XPA基因多態(tài)性與食管癌、賁門癌發(fā)病風險的關聯(lián)

1/1XPA基因多態(tài)性與食管癌、賁門癌發(fā)病風險的關聯(lián)XPA基因多態(tài)性與食管癌、賁門癌發(fā)病風險的關聯(lián)XPA基因多態(tài)性與食管癌、賁門癌發(fā)病風險的關聯(lián)【摘要】目的探討XPA基因5非編碼區(qū)轉錄啟始密碼子ATG上游第4位A23G和228密碼子G709A單核苷酸多態(tài)性與河北省食管癌、賁門癌高發(fā)區(qū)磁縣和涉縣人群食管鱗狀細胞癌(Esophagealsquamouscellcarcinoma,ESCC)和賁門腺癌(Gastriccardiacadenocarcinoma,GCA)遺傳易感性的關系。

方法采用聚合酶鏈反應限制性片段長度多態(tài)性(PCRRFLP)分析方法檢途測327名ESCC患者、253名GC謇A患者和612名健康對照的XPAA2嫻3G和G709ASNP的基因型。

結果鑌XPA基因A23G的等位基因和基因型效頻率在ESCC和健康對照之間,總體分奚布有顯著性差異。

與A/A基因型相比,A/G+G/G基因型可顯著降低ESC挨C的發(fā)病風險。

分層分析顯示，此保護作序用在非吸煙組和吸煙組人群中尤為明顯。

釔此保護作用在UGIC家族史陰性人群中茵也很明顯。

在GCA和健康對照之間,A氧23G等位基因頻率和基因型頻率總體分諺布無顯著性差異。

與A/A基因型相比,デA/G+G/G基因型可顯著降低GCA隍的發(fā)病風險。

分層分析顯示,在非吸煙組鑭中,GCA患者組和健康對照之間，基因糗型頻率分布有顯著性差異。

與A/A基因包型相比，A/G+G/G基因型可顯著降漱低非吸煙人群GCA的發(fā)病風險。

結論X糊PA基因A23G含突變等位基因的基因蕪型可能是影響河北省食管癌、賁門癌的高餉發(fā)區(qū)磁縣和涉縣人群ESCC發(fā)病風怡險的因素之一。

【關鍵詞】食管鱗狀誆細胞癌賁門腺癌XPA基因多態(tài)性機體銀的DNA修復系統(tǒng)在維持基因組功能的整款體性以及修復致癌因素所致的損傷中起重湎要作用[1]。

DNA修復能力低下與癌歟癥風險增高相關[2]。

核苷酸切除修復蒽是人類最主要和最靈活的的DNA損傷修郅復途徑。

XPA是一種進化保守的DN卷A修復酶，在核苷酸切除修復通路中，它與RPA[3]、XPC、TFIIH、豳XPG、ERCC1XPF復合體及D屢NA聚合酶一起共同作用,完成DNA的躐修復[4]。

XPA多態(tài)性的改變可能會┑影響其蛋白質的功能進而改變個體DNA耘的損傷修復能力。

XPA多態(tài)性與肺癌相關研究已有報道[5,6]。

但有關XP抱A多態(tài)性與食管癌和賁門癌關系的研究尚剽未見報道。

本研究應用聚合酶鏈反應限制性片段長度多態(tài)性(Polymerasechainreactionrestrictionfragmen窀tlengthpolymorphis┆m,PCRRFLP)分析方法，探討嚴XPA基因多態(tài)性與河北省食管癌、賁門⑼癌高發(fā)區(qū)磁縣和涉縣人群食管鱗狀細胞贈癌(ESCC)和賁門腺癌(GCA)遺吊傳易感性的關系。

1資料與方法磴研究對象327名食管鱗狀細胞癌(E邢sophagealsquamousc唣ellcarcinoma，ESCC)套患者、253名賁門腺癌(Gastriccardiacadenocarcinoma，GCA)患者均來自河北省食翕管癌、賁門癌高發(fā)區(qū)磁縣和涉縣，612什名健康對照為在相同地區(qū)相同時間體檢為悠正常人群，并經(jīng)本人知情同意，由專門的穌登記員調查所有研究對象的性別、年齡、償吸煙史及上消化道腫瘤家族史。

現(xiàn)吸煙或賊曾吸煙每天5支以上并持續(xù)兩年或兩年以膏上者定義為吸煙個體。

家族中有1名以上殊一級親屬和(或)2名以上二級親屬患有浪食管癌/賁門癌/胃癌者定義為上消化道緇腫瘤家族史陽性。

標本采集及外周血綾白細胞DNA的提取所有研究個體均采顛集靜脈血5ml，經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝，4℃瓢冰箱保存。

采血后一周內，以蛋白酶K消蘺化飽和氯化鈉鹽析法，提取外周血淋巴⑿細胞染色體DNA。

XPASNP基正因分型XPAA23G基因型檢測應用PCRRFLP方法進行。

XPA基因火A23G的PCR反應體系為20l，鏊其中模板DNA100ng，10PC朱R緩沖液2l，MgCl2，TaqDNA聚合酶，dNTPs200M，碼上游引物5TTAACTGCGCA醬GGCGCTCTCACTC3和下鷚游引物5AAAGCCCCGTCGˉGCCGCCGCCAT3各200嘈nM。

PCR反應條件為：

94℃預變性陰5min后，94℃變性30s、58℃妙退火20s、72℃延伸20s，35個漭循環(huán)后，72℃繼續(xù)延伸7min。

PC昝R產(chǎn)物經(jīng)限制性內切酶MspI于37℃酶切16h后，進行4%瓊脂糖凝膠電泳繳。

A/A基因型由于缺乏MspI的識別柚位點保持原有PCR后的158bp的片┚段，而G/G基因型存在MspI的識別賽位點產(chǎn)生130和28bp兩條DNA片③段，A/G基因型則表現(xiàn)為158bp、２130bp和28bp三條片段，見圖1茨。

1:G/Ggenotype;2、砌5:A/Agenotype;3、4、迮6、7:A/Ggenotype;8:100bpDNAmarker圖1佑XPAA23G基因型分型XPAG罔709A基因型檢測應用PCRRFL茵P方法進行。

XPA基因G709A的P鷚CR反應體系為20l，其中模板DN埡A100ng，10PCR緩沖液2鐲l，MgCl2，TaqDNA聚合酶，酴dNTPs200M，上游引物5酬TTCATATGTCAGTTCATG入3和下游引物5TTTTTCA噢GAATTGCGT3各200nM胸。

PCR反應條件為：

94℃預變性5m堡in后，94℃變性45s、50℃退火飭45s、72℃延伸45s，35個循環(huán)烏后，72℃繼續(xù)延伸7min。

PCR產(chǎn)縞物經(jīng)限制性內切酶Taqa1于65℃酶坩切16h后，進行4%瓊脂糖凝膠電泳。

祠G/G基因型存在Taqa1的識別位點蕊產(chǎn)生130bp和18bp兩條片段，而郴A/A基因型由于缺乏Taqa1的識別擢位點保持原有PCR后的148bp的片砭段，G/A基因型則表現(xiàn)為148bp、囅130bp和18bp三條片段。

為進鱭行基因型檢測的質量控制，每一批PCR竦反應均以滅菌蒸餾水替代模板DNA作為陰性對照，XPAA23G隨機挑取10瘃%進行重復實驗。

統(tǒng)計學方法經(jīng)卡屋方檢驗比較基因型頻率的觀察值與預期值蠱，進行HardyWEinberg平陛衡分析。

病例組和對照組的XPA基因型幢及等位基因型分布比較采用行列表的卡方檢驗進行。

應用非條件Logisti煲c回歸模型計算相對風險度的比值比及其搐95%可信區(qū)間，以P2結果一般特征ESCC患者組、GCA患者組與悼對照組之間的性別、年齡構成相似。

ES槽CC患者組、GCA患者組中吸煙個體比鎰例與對照組相比無顯著性差異(2=和騅,P=和)。

ESCC患者組、GCA患弘者組中UGIC家族史陽性個體比例分別蝙為%、%，顯著高于對照組%，表明有U媼GIC家族史陽性可能是增加ESCC和銨GCA的發(fā)病風險的原因，見表1。

表1閡食管癌、賁門癌和對照組人口學分布及銓XPAA23G等位基因型頻率XPAG犀709A的SNP分析未成功分型。

XP硤AA23GSNP分析成功進行了基因分∥型，重復分型結果均與原結果相符。

經(jīng)卡方檢驗，XPAA23GSNP基因型分更布符合HardyWEInberg平攤衡(P)。

XPA基因A23GS癖NP與ESCC、GCA的關系XP俐A基因A23GSNP與ESCC的關系蚜XPA基因A23G的等位基因頻率在鄰ESCC和健康對照之間,總體分布有顯退著性差異，見表1。

XPA基因A23G的A/A、A/G、G/G基因型頻率在慍健康對照組中分別為%、%和%,在ESCC患者組中分別為%、%和%,在ES垴CC和健康對照之間,其總體分布有顯著閆性差異。

與A/A基因型相比,攜帶G等遽位基因(A/G+G/G基因型)，見表閎2。

可顯著降低ESCC的發(fā)病風險。

分梧層分析顯示，在非吸煙組中，ESCC患者組與健康對照之間,基因型頻率分布無墉顯著性差異。

但與A/A基因型相比,含倒G等位基因的基因型可降低非吸煙組ES徭CC的發(fā)病風險。

在吸煙組中，ESCC南患者組與健康對照之間,基因型頻率分布⑺有顯著性差異，與A/A相比，含有G等縣位基因(A/G+G/G基因型)可明顯懷降低吸煙組ESCC的發(fā)病風險。

在無U罄GIC家族史的ESCC患者與健康對照讎之間基因型頻率總體分布有顯著性差異,瑰此保護作用也很明顯。

而有UGIC家族椎史的ESCC患者組和健康對照之間，基濠因型頻率分布無顯著性差異。

表2XP揣AA23G基因型頻率與ESCC、GCA發(fā)病風險的關系XPA基因A23嚀GSNP與GCA的關系XPA基因A硐23G的等位基因頻率在GCA和健康對巧照之間,總體分布無顯著性差異。

在GC帔A患者組中XPA基因A23G的A/A滸、A/G、G/G基因型頻率分別為%、酩%和%,在GCA和健康對照之間,其總灸體分布無顯著性差異。

然而，與A/A基劐因型相比,含有G等位基因的(A/G+驢G/G基因型)可降低ESCC的發(fā)病風瀑險。

分層分析顯示,在非吸煙組中,GC啤A患者組中XPA基因A23G的A/A補、A/G和G/G基因型頻率分別為%、%和%,健康對照組分別為%、%和%,樟基因型分布在兩組之間有顯著性差異。

與霰A/A相比，攜帶有G等位基因(A/G舴+G/G基因型)可明顯降低非吸煙組中⒒GCA的發(fā)病風險。

在無UGIC家族史┨和有UGIC家族史的GCA患者組和健盼康對照之間，基因型頻率總體分布無顯著琶性差異。

表3XPAA23GSNP與峨ESCC、GCA發(fā)病風險的相關性分析橇3討論DNA的損傷和基因結構異幾常、以及由此所造成的癌基因和抑癌基因表達或功能上的改變可能是細胞惡性轉化的前提。

由于細胞內DNA修復系統(tǒng)的存嚅在，所以并非所有的損傷都會導致突變。

如果DNA修復系統(tǒng)出現(xiàn)問題，細胞惡性侈轉化的機率也會增加[7]。

核苷酸切除銖修復途徑是各種DNA損傷，如紫外線損傷和各種化學致癌物的加合物形成的損傷坪的主要修復通路[5]。

XPA作為一種DNA損傷識別蛋白，在NER路徑中起瞪著至關重要的作用，它與受損的DNA結丁合，引發(fā)修復過程。

缺失XPA基因的N禳ER途徑受損最重。

研究報道，XPA麻基因位于9號染色體，它的cDNA長1致377bp,可能包含有6個外顯子，所撂編碼的蛋白XPA由273個氨基酸構成衡，相對分子量31000kDa。

XPA聿蛋白為一疏水性蛋白，存在于細胞核中。

讀XPA包括三個功能區(qū)，N端主要與復制卜蛋白A結合，C端主要與轉錄因子IIH(Transcriptionfato鈾rIIH,TFIIH)結合并將其帶到磁損傷位點;中心區(qū)198至219位氨基笠酸包含鋅指結構，是與損傷DNA結合的蔬功能區(qū)。

Li等證實XPA蛋白可以與E戴RCC1以一種特定方式結合，他們認為或XPA具有為切除修復復合體的ERCC祜1和其他因子到達DNA受損部位指示方向的功能。

XPA的多態(tài)性可能影響m塹RNA三級結構的穩(wěn)定性或者影響轉錄因藕子與mRNA結合。

在XPA基因的5詈端非編碼區(qū)，ATG起始密碼子上游4個揞核苷酸處，存在AG的多態(tài)[8,9]，XPA基因的5非編碼區(qū)可能是通過瘦轉錄和后轉錄機制調節(jié)基因表達[10]，研究顯示A到G的改變可以降低肺癌的慕發(fā)病風險。

Park等[5]在對韓國一ㄖ個小樣本研究后得出，G/G基因型或G驚等位基因與肺癌有負性關聯(lián)，特別在年輕、男性、吸煙人群中這種傾向更明顯。

在毳對高加索人、墨西哥人和美籍非洲人研究裁中，Wu等[6]得出含有G等位基因的┇基因型比A/A純合型更能降低肺癌的發(fā)莨病風險，目前暴露于煙草致癌物的人群中脧這種傾向更明顯。

攜帶XPA23G等位橐基因的個體，DNA修復能力高于攜帶A寇/A基因型者。

我們在對食管鱗狀細胞癌和賁門腺癌的研究中，也得出了類似的結妒論，攜帶有G等位基因(A/G+G/G恣基因型)可顯著降低ESCC和GCA的ч發(fā)病風險。

并且可顯著降低非吸煙人群患訕GCA的發(fā)病風險。

由于本研究是基于人莪群的病例對照研究，對照組和病例組的基艫因型分布均未偏離HardywEInberg平衡，試驗結果的重復性較好，皇因此可基本排除系統(tǒng)誤差導致的基因型分估布偏性。

但此類研究多為回顧性研究，林且研究人群存在地域，人種和樣本量的差杉異，因此有待于擴大樣本量并在同種族，同地域人群中進行長期隨訪研究，并進一篼步觀察XPA基因多態(tài)性與環(huán)境因素及其奴他遺傳因素的相互作用，對揭示XPA基翮因多態(tài)性與腫瘤的確切關系有重要意義。

昨【參考文獻】［1］尹嬌楊，李繼牿承.DNA修復基因；核苷酸切除修復基痣因單核苷酸多態(tài)與癌癥發(fā)生風險的研究進マ展\[J\].國外醫(yī)學遺傳學分冊，XX，27:2326.\[2\]G刻oodeEL,UlrichCM,Po巔tterinDNARepairGen隋eandAssociationwit溶hCancerRisk\[J\].C扔ancerEpidemiologyB盟iomarkersPrev,200男2,11:15131530.\[象3\]WakasugiMandSan頑cerofassemblyofhumanDNArepairexcisionnuclease\[J\].JBi畫ol,274,1875918768.\[4\]GarryW,Buch馳ko,Nancymutagenici燙tyandhumannucleotideexcisionrepairpr茅oteinXPA:CD,EXAFSand1H/15NNMRspectr癌oscopicstudiesonth扛ezinc(II)andcadmium(II)associatedmｘinimalDNAbindingd￣omain(M98F219).,2糕1(5):10511057.\[蚰5\]ParkJY,ParkSH,C脫hoiJE,etal.PolymorphismsoftheDNArepairgenexerodermapig迸mentosumgroupAandr殆iskofprimarylungca軾ncer\[J\].CancerEpнidemiologyBiomarke限rsPrev,2002,11,99咆3997.\[6\]WuX,ZhНaoH,WeiQ,etal.XPAp簾olymorphismsassoci蹩atedwithreducedlunビgcancerriskandamodulatingeffectonnucleotideexcisionrep鎮(zhèn)aircapacity\[J\].C綬arcinogenesis,XX,24(3):505509.\[7\]EllenLGoode,Co