TOSOH-HLC-723G7型全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

PAGEPAGE1TOSOHHLC-723G7型全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程檢驗(yàn)原理基于高效液相色譜分析法原理，通過陽離子交換柱利用電位差將血紅蛋白組分分離。利用3種不同濃度洗脫液使包括血紅蛋白Ac1在內(nèi)的多種血紅蛋白進(jìn)行梯度分離，分離成6個(gè)部分。經(jīng)檢測(cè)器檢測(cè)分離后的各血紅蛋白組分的吸光度，以百分率形式表示出各血紅蛋白的組分結(jié)果與色譜圖,傳送打印。標(biāo)本2.1標(biāo)本的準(zhǔn)備2.1.1標(biāo)本的采集和抗凝2.1.1.1全血模式：抽取靜脈血，用EDTA抗凝，當(dāng)用同一個(gè)試管進(jìn)行HbA1c檢測(cè)和葡萄糖等檢測(cè)時(shí)，需用EDTA和NaF抗凝。全血置4℃2.1.1.2稀釋血模式：采集靜脈血或末梢血，用去離子水或溶血素/清洗液進(jìn)行稀釋。稀釋血需立刻檢測(cè)。2.2標(biāo)本的容器2.2.1HLC-723G7分析儀上既可使用原始樣本管，也可以使用樣品2.2.2最少樣本量要求：原始樣本管中全血為1ml；樣品杯中全血為50ml；樣本杯中的稀釋血為稀釋后400ml（建議患者樣本的稀釋比例以全血:50m全血:50mL稀釋液:400mL1ml全血2.2.3原始樣本管和樣品2.2.3.1原始管：分析儀可以從不同尺寸的原始采血管中通過蓋帽穿刺的方式直接吸取樣本。尺寸為φ15×75mm和φ15×100mm的試管可以直接放置在試管架上。尺寸為φ12～φ14mm的原始管在使用適配器后也可放置。在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)附件中附帶有φ13的適配器。φ12和φ14mm的試管適配器編號(hào)請(qǐng)見“消耗品”2.2.3.2樣品杯：儀器與試劑3.1TOSOHHLC-723G7型全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀3.2消耗品的種類、規(guī)格和儲(chǔ)存條件消耗品名稱規(guī)格儲(chǔ)存要求TSKgelG7HSi1個(gè)/盒4-15G7洗脫緩沖液No.1(S)800ml/包4-25℃保存G7洗脫緩沖液No.2(S)800ml/包4-25℃保存G7洗脫緩沖液No.3(S)800ml/包4-25℃保存溶血素/清洗液（L）2000ml/瓶4-25℃保存HbA1c校準(zhǔn)品（定值1,2）4ml×5/盒2-8℃保存HbA1c質(zhì)控品（低值、高值）0.5ml×4/盒2-8℃保存過濾器5片/包常溫干燥打印紙40m×60mm3.3層析柱的準(zhǔn)備和更換3.3.13.3.1.1當(dāng)層析柱計(jì)數(shù)達(dá)到15003.3.1.2當(dāng)超過初始?jí)毫?MPa3.3.1.3當(dāng)色譜峰（特別是SA1c峰，陰影指示）變得平坦或分解23.33.3.2.1等待檢測(cè)結(jié)束STAND-BY顯現(xiàn)，或按STOP鍵使檢測(cè)儀恢復(fù)到STAND-BY3.3.2.23.3.2.33.3.2.4確認(rèn)主屏（第二屏）上SV1鍵已打開（O）3.3.2.53.3.2.6按PUMP3.3.2.73.3.2.8先將新層析柱與泵側(cè)（入口）相連，留意標(biāo)簽上的箭圖表示的液流方向，指示緩沖液從右到左流入層析柱。當(dāng)緩沖液從層析柱出口流出，按PUMP3.3.2.9將層析柱出口與檢測(cè)器一側(cè)（左邊）相連，按PUMP3.3.2.10確認(rèn)泵壓力在6MPa3.3.2.113.3.2.12按PUMP3.4過濾器的準(zhǔn)備和更換3.4.13.4.1.1當(dāng)過濾器計(jì)數(shù)達(dá)到4003.4.1.2當(dāng)使用該過濾器是，泵壓力超過初始?jí)毫?MPa3.4.23.4.2.1等待檢測(cè)結(jié)束STAND-BY顯現(xiàn)，或按STOP鍵使檢測(cè)儀恢復(fù)到STAND-BY3.4.2.23.4.2.3確認(rèn)主屏（第二屏）上SV1鍵已打開（O3.4.2.43.4.2.53.4.2.63.4.2.73.4.2.8將實(shí)驗(yàn)室用抹布放在過濾器固定裝置的出口并按PUMP鍵以驅(qū)除元件內(nèi)大氣泡。核實(shí)無氣泡從出口側(cè)出來，按PUMP3.4.2.93.4.2.10再次按PUMP鍵啟動(dòng)洗脫液運(yùn)送。確認(rèn)泵壓力在6MPa3.5試劑的準(zhǔn)備和更換3.5.1當(dāng)試劑剩余不多時(shí)，請(qǐng)盡早更換緩沖液、溶血素/清洗液。剩余緩沖液的體積在主屏（第二屏幕）通過圖例顯示，在主屏（第一屏幕）上觸壓下行鍵即可進(jìn)入第二主屏。3.5.23.5.2.1等待檢測(cè)結(jié)束STAND-BY顯現(xiàn)，或按STOP鍵使檢測(cè)儀恢復(fù)到STAND-BY3.5.2.2用新試劑替換緩沖液或溶血/3.5.2.33.5.2.43.5.2.5當(dāng)使用瓶裝試劑時(shí)，須擰緊瓶蓋。但不可用paraffin3.5.2.6在維護(hù)屏幕按REAGENTCHANGE3.5.2.7相對(duì)應(yīng)的試劑更換鍵（D/W）變亮。（如：當(dāng)緩沖液No.1和No.2已更換，鍵#1、#23.5.2.8按CHANGE鍵。確認(rèn)信息將出現(xiàn)。如果全好，按OK3.5.2.93.5.2.10當(dāng)CHANGE…出現(xiàn)，操作既完成。確認(rèn)試劑更換后圖例回復(fù)到100%3.5.2.11再次開機(jī)時(shí)儀器自動(dòng)進(jìn)行緩沖液No.1、No.23.5.33.5.3.1等待檢測(cè)結(jié)束STAND-BY顯現(xiàn)，或按STOP鍵使檢測(cè)儀恢復(fù)到STAND-BY3.5.3.2按維護(hù)（MAINTE）屏上的試劑更換鍵（REAGENTCHANGE3.5.3.33.5.3.4按灌注（PRIME）鍵，確認(rèn)信息將出現(xiàn)。如果全好，按OK3.5.3.53.5.3.6當(dāng)PRIMING…3.6打印紙的準(zhǔn)備3.6.13.63.6.33.6.43.6.5將紙支持桿回復(fù)至最后面并將紙插入到打印機(jī)中。紙將自動(dòng)傳送。因?yàn)橹С謼U安裝有23.6.6校準(zhǔn)4.1分析儀是用帶有不同HbA1c值的LEVEL1和LEVEL2校準(zhǔn)液來校準(zhǔn)的。使用TOSOHHbA1cCalibratorSet（TOSOHHbA1c全套校準(zhǔn)品）來校準(zhǔn)。這套校準(zhǔn)品是遵循日本糖尿病協(xié)會(huì)糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)程序基礎(chǔ)上建立的二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。不能使用其他的校準(zhǔn)品。4.2確定在下列情況下進(jìn)行校準(zhǔn)。當(dāng)需要改變化驗(yàn)條件和相關(guān)條件時(shí)，可以按照需要不斷地進(jìn)行校準(zhǔn)。4.2.1每星期一次：如果每天檢測(cè)100個(gè)以內(nèi)的樣品。4.2.2每天一次：如果在一臺(tái)儀器上每天要檢測(cè)100個(gè)以上的樣品。4.2.3如果質(zhì)控結(jié)果超出了范圍4.2.4在替換層析柱后4.2.5在分析儀維護(hù)后4.3每瓶校準(zhǔn)品加4ml去離子水后靜置5-10分鐘，輕晃使之溶解，充份混勻并貼上稀釋日期的標(biāo)簽，4℃4.4校準(zhǔn)操作4.4.1按主屏幕中的MENU鍵進(jìn)入第二屏，再按下PARAMER鍵進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置界面①點(diǎn)擊CALIB-1。②按右邊數(shù)字界面輸入Calibrator1的校準(zhǔn)值。③左邊CALIB-1值被修改。④同樣方法輸入CALIB-2的值。按EXIT鍵退出，進(jìn)入主屏幕。4.4.2把Level1與Level2校準(zhǔn)液放置在第一個(gè)樣品架的1號(hào)和2號(hào)位置的樣品杯中。4.4.3按主屏幕上的CALIB（校準(zhǔn)）鍵，使之高亮。按下START4.5校準(zhǔn)完成后，儀器自動(dòng)進(jìn)入樣品分析程序。校準(zhǔn)出現(xiàn)錯(cuò)誤時(shí)，儀器將停止進(jìn)入樣品分析程序，并返回，需重新設(shè)置校準(zhǔn)。操作步驟5.1開機(jī)5.1.1將電源開關(guān)按向[｜]5.1.25.1.3按下顯示屏右上方的POWER5.1.4儀器會(huì)自動(dòng)依次啟動(dòng)檢查采樣單元，泵清洗，灌注緩沖洗脫液，并進(jìn)行取樣管路和稀釋管路的首次沖洗。開始WARMINGUP5.1.5儀器預(yù)熱完成，將進(jìn)入STAND-BY5.2常規(guī)檢測(cè)5.2.1在打開電源鍵后，第一個(gè)出現(xiàn)的屏幕是主屏幕（第一屏幕）。在顯示屏最上方會(huì)顯示出HbA1c/STDANALYSIS（HbA1c/標(biāo)準(zhǔn)分析）。5.2.2在分析進(jìn)行時(shí)，主屏幕會(huì)一直保持顯示信息。當(dāng)前的操作狀態(tài)會(huì)顯示在顯示屏的左上方。且出現(xiàn)下列狀態(tài)指示。WARMINGUP（預(yù)溫）STAND-BY（待機(jī)）ANALYSIS（分析）WASH（沖洗）BUFFPRIME（緩沖液灌注）PUMPCLEAN（清洗泵）5.2.3在預(yù)溫狀態(tài)下的標(biāo)本檢測(cè)5.2.3.1在進(jìn)行WARNINGUP（升溫）操作時(shí)，把樣品放置在標(biāo)本架上，金屬終止標(biāo)志放在最后一個(gè)樣本架的末端，然后放入進(jìn)樣軌道，并按下START（開始）鍵。5.2.3.2等待WARNINGUP（預(yù)溫）結(jié)束。5.2.3.3系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)進(jìn)入ANALYSIS（分析）狀態(tài),開始分析標(biāo)本。5.2.4在待機(jī)狀態(tài)下的標(biāo)本檢測(cè)5.2.4.1在完成預(yù)溫，分析或沖洗操作后，分析儀會(huì)進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)。在這種狀態(tài)下，泵會(huì)停止運(yùn)行，不再消耗試劑。5.2.4.2在此狀態(tài)下可以把樣品放置在標(biāo)本架上，金屬終止標(biāo)志放在最后一個(gè)樣本架的末端，然后放入進(jìn)樣軌道，按下START（開始）鍵，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)進(jìn)入ANALYSIS（分析）狀態(tài),開始分析標(biāo)本。5.2.5在分析狀態(tài)下的標(biāo)本檢測(cè)5.2.5.1確定前批樣本還沒檢測(cè)完畢，并將前批最后一個(gè)樣本架末端的金屬終止標(biāo)志拔下。5.2.5.2把增測(cè)的樣品放置在標(biāo)本架上，金屬終止標(biāo)志放在最后一個(gè)樣本架的末端，然后放入進(jìn)樣軌道。5.2.5.3儀器會(huì)將增加的樣本分析完畢。5.2.6在沖洗狀態(tài)下的標(biāo)本檢測(cè)等待儀器沖洗完畢，進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)，后開始檢測(cè)樣本。5.2.7在緩沖液灌注狀態(tài)下的標(biāo)本檢測(cè)5.2.7.1當(dāng)首次打開電源時(shí)，分析器會(huì)自動(dòng)吸取并輸送2號(hào)和1號(hào)洗脫液各5ml，以便用新的洗脫液來替換管道中原有的（這個(gè)操作就叫PRIME）。不需替換3號(hào)洗脫液，這是因?yàn)?號(hào)洗脫液的含鹽濃度很高，對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒有影響。5.2.7.2另外，在MAINTE-REAGENTCHANGE（維護(hù)--試劑替換）屏幕中，當(dāng)在進(jìn)行灌注或替換緩沖液時(shí)，顯示屏上會(huì)顯示BUFFPRIME（灌注緩沖液）狀態(tài)。5.2.7.3等待儀器進(jìn)入WARMINGUP（預(yù)溫）或STAND-BY（待機(jī)）狀態(tài)時(shí)，可以把樣品放置在標(biāo)本架上，金屬終止標(biāo)志放在最后一個(gè)樣本架的末端，然后放入進(jìn)樣軌道，按下START（開始）鍵，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)進(jìn)入ANALYSIS（分析）狀態(tài),開始分析標(biāo)本。5.2.8在清洗泵狀態(tài)下的標(biāo)本檢測(cè)5.2.8.1為了除去泵活塞上的雜質(zhì)或鹽沉淀，在打開電源后，活塞密封裝置的背面就會(huì)被溶血/清洗液（5ml）自動(dòng)沖洗，且沖洗完全。5.2.8.2等待儀器進(jìn)入WARMINGUP（預(yù)溫）或STAND-BY（待機(jī)）狀態(tài)時(shí)，可以把樣品放置在標(biāo)本架上，金屬終止標(biāo)志放在最后一個(gè)樣本架的末端，然后放入進(jìn)樣軌道，按下START（開始）鍵，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)進(jìn)入ANALYSIS（分析）狀態(tài),開始分析標(biāo)本。5.3急診樣品檢測(cè)（STAT）5.3.1如果在ANALYSIS（分析）時(shí)需要一些急診檢測(cè)的樣品，把樣品放在試管槽中間的STAT放樣處。但記住STAT樣品在待機(jī)，沖洗，升溫狀態(tài)時(shí)是不能進(jìn)行分析的。確定已經(jīng)沒有STAT樣品處于分析狀態(tài)后，才能打開STAT蓋子。5.3.2先拿走放樣處原有的樣品容器，然后放入需要檢測(cè)的樣品。5.3.3在主屏幕上按下STAT鍵5.3.4出現(xiàn)STAT（急診樣品檢測(cè)）屏幕5.3.5按照需要記錄一個(gè)樣品ID號(hào)。5.3.6選擇容器的類型（如果分析的是全血，不需要按任何鍵。如果分析的是稀釋后的樣品，則按下CUP鍵。此鍵在按下后會(huì)亮起）和稀釋度，然后安全地關(guān)閉STAT（預(yù)先樣品檢測(cè)）放樣處的蓋子。5.3.7按下START（開始）鍵5.3.8當(dāng)STAT（急診樣品檢測(cè)）屏幕的底部顯示SCHEDULED時(shí)，表示登記完成。按下EXIT（退出）鍵。當(dāng)顯示回到主屏幕時(shí)，STAT鍵會(huì)亮起。5.3.9在當(dāng)前的檢測(cè)結(jié)束后，就會(huì)馬上進(jìn)行STAT（預(yù)先樣品檢測(cè)）的分析。5.3.10在取樣結(jié)束后，STAT鍵會(huì)恢復(fù)到通常狀態(tài)（即指示燈變暗）。打開前蓋，取走樣品。5.4關(guān)機(jī)5.4.1分析結(jié)束，儀器自動(dòng)進(jìn)入WASH（沖洗）狀態(tài)，完成沖洗后，儀器進(jìn)入STAND-BY（待機(jī)）狀態(tài)如果1小時(shí)內(nèi)鍵區(qū)或觸摸屏上沒有任何指令輸入，電源會(huì)自動(dòng)關(guān)閉。5.4.2待機(jī)時(shí)間可以通過PARAMETER(參數(shù))界面中的OFFTIME(關(guān)機(jī)時(shí)間)來設(shè)定。5.4.3一般情況不進(jìn)行緊急關(guān)機(jī)操作，如果必須，在待機(jī)狀態(tài)將主電源開關(guān)按向[O]一側(cè)。質(zhì)控6.1配合校準(zhǔn)品使用質(zhì)控品TOSOHHbA1cControlHis，來控制每天的測(cè)試結(jié)果。6.2每瓶質(zhì)控品加0.5ml去離子水后靜置30分鐘，輕晃使之溶解，充份混勻并貼上稀釋日期的標(biāo)簽，2℃6.3分析時(shí)以1:50進(jìn)行稀釋（10ul稀釋液＋500ul去離子水），以樣本模式進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果在靶值范圍內(nèi)，表示儀器狀態(tài)良好，可以進(jìn)行檢測(cè)。參考范圍及臨床意義7.1HbA1C是血糖監(jiān)測(cè)的重要標(biāo)準(zhǔn),測(cè)定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3個(gè)月的血糖控制情況。結(jié)果臨床意義4%~6%正常值＜6%：控制偏低，患者容易出現(xiàn)低血糖。6%~7%：控制理想。7%~8%：可以接受。8%~9%：控制不好＞9%：控制很差，慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素。7.2HbA1C增高還出現(xiàn)在用含葡萄糖的透析液作血透的慢性腎衰病人，地中海貧血和白血病病人。降低可能是溶血性及失血性貧血，慢性腎衰，慢性持續(xù)性低血糖癥等。7.3作為輕癥、Ⅱ型、“隱性”糖尿病的早期診斷指標(biāo)。7.4可以列為糖尿病的普查和健康檢查的項(xiàng)目。7.5對(duì)預(yù)防糖尿病孕婦的巨大胎兒、畸形胎、死胎，以及急、慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的監(jiān)督具有重要意義。7.6對(duì)于病因尚未明確的昏迷或正在輸注葡萄糖的搶救者，急查糖化血紅蛋白具有鑒別診斷的價(jià)值。干擾與潛在的變異8.1抗干擾能力：葡萄糖≤1000mg/dl，氰酸≤50mg/dl，乙醛≤50mg/dl，游離膽紅素≤180mg/dl，結(jié)合膽紅素≤200mg/dl，乳糜≤2860濁度單位，阿司匹林≤50mg/dl，抗壞血酸≤50mg/dl，尿酸≤50mg/dl時(shí)，檢測(cè)無干擾。8.2血液病患者尤其是溶血性貧血的患者，其紅細(xì)胞壽命縮短，導(dǎo)致GHb形成的時(shí)間也相對(duì)應(yīng)縮短，由此測(cè)定的結(jié)果就會(huì)受到影響，所以當(dāng)某些基礎(chǔ)疾病存在繼發(fā)性溶血現(xiàn)象，往往使GHb測(cè)得值偏低，如肝硬化、脾腫大、糖尿病性腎病患者的EPO治療以及極度貧血患者的輸血治療后等。腎病患者體內(nèi)過多的尿素生成，其代謝產(chǎn)物結(jié)合于Hb的α鏈及β鏈N端的氨基，形成氨基甲酰Hb(carbamylHb),主要分離出HbA1a+b,HbA1c及HbAo,此時(shí)測(cè)得的GHb偏高（HPLC法），而慢性酒精中毒患者因生成乙酰醛的結(jié)合物，也會(huì)引起結(jié)果偏高。8.3血紅蛋白珠蛋白鏈結(jié)構(gòu)異常和合成不均勻會(huì)導(dǎo)致異常血紅蛋白的產(chǎn)生。雖然異常血紅蛋白的存在未必有一定的臨床表現(xiàn)，但HbS、HbC、HbE的突變點(diǎn)