靜注加替沙星在家兔體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究

靜注加替沙星在家兔體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究一、背景加替沙星為8-甲氧氟喹諾酮類外消旋化合物，體外具有應(yīng)譜的抗革蘭氏陰性和陽(yáng)性微生物的活性，其R-和S-對(duì)映體抗菌活性相同。本品抗菌作用是通過(guò)抑制細(xì)菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶IV，從而抑制細(xì)菌DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和修復(fù)過(guò)程。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)告，加替沙星口服吸收良好，且不受飲食因素影響，其絕對(duì)生物利用度為96%，藥物濃度在服用1-2小時(shí)后達(dá)峰。二、目的1、了解藥代動(dòng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本方法，熟悉案例2、掌握藥代動(dòng)實(shí)驗(yàn)常用建模方法及儀器使用3、掌握藥代動(dòng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理方法三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑1、動(dòng)物：家兔（約2.0kg，雌雄不限）2、試劑：加替沙星注射液（30mg/ml），加替沙星標(biāo)準(zhǔn)品，20%烏拉坦，空白血漿，10%HClO4溶液，甲醇，乙酸銨，乙腈均為分析純?cè)噭Ｋ?、?shí)驗(yàn)儀器1、樣品制備：手術(shù)臺(tái)，手術(shù)工具（止血鉗，手術(shù)刀等），嬰兒稱，注射器(多種規(guī)格)，離心機(jī)，BP管，移液槍等。2、色譜：Agilent高效液相色譜儀。五、實(shí)驗(yàn)步驟1、樣品的制備（1）采集家兔稱重并麻醉（耳緣靜脈注射烏拉坦5mL/kg），手術(shù)，股動(dòng)脈插管。于家兔另一耳緣靜脈注射加替沙星注射液（按30mg/kg體重給藥），給藥后血液采集（時(shí)間點(diǎn)：2,5,10,15,30,45,60,90,120min），每次血量約0.5mL并置于裝有肝素的BP管內(nèi)待離心。（2）制備全血高速離心得血漿（12000rpm,10min），吸取上層血漿100ul置于另一潔凈BP管內(nèi)。2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定（1）、標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品的制備精密稱取50mg加替沙星置于50mL量瓶中，加甲醇使溶解至刻度，作為加替沙星工作液，吸取上述加替沙星工作液5mL于50mL量瓶加甲醇至刻度，配制成溶液（100ug/ml)，吸取上述溶液，二倍稀釋，制備標(biāo)準(zhǔn)溶液：濃度為：50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78、0.39ug/mL，以10uL標(biāo)準(zhǔn)溶液加入90uL空白血漿制備標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品。（2）樣品處理標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品中加入高氯酸100ulL，3min渦旋，12000rpm高速離心10min。（3）色譜條件色譜柱：ODS-SP5μm4.6×150mmInersilC18色譜柱；流動(dòng)相：醋酸銨：乙腈=80:20，預(yù)先混合并超聲脫氣；流速:1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng):294nm；柱溫:40℃。（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制取上清液，使用100uL微量注射器進(jìn)樣60uL，測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。3、樣品中加替沙星含量的測(cè)定按色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。4、藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)擬合，按藥物代謝動(dòng)力學(xué)程序軟件Kinetica4.4，得出結(jié)果。1、標(biāo)準(zhǔn)曲線2、血漿藥物濃度（C）時(shí)間（t）曲線3、藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算劑量(mg/kg)初始濃度(C0)多室模型藥物的表觀一級(jí)消除速率常數(shù)(b)消除半衰期(t1/2b)藥物自中央室消除的一級(jí)消除速率常數(shù)(Kel)3031.042μg/ml0.477662h-11.45112h1.6974h-1血藥濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)一階矩曲線下面(AUMC)平均駐留時(shí)間(MRT)清除率(CL)表觀分布容積(Vd)18.288μg/mL·h34.5006μg/mL1.88652h1.64042mL/kg·h3.43427mL分布半衰期(t1/2a)0.0562h七、實(shí)驗(yàn)討論1、本試驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定血漿中加替沙星的濃度，以294nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，采用沉淀法提取后直接進(jìn)樣，具有靈敏度高、準(zhǔn)確性和精密度好、操作簡(jiǎn)便、血漿用量少、色譜峰分離優(yōu)良、無(wú)雜質(zhì)干擾、分離完全等特點(diǎn)。2、在樣品的預(yù)處理上利用加替沙星在酸性的條件下更易溶于水的特點(diǎn)，直接加入10%HClO4一次性取出內(nèi)源性蛋白等雜質(zhì)，沉淀效果好，上清液澄清，色譜峰干擾物質(zhì)少，檢測(cè)的靈敏度完全能滿足體內(nèi)藥物濃度檢測(cè)、人體藥代動(dòng)力學(xué)及生物等效性研究。3、結(jié)果表明藥物的分布半衰期t1/2a=0.0562h,初始藥物濃度C0=31.042μg/ml，血藥濃度-時(shí)間曲線下面積AUC=18.288μg/mL·h，即靜脈注射加替沙星后，在3~4min就可分布在各組織中，且分布量高，有很多的抗菌濃度;藥物的消除半衰期t1/2b=1.45112h，表明在靜注加替沙星后6t1/2b各組織中仍有較高的抗菌濃度;藥物自體內(nèi)的總清除率CL=1.64042mL/kg·h，表明每日用加替沙星（0.2g/mL）兩次，可保持較好的殺菌效果。4、多室模型藥物的表觀一級(jí)消除速率常數(shù)(b)、藥物自中央室消除的一級(jí)消除速率常數(shù)(Kel)、消除半衰期(t1/2b)、平均駐留時(shí)間(MRT)等數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值較接近，而初始濃度(C0)、清除率(CL)、表觀分布容積(Vd)、血藥濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)、一階矩曲線下面(AUMC)與文獻(xiàn)值相差較大，可能原因是加替沙星的濃度偏低，或者是靜注加替沙星的體積偏小，導(dǎo)致C0偏小，而Vd=X0/C0，X0不變，所以Vd偏大；CL=k·Vd，CL亦偏大；因C0偏小，所以血藥濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)、一階矩曲線下面(AUMC)亦偏小，而平均駐留時(shí)間(MRT)與初始濃度(C0)無(wú)關(guān)，因此與文獻(xiàn)值相符。分布半衰期(t1/2a)偏大，可能是由于家兔被麻醉后的血流速度降低有關(guān)，亦可能是實(shí)驗(yàn)時(shí)的溫度低于文獻(xiàn)中的實(shí)驗(yàn)溫度，導(dǎo)致藥