80分3分占40%

3×40=120分2分占18%

2×18=36分1分占10%

1×10=10分0分占12%

0×12=0分陽性率88%積分=246分第123頁,共156頁，星期六，2024年，5月第124頁,共156頁，星期六，2024年，5月0級0胞漿呈原色，無顆粒。

Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，細(xì)小藍(lán)黑色顆粒占胞漿面積的25%～50%。

Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50%～75%。第125頁,共156頁，星期六，2024年，5月Ⅲ級+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75%－100%。

Ⅳ級++++胞漿充滿深黑色致密的團(tuán)塊狀沉淀，甚至遮蓋胞核，中到大顆粒占胞漿面積的l00%。

第126頁,共156頁，星期六，2024年，5月第127頁,共156頁，星期六，2024年，5月

3.參考范圍：

中性粒細(xì)胞NAP陽性率：＜40%

NAP積分為：30~130分第128頁,共156頁，星期六，2024年，5月【臨床評價(jià)】（1）細(xì)菌性感染與病毒性感染

（尤其是化膿性感染）

明顯增加無明顯變化第129頁,共156頁，星期六，2024年，5月

四、臨床意義

1.生理性變化：應(yīng)激狀態(tài)、妊娠、新生兒等。

2.病理性變化：

(1)NAP

：細(xì)菌性感染、慢粒(加、急)、急

淋、慢淋、惡性淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、

骨纖、真紅、再障、原發(fā)性血小

板增多癥、使用糖皮質(zhì)激素等。第130頁,共156頁，星期六，2024年，5月

3.疾病的鑒別：

(1)類白與慢粒:前者

后者

(2)慢粒慢性期與慢性中性粒細(xì)胞白血病：

前者

后者

(3)細(xì)菌性感染與病毒性感染/寄生蟲感染：前者

后兩者正?；?/p>

(2)NAP：慢粒(慢)、PNH、MDS、惡組等。第131頁,共156頁，星期六，2024年，5月

(6)惡組與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥：前者

后者常

(7)急性白血病類型：

急性髓細(xì)胞

急淋

(4)慢粒病情觀察：

(5)再障與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿：

前者

后者

第132頁,共156頁，星期六，2024年，5月CML類白第133頁,共156頁，星期六，2024年，5月(2）類白血病反應(yīng)與慢性粒細(xì)胞白血病明顯增加明顯下降且常為零分，緩解時(shí)又上升到正常第134頁,共156頁，星期六，2024年，5月五、應(yīng)用評價(jià)NAP染色有多種檢測方法，國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦Kaplow萘酚AS-BI磷酸鈉法和Tomonaga萘酚AS-MX磷酸鈉法。鈣-鈷法試劑成本低廉，操作繁瑣，反應(yīng)時(shí)間長，臨床上逐步被偶氮偶聯(lián)法取代，陽性產(chǎn)物色澤鮮明、定位精確，尤其以萘酚AS-BI磷酸鈉法最為廣泛使用，利于評定NAP活性強(qiáng)度的分級。常用重氮鹽有堅(jiān)牢藍(lán)RR、堅(jiān)牢藍(lán)BB、堅(jiān)牢紫醬等，不同偶聯(lián)有不同的靈敏度。

第135頁,共156頁，星期六，2024年，5月七、酸性磷酸酶染色(acidphosphatase，ACP)一、原理1.Gomori硫化鉛法第136頁,共156頁，星期六，2024年，5月棕黑色pH5.0第137頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.偶氮偶聯(lián)法(常用)六偶氮付品紅——棕紅色沉淀磷酸萘酚AS-BI

萘酚AS-BI棕紅色沉淀

ACPPh5.0重氮鹽第138頁,共156頁，星期六，2024年，5月第139頁,共156頁，星期六，2024年，5月

3.抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）兩張相同標(biāo)本涂片+兩份基質(zhì)液(加L-酒石酸，不加L-酒石酸)ACP染色耐L-酒石酸兩份（+）不耐L-酒石酸不加L-酒石酸（+）加L-酒石酸（－）第140頁,共156頁，星期六，2024年，5月

二、正常血細(xì)胞染色反應(yīng)粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)。第141頁,共156頁，星期六，2024年，5月

三、臨床評價(jià)

1.診斷多毛細(xì)胞白血病多毛細(xì)胞白血?。海?），不被L-酒石酸抑制。慢淋和惡性淋巴瘤細(xì)胞:

（+），被L-酒石酸抑制。第142頁,共156頁，星期六，2024年，5月多毛細(xì)胞白血病慢性淋巴細(xì)胞白血病第143頁,共156頁，星期六，2024年，5月抗酒石酸酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色多毛細(xì)胞白血病第144頁,共156頁，星期六，2024年，5月多毛細(xì)胞白血病抗L-酒石酸ACP陽性第145頁,共156頁，星期六，2024年，5月

2.鑒別戈謝(Gaucher)細(xì)胞和尼曼-匹

克(Niemann-Picks)細(xì)胞：

前者（+）后者（－）

3.鑒別T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞：

前者（+）后者（－）

第146頁,共156頁，星期六，2024年，5月Gaucher’scell第147頁,共156頁，星期六，2024年，5月