重組DNA技術(shù)的基本工具課件 【知識(shí)精講精研】高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

3.1重組DNA技術(shù)的基本工具我國(guó)是棉花的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)。棉花在種植過(guò)程中，常常會(huì)受到一些害蟲(chóng)的侵襲，其中以棉鈴蟲(chóng)最為常見(jiàn)。普通棉花如何能培育出自身就能抵抗蟲(chóng)害的棉花新品種呢？轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉已知：蘇云金芽孢桿菌含有一種抗蟲(chóng)基因?；蚬こ?/p>

是指按照人們的愿望，通過(guò)轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品，從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作重組DNA技術(shù)。操作結(jié)果操作水平原理：優(yōu)點(diǎn)：基因重組定向改造生物體的性狀別名基因工程的誕生和發(fā)展①1944年，艾弗里等人通過(guò)肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)證明了遺傳物質(zhì)是________，還證明了DNA可以在同種生物的不同個(gè)體之間轉(zhuǎn)移。②1953年，沃森和克里克建立了___________________模型并提出了遺傳物質(zhì)自我復(fù)制的假說(shuō)。③20世紀(jì)70年代初，多種限制酶、____________酶和逆轉(zhuǎn)錄酶被相繼發(fā)現(xiàn)，為DNA的切割、連接創(chuàng)造了條件。④1973年，科學(xué)家證明________可以作為基因工程的載體，構(gòu)建___________，使外源基因在原核細(xì)胞中成功表達(dá)，并實(shí)現(xiàn)物種間的基因交流。⑤1985年，穆里斯等人發(fā)明______，為獲取目的基因提供了有效手段。DNADNA雙螺旋結(jié)構(gòu)DNA連接質(zhì)粒重組DNAPCR1.基因是什么？2.基因的功能是什么？基因通過(guò)控制蛋白質(zhì)的合成，直接或間接控制生物的性狀。轉(zhuǎn)錄DNAmRNA蛋白質(zhì)翻譯——體現(xiàn)相關(guān)的生物性狀知識(shí)回顧——基因基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段。基因是控制生物性狀的基本單位①DNA中文全稱:

②組成元素:

③基本單位:

脫氧核糖核酸CHONP脫氧核糖核苷酸=磷酸

+

脫氧核糖

+

含氮堿基脫氧核糖含氮堿基磷酸1′4′3′2′5′ATCG脫氧核苷酸(4種)知識(shí)回顧——DNA胞嘧啶脫氧核苷酸鳥(niǎo)嘌呤脫氧核苷酸

胸腺嘧啶脫氧核苷酸腺嘌呤脫氧核苷酸脫氧核糖A磷酸脫氧核糖G磷酸脫氧核糖T磷酸T磷酸脫氧核糖C磷酸脫氧核糖A磷酸脫氧核糖磷酸二酯鍵脫氧核苷酸如何連接成脫氧核苷酸鏈的呢？知識(shí)回顧——DNA氫鍵雙螺旋結(jié)構(gòu)知識(shí)回顧——DNADNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：5’3’3’5’知識(shí)回顧——DNA②

和

交替連接，排列在外側(cè)，構(gòu)成

；

排列在內(nèi)側(cè)。③兩條鏈上的堿基通過(guò)

連接成堿基對(duì)，且遵循

。①DNA是由兩條單鏈組成的，這兩條鏈按

方式盤旋成雙螺旋結(jié)構(gòu)。反向平行脫氧核糖磷酸堿基基本骨架氫鍵堿基互補(bǔ)配對(duì)原則……ATGCCGTGGAATTCC…………TACGGCACCTTAAGG……①②①磷酸二酯鍵②氫鍵簡(jiǎn)圖：知識(shí)回顧——DNA普通棉花(無(wú)抗蟲(chóng)特性)抗蟲(chóng)基因剪下來(lái)的抗蟲(chóng)基因能否直接把它導(dǎo)入到棉花體內(nèi)？不能。大多數(shù)生物會(huì)排斥外來(lái)的基因，若直接導(dǎo)入會(huì)被降解。普通棉花(無(wú)抗蟲(chóng)特性)“分子縫合針”“分子運(yùn)輸車”抗蟲(chóng)基因與載體DNA拼接，再導(dǎo)入“分子縫合針”“分子運(yùn)輸車”抗蟲(chóng)基因與載體DNA拼接，再導(dǎo)入抗蟲(chóng)棉“分子手術(shù)刀”準(zhǔn)確切割DNA分子“分子縫合針”“分子運(yùn)輸車”將DNA片段連接起來(lái)將體外重組好的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞重組DNA技術(shù)所需的三種基本工具：限制性內(nèi)切核酸酶DNA連接酶載體

1.來(lái)源：主要從

中分離純化來(lái)的

2.特點(diǎn):能夠識(shí)別

的

,并使每一條鏈中特定部位的

斷開(kāi)。3.識(shí)別序列:

限制酶的識(shí)別序列由

個(gè)核苷酸組成，少數(shù)4個(gè)、8個(gè)或其他數(shù)量根據(jù)P71內(nèi)容，說(shuō)說(shuō)限制酶的相關(guān)問(wèn)題：限制酶作用部位4.限制酶切割產(chǎn)生的末端:

或

。一、限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”簡(jiǎn)稱：限制酶原核生物雙鏈DNA分子特定核苷酸序列磷酸二酯鍵大多數(shù)6黏性末端平末端EcoRⅠ屬名Escherichia首字母種名coli前兩個(gè)字母R型菌株從中分離的第一個(gè)限制酶例如：流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae)d株中先后分離到3種限制酶，則分別命名為:HindIHindIIHindIII限制酶的命名EcoRⅠ：大腸桿菌（Escherichia

coli）R型菌株中分離出的第一個(gè)限制酶；SmaⅠ：粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia

marcescens）中分離出的第一個(gè)限制酶。資料卡3.識(shí)別序列:限制酶(EcoRⅠ)能識(shí)別

序列，并在

和

之間切________

鍵,形成

末端。-GAATTC--CTTAAG-GA黏性磷酸二酯EcoRI5'5'3'3'黏性末端中心軸線SmaI5'5'3'3'平末端限制酶(SmaⅠ)能識(shí)別

序列，并在

和

之間切割形成

末端。-CCCGGG--GGGCCC-GC平中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列P71

旁欄思考題P74

練習(xí)與應(yīng)用

你能根據(jù)所掌握的知識(shí)，推測(cè)限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么嗎？切割侵入細(xì)胞的外源DNA，以保證自身安全。1.想一想，為什么限制酶不切割細(xì)菌（原核生物）本身的DNA分子？原核生物DNA不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已被修飾對(duì)比做題【問(wèn)題探究1】下圖甲是一個(gè)DNA片段，箭頭處代表不同限制酶的切點(diǎn)，據(jù)圖回答：（1）用EcoRⅠ酶切，能得到

種DNA片段；（2）用PstⅠ完全酶切，能得到

種DNA片段；（3）同時(shí)用SmaⅠ和PstⅠ完全酶切，能得到

種DNA片段；（4）只用PstⅠ酶切，最多能得到

種DNA片段。2355①②③【問(wèn)題探究2】請(qǐng)判斷：①和

可形成重組DNA分子，但①和

之間不能。③②SpeⅠ_______HindⅢ_________XbaⅠ_______XhoⅠ______

_2.同種限制酶切割形成的黏性末端相同嗎？3.（拓展2第1問(wèn)）哪種限制酶切割產(chǎn)生的片段能與SpeⅠ切割產(chǎn)生的片段相連接？

為什么？4.（拓展2第2問(wèn)）不同的限制酶切割可能產(chǎn)生相同的黏性末端

，這在基因工程操作中有什么意義？相同CTAGCTAGTCGA【練習(xí)】(P75拓展應(yīng)用2改編)1.哪幾種限制酶切割可以形成黏性末端？請(qǐng)寫(xiě)出對(duì)應(yīng)的黏性末端（注意：從5’往3’讀）XbaⅠ兩者切割產(chǎn)生了相同的黏性末端平末端AGCT

識(shí)別DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶被稱為同尾酶。

同尾酶使構(gòu)建載體時(shí)，切割位點(diǎn)的選擇范圍擴(kuò)大。例如，我們選擇了用某種限制酶切割載體，如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有該限制酶的識(shí)別序列，那么用該限制酶切割含有目的基因的DNA片段時(shí)，目的基因就很可能被切斷；這時(shí)可以考慮用合適的同尾酶（目的基因的核苷酸序列中不能有它的識(shí)別序列）來(lái)獲取目的基因。【拓展延伸】某DNA分子中含有某限制酶的1個(gè)識(shí)別序列,用該限制酶切割該DNA分子,可能形成的2個(gè)DNA片段是(

)A.①②

B.③④C.①③

D.②④B【練習(xí)】要想獲得某個(gè)特定性狀的目的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性(平)末端？如果把兩種來(lái)源不同的DNA用同種限制酶來(lái)切割，會(huì)怎樣？要切2個(gè)切口，產(chǎn)生4個(gè)黏性(平)末端。會(huì)產(chǎn)生相同的黏性(平)末端思考G

AA

TT

CC

TT

AA

GG

AA

TT

CC

TT

AA

GG

C

TT

AA

AA

TT

C

GGC

TT

AA

AA

TT

C

G用同種限制酶切割(EcoRⅠ)問(wèn)題二：如何將目的基因與載體DNA相連接?

缺口怎么辦？G

C

TT

AA

AA

TT

C

GGCTTAA

AA

TT

C

G1.作用：2.種類和差別：類型E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來(lái)源________________________功能只縫合__________縫合____________和____________結(jié)果恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的_________________大腸桿菌T4噬菌體可互補(bǔ)的黏性末端可互補(bǔ)的黏性末端平末端

(效率較低)磷酸二酯鍵將切下的DNA片段拼接成新的DNA分子二、DNA連接酶——“分子縫合針”重組DNA分子【思考】1、為什么不同生物的DNA分子能拼接起來(lái)?提示:①DNA分子的基本組成單位都是四種脫氧核苷酸;②雙鏈DNA分子的空間結(jié)構(gòu)都是規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu);③DNA分子都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。2．為什么一種生物的基因可以在另一種生物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)？(1)基因是控制生物性狀的獨(dú)立遺傳單位。(2)遺傳信息的傳遞都遵循中心法則。(3)生物界共用一套遺傳密碼。兩DNA片段要具有互補(bǔ)的黏性末端才能拼起來(lái)可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，E·coliDNA連接酶的縫合作用DNA連接酶——“分子縫合針”三

可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶連接黏性末端即恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵T4DNA連接酶可把平末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，效率低DNA連接酶——“分子縫合針”三AATTGCAATTAATTDNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶回顧：DNA聚合酶的作用DNA連接酶DNA聚合酶相同點(diǎn)作用實(shí)質(zhì)化學(xué)本質(zhì)不同點(diǎn)模板作用對(duì)象作用結(jié)果 用途都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì) 不需要以DNA的一條鏈為模板形成完整的重組DNA分子形成DNA的一條鏈基因工程DNA復(fù)制只能將單個(gè)核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵只能催化兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵【歸納】DNA連接酶與DNA聚合酶的比較：根據(jù)所學(xué)知識(shí)，完成以下填空：①限制酶②解旋酶③DNA連接酶④DNA聚合酶ba1.切斷a處的酶為_(kāi)______

2.連接a處的酶為_(kāi)______3.切斷b處的酶為_(kāi)______①③④②a：磷酸二酯鍵；b：氫鍵反饋練習(xí)：歸納提升與DNA相關(guān)的4種酶的比較名稱作用部位作用結(jié)果限制酶DNA連接酶DNA聚合酶DNA（水解）酶磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵將DNA切成兩個(gè)片段將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸解旋酶

1.DNA連接酶是重組DNA技術(shù)常用的一種工具酶。下列相關(guān)敘述正確的是()A.能連接DNA分子雙鏈堿基對(duì)之間的氨鍵B.能將單個(gè)脫氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵C.能連接用同種限制酶切開(kāi)的兩條DNA片段，重新形成磷酸二酯鍵D.只能連接雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，不能連接雙鏈DNA片段的平末端一、概念檢測(cè)練習(xí)與應(yīng)用（P74）C下圖表示DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化,圖中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是()A.①②③④ B.①②④③C.①④②③ D.①④③②C【練習(xí)】…TATCGTACGATAGGTACTTAA…ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC…GCCGTATG……TCCTAG…AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGAATTCCATAC…GGTATG…GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG5′3′5′3′5′3′5′3′思考?討論重組DNA分子1.剪刀和透明帶分別代表哪種“分子工具”？限制酶DNA連接酶2.你制作的黏性末端的堿基能不能互補(bǔ)配對(duì)？如果不能，可能是什么原因造成的？3.你插入的DNA片段能稱得上一個(gè)基因嗎？可能是剪切位點(diǎn)或鏈接位點(diǎn)的選擇不對(duì)（也可能是其他原因）。比如在書(shū)寫(xiě)將要重組的兩個(gè)DNA分子時(shí)，一般要求有同一種限制酶的識(shí)別和切割位點(diǎn)，這樣切割后才會(huì)露出相同的黏性末端，否則黏性末端不同，堿基就無(wú)法配對(duì)。不能，真正的基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段，且含有幾百至幾千個(gè)不等的堿基對(duì)。思考·討論1.載體的作用是什么？2.有哪些種類？3.常用的載體是哪種？4.作為載體應(yīng)具備什么條件？三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”閱讀教材P73，回答下列問(wèn)題：作為運(yùn)載工具，將外源基因送入受體細(xì)胞質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒質(zhì)粒本質(zhì)：一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于真核細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的很小的環(huán)狀雙鏈DNA分子。提示：①載體能與外源基因連接需具備什么條件？②載體要使攜帶的外源基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在需具備什么條件？③我們用肉眼看不到載體是否進(jìn)入受體細(xì)胞，為了便于篩選重組DNA分子，載體需要具備什么條件？載體應(yīng)具備的條件：(1)有

，供外源DNA片段（基因）插入其中。一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)(3)具有特殊的

，

。標(biāo)記基因(2)能在受體細(xì)胞中進(jìn)行

或

上，隨受體DNA同步復(fù)制。自我復(fù)制整合到受體DNA如抗生素的抗性基因（氨芐青霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因）便于重組DNA分子的篩選（4）對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害、易分離2.在重組DNA技術(shù)中，將外源基因送入受體細(xì)胞的載體可以是()A.大腸桿菌的質(zhì)粒B.切割DNA分子的酶C.DNA片段的黏性末端D.用來(lái)識(shí)別特定基因的DNA探針一、概念檢測(cè)A練習(xí)與應(yīng)用（P74）限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是

和

。下圖表示四種質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段,其中箭頭所指部位為限制酶的切割位點(diǎn),質(zhì)粒的陰影部分表示標(biāo)記基因。下列適于作為圖示目的基因載體的質(zhì)粒是(

)A1、選目的基因兩端和載體都有的酶切位點(diǎn)；2、所選酶切位點(diǎn)不能破壞目的基因以及標(biāo)記基因。方法總結(jié)：---選擇酶切位點(diǎn)的原則【練習(xí)】限制酶DNA連接酶載體①對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害；②有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；③有特殊的標(biāo)記基因；④能自我復(fù)制或能整合到宿主DNA上。質(zhì)粒、λ噬菌體衍生物、動(dòng)植物病毒基因工程的基本工具作為載體的條件種類:磷酸二酯鍵來(lái)源：主要來(lái)源于原核生物特點(diǎn)：作用部位：具有專一性結(jié)果：形成黏性末端或平末端連接部位：磷酸二酯鍵種類：E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶作用：把兩條雙鏈DNA片段拼接起來(lái)

【課堂小結(jié)】1.如圖表示由不同的限制酶切割而成的DNA末端及相關(guān)的酶作用位點(diǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A.甲、乙、丙都屬于黏性末端B.甲、乙片段可形成重組DNA分子,但甲、丙不能C.DNA連接酶的作用位點(diǎn)在乙圖中b處D.切割甲的限制酶不能識(shí)別由甲、乙片段形成的重組DNA分子C2.下列有關(guān)DNA連接酶的敘述,正確的是(

)A.T4DNA連接酶只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間連接起來(lái)B.E.coliDNA連接酶能將雙鏈DNA片段平末端之間進(jìn)行連接C.DNA連接酶能恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵D.DNA連接酶可連接DNA雙鏈的氫鍵,使雙鏈延伸C3.質(zhì)粒是基因工程中最常用的目的基因運(yùn)載工具。下列有關(guān)敘述正確的是(

)A.質(zhì)粒是只存在于原核細(xì)胞中能自我復(fù)制的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子B.在基因工程操作中,天然質(zhì)?？芍苯佑米鬏d體C.攜帶目的基因的重組質(zhì)粒只有整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上才會(huì)隨后者的復(fù)制而復(fù)制D.質(zhì)粒上的抗性基因常作為標(biāo)記基因供重組DNA分子的篩選D4.下面是四種不同質(zhì)粒的示意圖,其中ori為復(fù)制必需的序列,AmpR為氨芐青霉素抗性基因,Tetr為四環(huán)素抗性基因,箭頭表示同一種限制酶的酶切位點(diǎn)。下列有關(guān)敘述正確的是(

)A.基因AmpR和Tetr是一對(duì)等位基因,常作為基因工程中的標(biāo)記基因B.質(zhì)粒指細(xì)菌細(xì)胞中能自我復(fù)制的小型環(huán)狀的DNA和動(dòng)植物病毒的DNAC.限制酶的作用部位是DNA分子中特定的兩個(gè)核苷酸之間的氫鍵D.用質(zhì)粒4將目的基因?qū)氪竽c桿菌,該菌不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)D5.目的基因插入的位置不同,轉(zhuǎn)基因細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況也不同,下圖所示是目的基因插入位置(插入點(diǎn)有A、B、C),寫(xiě)出下列情況下轉(zhuǎn)基因細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。插入點(diǎn)接種到含氨芐青霉素培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況接種到含四環(huán)素培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況ABC不生長(zhǎng)生長(zhǎng)生長(zhǎng)生長(zhǎng)生長(zhǎng)不生長(zhǎng)6.選用如圖所示載體將目的基因?qū)爰?xì)菌中并將含有目的基因的細(xì)菌篩選出來(lái)。在培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基中添加抗生素B,則應(yīng)該選擇的限制酶為

;在培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基中添加抗生素A,則應(yīng)該選擇的限制酶為

。

①或②①7.(2023·新課標(biāo)卷)某同學(xué)擬用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA連接酶為工具,將目的基因(兩端含相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn))和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接,以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示。下列重組表達(dá)載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是(

)A.質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割,用E.coliDNA連接酶連接B.質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割,用T4DNA連接酶連接C.質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割,用T4DNA連接酶連接D.質(zhì)粒和目的基因都用酶2和酶4切割,用E.coliDNA連接酶連接C8.圖中字母表示不同的限制酶，箭頭表示它們的切割位點(diǎn)，請(qǐng)選出正確的限制酶D和E拓展延伸同種限制酶切目的基因和載體，重新連接會(huì)有哪些情況？DNA的粗提取與鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理：1．提取DNA的原理利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精。(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。2．鑒定DNA的原理在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。DNA含量相對(duì)較高的生物組織，如新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花和豬肝等。

不能選擇哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，因?yàn)椴溉閯?dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒(méi)有細(xì)胞核和線粒體，幾乎不含DNA。二、材料用具1.選材：注意：2.試劑：①研磨液②體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精③2mol/L的NaCl溶液④二苯胺試劑⑤蒸餾水——含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl——析出DNA——溶解DNA——鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用溶解并提取DNA0DNA溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L探究.實(shí)踐四、實(shí)驗(yàn)步驟1.稱取約30g洋蔥，切碎，然后放入研缽中，倒入10mL

，充分研磨。2.去除濾液中的雜質(zhì)（方案一）在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液

到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取

。（方案二）將研磨液倒入塑料離心管中，在1500r/min的轉(zhuǎn)速下

5min，再取

放入燒杯中。溶解并提取DNA研磨液過(guò)濾上清液離心上清液3.DNA的析出（方案一）在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的

（體積分?jǐn)?shù)為95%），靜置2～3min，溶液中出現(xiàn)的

就是粗提取的DNA。

用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分。（方案二）將溶液倒入塑料離心管中，在10000r/min的轉(zhuǎn)速下

5min，棄上清液，將

（粗提取的DNA）晾干。四、實(shí)驗(yàn)步驟析出DNA，使DNA與雜質(zhì)分開(kāi)酒精溶液白色絲狀物離心管底的沉淀物取兩支20mL的試管，各加入5mL

。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。

然后，向兩支試管中各加入4mL的

?；旌暇鶆蚝?，將試管置于

中加熱5min。

待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明了什么？四、實(shí)驗(yàn)步驟2mol/L的NaCl溶液二苯胺試劑沸水（沸水?。ìF(xiàn)配現(xiàn)用，保證實(shí)驗(yàn)效果）（將絲狀物/DNA溶解后利于鑒定）思考·討論4.DNA的鑒定(1)選取洋蔥作為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)要充分地研磨,如果研磨不充分,會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響?(2)圖甲實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)如何使用玻璃棒攪拌?為什么?