DB34T∕ 3099-2018 動物飼料中氟腺嘌呤殘留量的測定 HPLC-MSMS法　　

動物飼料中氟腺嘌呤殘留量的測定安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省檢驗檢疫科學(xué)技術(shù)研究院提出。本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省動植物檢驗檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：安徽省檢驗檢疫科學(xué)技術(shù)研究院、宣城出入境檢驗檢疫局、安徽省食品藥品檢驗研究院、六安出入境檢驗檢驗局、宣城市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管局、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：蘇婷婷、郝向東、王務(wù)平、紀(jì)文、程浩、黃金華、丁磊、王偉、晏苒、曾明華。僅供學(xué)習(xí)交流使用，請勿傳播或其他用途1動物飼料中氟腺嘌呤殘留量的測定HPLC-MS/MS法件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。4試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的一級水。4.4氨水：含量為25%～28%。4.5二氯甲烷。4.60.1%甲酸-甲醇溶液：移取10mL_甲酸(4.3),用甲醇(4.1)稀釋并定容至1000mL,混勻。4.70.1%甲酸-水溶液；L移取h/0m甲酸(4.3),用水稀釋并定容至1000m,混勻。820%甲醇溶液：20mL甲醇(4使80mL水混940%甲醇溶液：40m甲醇(4.1)與60mL永混勻。4.100.5%氨水-甲醇溶液：移取0.5mL氨水(4.4),用甲醇(4.1)稀釋并定容至100mL,混勻。4.11氮?dú)猓杭兌取?9.999%。4.12標(biāo)準(zhǔn)品：氟腺嘌呤，純度≥99.2%。4.13標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100μg/mL):稱取10mg(精確至0.1mg)標(biāo)準(zhǔn)品(4.12),用適量甲醇超聲溶解，待完全溶解后用甲醇定容至100mL,混勻。-20℃以下避光保存，有效期為6個月。效期為3個月。25儀器和設(shè)備5.1液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源(ESI)。5.2分析天平：感量為0.01mg和0.1g。5.3渦旋混合器。5.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥10000r/min。5.5固相萃取裝置。5.6粉碎機(jī)。5.7氮吹濃縮儀。5.8旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。6試樣制備與保存6.1制樣操作過程中應(yīng)防止動物飼料樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量變化。6.2將動物飼料放入粉碎機(jī)(5.6)中粉碎，裝袋置于干燥狀態(tài)下保存，并標(biāo)明標(biāo)記。7測定步驟稱取2g(精確至0.01g)粉碎后飼料樣品于50mL離心管中，加入10mL二氯甲烷(4.5),渦旋混勻后超聲提取5min,再以10000r/min離心5min,取全部上清液至50mL雞心瓶中，在樣品殘渣中再加入10mL二氯甲烷(4.5)重復(fù)提取一次，合并2次提取液于60℃下水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用5mL40%甲醇溶液(4.9)溶解殘渣，加入10mL正己烷(4.2),2000r/min渦旋混勻1min,靜置5min,棄去上層正己烷層，留下層清液備用，待凈化。SPE柱Sep-pakC18分別用5mL甲醇活化，5mL水平衡，取全部備用液過柱，控制流速為1mL/min,再用5mL水和5mL20%甲醇溶液(4.8)以1mL/min速度淋洗柱子，負(fù)壓抽干，用5mL5%氨水甲醇溶液(4.10)洗脫，收集全部洗脫液。洗脫液于40℃下氮?dú)獯蹈?。殘渣?mL甲醇(4.1)溶解，又供學(xué)習(xí)交流使用，請勿傳播或其他用途7.3.1液相色譜參考條件液相色譜條件如下：——流動相A為0.1%甲酸-甲醇溶液；流動相B為0.1%甲酸水溶液；——等度洗脫程序：●流動相A:·流動相B為80:20(v/v);d)柱溫：40℃;37.3.2質(zhì)譜參考條件a)離子化模式：電噴霧電離(ESI),正離子模式；d)其他質(zhì)譜條件參見附錄A;e)使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求；詳細(xì)條件參見附錄A;f)毛細(xì)管電壓、霧化氣壓力、氣簾氣壓力、輔助氣流速、碎裂電壓(FP)、碰撞氣能量(CE)等取空白樣品按照7.1-7.2處理，配制適用濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.13),按濃度由低到高進(jìn)樣檢測，以定量子離子峰面積-濃度作圖，得到基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線。在上述色譜條保留時間為2.2min。其色譜行為見附錄B?！?.5%之內(nèi)；在試樣譜圖中所選擇的待測物離子對均出現(xiàn)，且相對豐度與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中定性離子的相對豐度允許偏差不超過表1規(guī)定的范圍時，則可確表1定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差允許的相對偏差8空白試驗9結(jié)果計算僅供學(xué)習(xí)交流使用，請勿傳播或其他用途見公式(1)。X——試樣中氟腺嘌呤的殘留量，單位為微克每千克(μg/kg);M——試樣的體積或質(zhì)量，單位為克(g);Cs——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的待測組分溶液濃度，單位為45(資料性附錄)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀器參數(shù)參考條件液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀器參數(shù)參考條件如下：a)電噴霧電壓：5500V;b)離子化溫度：500℃;c)氣簾氣流速：50.0L/min;d)霧化氣流速：50.0L/min;e)輔助氣流速：50.0L/min;f)聚焦電壓：400V;g)碰撞室射出電壓：13V;h)碰撞氣：氮?dú)?；i)其他質(zhì)譜分析參數(shù)見表A.1。表A.1主要參考質(zhì)譜參數(shù)保留時間“定量離子。注：對于不同質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最