食用菌種質(zhì)資源收集與保存技術(shù)規(guī)程

1食用菌種質(zhì)資源收集與保存技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了食用菌種質(zhì)資源收集與保存技術(shù)的術(shù)語和定義、保存庫（室）建立，種質(zhì)資源收集、鑒定、整理及保存。本文件適用于食用菌種質(zhì)資源收集與保存的機(jī)構(gòu)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T12728食用菌術(shù)語GB19489GB50068GB50223GB50346實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求建筑結(jié)構(gòu)可靠度設(shè)計(jì)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)建筑工程抗震設(shè)防分類標(biāo)準(zhǔn)生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范DB15/T1024食用菌菌種資源描述規(guī)范3術(shù)語和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1食用菌ediblefungi指子實(shí)體碩大、可供食用的蕈菌(大型真菌)，通稱為蘑菇。3.2食用菌種質(zhì)資源germplasmresourcesofediblefungi指可培養(yǎng)的有一定科學(xué)意義、具有實(shí)際或潛在實(shí)用價(jià)值的食用菌及其相關(guān)信息數(shù)據(jù)。3.3菌種保藏preservationofculture指將食用菌菌種用各種適宜的方法妥善保藏，避免死亡、污染，保持其原有性狀基本穩(wěn)定。4保存庫（室）建立24.1選址遠(yuǎn)離工礦區(qū)、公路鐵路干線和城鎮(zhèn)生活區(qū)等污染地區(qū)。要求地勢平坦、排灌便利、交通便捷，避免污染源。4.2規(guī)劃設(shè)計(jì)資源保存庫（室）設(shè)為引種觀察區(qū)和保存區(qū)，觀察區(qū)和保存區(qū)建設(shè)要求相同，觀察區(qū)用于收集資源的觀察，保存區(qū)用于資源的保存。4.3保存庫（室）建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)模保存庫（室）建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照GB19489、GB50068、GB50223和GB50346執(zhí)行，建設(shè)規(guī)模根據(jù)需保藏種質(zhì)資源的多少進(jìn)行科學(xué)合理設(shè)計(jì)。5資源收集5.1收集對象現(xiàn)有栽培種、地方品種、野生種、有利用價(jià)值的種質(zhì)資源。5.2信息記載記載資源的名稱、類型、收集時(shí)間、地理位置、所屬單位、遺傳背景、生長地水土氣候條件、特征特性（如顏色、形狀、大小、抗性等）、影像資料，并對資源進(jìn)行編號（如種類、來源、順序等信息）。5.3資源收集5.3.1菌種實(shí)物的收集收集的菌種實(shí)物為純培養(yǎng)物。菌種可通過自行分離、交換、購買、接受委托保藏、接受贈送等途徑收集。5.3.2菌種信息的收集5.3.2.1提供者提供菌株的研究和鑒定材料，據(jù)實(shí)填寫保藏機(jī)構(gòu)的登記表格，由保藏機(jī)構(gòu)簽收入檔。5.3.2.2保藏機(jī)構(gòu)進(jìn)一步收集和完善菌株的相關(guān)信息。5.3.2.3菌種信息建立電子數(shù)據(jù)庫，錄入菌落、子實(shí)體照片等原始直觀信息。6資源鑒定6.1菌絲特點(diǎn)根據(jù)菌絲顏色、生活力、有無鎖狀聯(lián)合等特點(diǎn)與相應(yīng)菌種進(jìn)行鑒定。6.2內(nèi)在特性鑒定6.2.1出菇試驗(yàn)在各級菌種的培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間及栽培條件基本一致的情況下進(jìn)行出菇試驗(yàn)。36.2.2抗熱性試驗(yàn)將菌種放在適宜條件下培養(yǎng)，待菌絲長到1/2試管斜面時(shí)，每一菌株取出2~3支試管，放在溫度上限環(huán)境下，經(jīng)過24h作抗熱性處理，然后放到適宜溫度下培養(yǎng)，觀察菌絲恢復(fù)情況，判別抗熱能力。6.2.3抗霉性測定采用平板測定的方法，觀察菌絲與霉菌的交界處是否有拮抗線，判別抗霉能力。6.2.4分子生物學(xué)鑒定印跡分析脈沖電場凝膠電泳（PFGE）以及小亞基rDNA（或rRNA）序列測定等方法進(jìn)行鑒定。對于遠(yuǎn)緣種，采用3-4個保守基因的克隆/測序后，進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。對于近緣種，采用AFLP或RAPD等其中一種后，進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析6.3直觀觀察仔細(xì)觀察菌絲生長是否正常，是否老化，有無雜菌、蟲害感染，同時(shí)檢查瓶袋有無破損等。7資源的整理7.1菌種純度檢測7.1.1純菌種的純度要高，不能有雜菌感染，也不能有其他類似的菌種。7.1.2正菌絲色澤要純正，多數(shù)種類的菌絲應(yīng)純白、有光澤，原種、栽培種菌絲應(yīng)連結(jié)成塊，無老化變色現(xiàn)7.1.3壯菌絲要粗壯，分枝多而密，接種到培養(yǎng)基吃料快，生長旺盛。7.1.4潤培養(yǎng)體要濕潤，與試管（瓶）壁緊貼而不干縮，含水適宜。7.1.5香具有每品種特有的清香味，不可有霉、腐氣味。7.2菌種復(fù)核具體方法嚴(yán)格按照《國家自然科技資源平臺微生物菌種資源復(fù)核技術(shù)規(guī)程（試行）》。7.3菌種編號將復(fù)核后的菌株進(jìn)行編號。47.4數(shù)據(jù)整理7.4.1嚴(yán)格按照DB/T1024對菌株進(jìn)行數(shù)據(jù)整理。7.4.2建立菌株的紙質(zhì)信息和數(shù)字化信息檔案并備份。7.4.3檔案需安全存放，注意防潮、防霉、防蟲、防火、防磁和防盜。8資源的保存8.1菌種保存8.1.1前期準(zhǔn)備檢查保存設(shè)施，應(yīng)確保正常運(yùn)行，設(shè)專人負(fù)責(zé)管理，定期檢修維護(hù)。設(shè)施應(yīng)有備用電源，防止斷電事故發(fā)生。8.1.2保存方法可采用液氮超低溫保藏法、低溫定期移植保藏法、液體石蠟保藏法、自然基質(zhì)保藏法、沙土管保藏法、濾紙片保藏法、生理鹽水保藏法、蒸餾水保藏法等，針對保存菌株確定適宜的方法，同一菌株選用兩種或兩種以上方法進(jìn)行保存，只能采用一種保藏方法的菌株必須備份并存放于兩個以上的保存設(shè)備中，重要菌種應(yīng)異地保存?zhèn)浞荨?.1.3記錄入檔菌種的入庫和出庫應(yīng)記錄入檔，實(shí)行雙人負(fù)責(zé)制