高中生物選修1-生物技術(shù)實(shí)踐知識點(diǎn)填空

選修1生物技術(shù)實(shí)踐

生殖，在有氧條件下，酵母菌實(shí)行有氧呼吸，大量繁殖。呼吸的反應(yīng)式為:

在無氧條件下，酵母菌能實(shí)行酒精發(fā)酵。呼吸的反應(yīng)式為：

_______________________________________________O

2.條件：繁殖最適溫度,酒精發(fā)酵一般控制在0

丑砧十怕但然發(fā)酵：附著于葡萄皮上的野件型酵母菌。

菌種來源：!

3.［人工培養(yǎng)：分離獲得得純凈的酵母菌菌種。

挑選葡萄T?沖洗-TT

果酒果醋

5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價：可通過嗅覺和品嘗初步鑒定，并用檢驗(yàn)酒精存有?？?/p>

觀察到的現(xiàn)象為_____________________________________

6.葡萄酒呈紅色：______________________

(二)果醋的制作：

1.原理：菌種：,屬于核生物，新陳代謝類型為

______________生殖，

當(dāng)、都充足時，醋酸菌將分解成醋酸；當(dāng)缺少

—時，醋酸菌將變?yōu)?，再將變?yōu)榇姿帷?/p>

反應(yīng)式：0

2.條件：最適合溫度為,需要充足的o

3.菌種來源：能夠從食醋中分離醋酸菌，也能夠購買。

4.設(shè)計實(shí)驗(yàn)流程及操作步驟：

果酒制成以后，在發(fā)酵液中加入或醋曲，然后將裝置轉(zhuǎn)移至

°C條件下發(fā)酵，適時向發(fā)酵液中o如果沒有充氣裝置，能夠?qū)?/p>

瓶蓋打開，在瓶蓋上紗布，以減少空氣中塵土污染。

8.利用微生物發(fā)酵制作果酒，該過程利用的微生物是,其代謝類型是，

與生產(chǎn)實(shí)際相關(guān)的反應(yīng)式是,在不滅菌的情況下，如何使

酵母菌成為優(yōu)勢菌種？_

9.酵母菌是自然界中常見的一類真菌.

(1)從細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)看，酵母菌屬于.

(2)酵母菌常實(shí)行______________生殖，在基因工程中，也常用酵母菌作為轉(zhuǎn)入基因的受體細(xì)胞，

是因?yàn)榻湍妇敝晨?，遺傳物質(zhì)相對少。

(3)在自然環(huán)境中，酵母菌屬于生態(tài)系統(tǒng)中的成分.

(4)酵母菌體內(nèi)遺傳物質(zhì)主要在_____________上，而醋酸菌的遺傳物質(zhì)主要在______________

上.

(5)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)所使用的酵母菌的來源是：_

10.選擇新鮮葡萄先沖洗后去枝梗防止雜菌感染，注意不要反復(fù)沖洗，否則酵母菌數(shù)量減少，影響發(fā)酵。

發(fā)酵液裝瓶后保留1/3的空間。裝置各部件作用①出料口：；②：醋酸發(fā)酵

時連接充氣泵；③：排出酒精發(fā)酵時產(chǎn)生的C02。④排氣口連接一個長而彎曲的膠管作用

o使用該裝置制酒時，應(yīng)該充氣口；制醋時，應(yīng)該充氣口連接o

11.控制發(fā)酵條件的作用①醋酸菌對的含量特別敏感，當(dāng)實(shí)行深層發(fā)酵時，即使僅僅短時間中斷

通入氧氣，也會引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長溫度為℃,控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時間

縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會。③有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧化。

（1）你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？

（2）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？

（3）制葡萄酒時，為什么要將溫度控制在18?25℃?制葡萄醋時，為什么要將溫度控制在30?35℃?

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

1、培養(yǎng)基：人們按照微生物對的不同需求，配制出供其生長繁殖的營,是實(shí)行微生物培

養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2、培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝

固劑后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，能夠形成肉眼可見的。

液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定，半固體培養(yǎng)基則常用于

觀察微生物的運(yùn)動及菌種保藏等。

3、按照成分培養(yǎng)基可分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。

4、按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為和。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物

質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在

培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。

5、培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括、、、等。

碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO?、NaHCQ,等無機(jī)碳源；糖類、石油、花生粉餅等有

機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用o單質(zhì)碳不能作為碳源。

氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N?、NL、N03\NHj（無機(jī)氮源）蛋白質(zhì)、氨基酸、尿

素、牛肉膏、蛋白膝（有機(jī)氮源）等。只有微生物才能利用沖。

培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)

基中添加，培養(yǎng)時須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)是需要將pH調(diào)至中性或微

堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供的條件

6、無菌技術(shù)：獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：

①對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和。

②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行o

③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在_______附近進(jìn)行。

④實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。

7、消毒與滅菌的區(qū)別

消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽

抱和抱子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑（如酒

精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。

滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽泡和抱子。滅菌方法有灼燒滅菌、

干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。

滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用法；②玻璃器皿、金屬用具等使用法，

所用器械是;③培養(yǎng)基、無菌水等使用法，所用器械是0④表

面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。

8、培養(yǎng)基分裝前要,培養(yǎng)基_______后，需要冷卻到50℃左右時（用手觸摸剛剛不燙手時），才能

用來倒平板。

9、平板冷凝后，要將平板______置，目的是

10、微生物接種的方法最常用的是法和法。用平板劃線法和稀釋涂布平板

法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以

便于純化菌種。

11、灼燒接種環(huán)的目的是：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了;每次劃線前

灼燒接種環(huán)是為了,使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于

o劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，

12、在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，=

13、菌種的保存對于頻繁使用的菌種，可以采用的方法。將菌種接種到試管的培養(yǎng)

基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3?6個月，都要

重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。缺點(diǎn)：這種方法保存的時間不長，菌種容易被

—或產(chǎn)生__________o對于需要長期保存的菌種，可以采用的方法。放在一20℃

的冷凍箱中保存。

14、確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法

將的培養(yǎng)基在__________中保溫1?2天，無,說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否

則需要重新制備。

☆課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)

一、理論基礎(chǔ)

1、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理

人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH),同時抑制或阻止其他微生物生長。

2、選擇培養(yǎng)基

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作

選擇培養(yǎng)基。

4、統(tǒng)計菌落數(shù)目

(1)測定微生物數(shù)量的常用方法有法和_________直接計數(shù)。

(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理

一般設(shè)置3?5個平板，選擇菌落數(shù)在_________的平板進(jìn)行計數(shù)，并取o統(tǒng)計的菌落數(shù)往

往比活菌的實(shí)際數(shù)目,因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。

5、從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)

統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值

每克樣品中的菌落數(shù)=(C/V)*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平

板時所用的稀釋液的體積(ml),M代表稀釋倍數(shù)

6.篩選菌株

(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時

或其他微生物生長。

(2)選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許一種類的微生物生長，同時—和—其他種類微生物生

長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

(3)配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)

根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物

可以選擇培養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng);的微生物.力口

入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。

當(dāng)樣品的足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個—

;。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選

擇菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計數(shù)。止匕外，測定微生物數(shù)量的常用方法還有直接計數(shù)。

二、研究思路

(一)篩選菌株

1.實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選主要是指人為提供有利于目的菌株生長的,同時抑

制或阻止其他微生物的生長。

2.分解尿素的細(xì)菌主要有，,-

3.選擇培養(yǎng)基是指_________________________________________________「

加入可以分離出，o加入可以分

禺出O

（二）統(tǒng)計菌落數(shù)目

4.統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法主要有,，。

5.統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是當(dāng)樣品度足夠高時，

6.為保證統(tǒng)計結(jié)果準(zhǔn)確，通常將涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇的

平板進(jìn)行計數(shù)。

7.在設(shè)計實(shí)驗(yàn)時，一定要涂布至少個平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力和準(zhǔn)確

性。

（三）設(shè)置對照

8.設(shè)置對照的主要目的是,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的0

9.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)的研究思路是，。

三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計

關(guān)于土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計數(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：

1.取樣：從肥沃、濕潤的土壤中取樣。應(yīng)先3cm左右，再取樣，將樣品

裝入事先準(zhǔn)備好的—中。

2.制備：準(zhǔn)備牛肉膏蛋白膝培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基

將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白豚培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯選擇培養(yǎng)基上的

數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基可以作為,用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。

3.微生物的與觀察

將10g土樣加入盛有90mL無菌生理鹽水的錐形瓶中（體積為250mL）,充分搖勻，吸取上清液,

轉(zhuǎn)移至盛有—的生理鹽水的無菌大試管中，將土樣以1、10、……依次等比稀釋至稀釋度，并

按照由1（/?稀釋度的順序分別吸取進(jìn)行平板涂布操作。每個稀釋度下需要3個選擇培養(yǎng)基、1個

牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基。將涂布好的培養(yǎng)皿放在30℃溫度下培養(yǎng)，及時觀察和記錄。挑選選擇培養(yǎng)基中不

同形態(tài)的菌落接入含培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生如教材中圖2-10的顏色反應(yīng)。

4.細(xì)菌的計數(shù)

當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個平板進(jìn)行

重復(fù)計數(shù)，然后求出,并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。

四：思考與討論

（1）如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？

（2）為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿

素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？

果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用

（一）基礎(chǔ)知識

1、酶的概念：酶是所產(chǎn)生的具有作用的一類特殊的;

2、酶的本質(zhì)：（大多數(shù)）或；基本組成單位：或

3、酶的功能：在各種化學(xué)反應(yīng)中起作用。原因：酶能降低化學(xué)反應(yīng)的,從而使反應(yīng)

能夠迅速的進(jìn)行。

4、酶的特性（1）：酶的催化效率是無要催化劑的107?1013倍。（2）：一種酶只

能催化一種化合物或一類化合物的化學(xué)反應(yīng)。（3）需要適宜的條件：適宜的、適宜的。

（二）果膠酶的作用

（1）細(xì)胞壁的組成成分？___________________________

（2）果膠的單體是什么？___________________________

（3）果膠酶的作用？___________________________

1、果膠是植物以及的主要組成成分之一，它是由聚合而成的一種高

分子化合物，不溶于水。

2、果膠對果汁制作的影響：影響果汁的，還會使果汁o

3、果膠酶它是分解的一類酶的總稱，包括、、等。

4、果膠酶在果汁制作中的作用①分解,瓦解植物的及；使

水解為o②提高水果的,并使果汁變得=

（三）酶的活性與影響酶活性的因素

1、酶的活性：指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。

2、酶催化能力高低的衡量標(biāo)準(zhǔn)在一定的條件下，酶所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速度。酶反應(yīng)速度

用單位時間內(nèi)、單位體積中或來表示。

3、影響酶活性的因素：①溫度：畫出溫度對酶活性的影響曲線并標(biāo)出最適溫度：

B、果膠酶的最適溫度果膠酶的最適溫度為。

C、討論：高溫使酶的活性喪失后，酶的活性可否恢復(fù)？為什么？不能恢復(fù)，因高溫破壞了酶的分子結(jié)

構(gòu)，高溫對酶造成不可逆的破壞。但低溫使酶的活性喪失后，緩慢恢復(fù)其溫度活性仍可恢復(fù)。

②pH：A、畫出PH對酶活性的影響曲線并標(biāo)出最適PH：

B、果膠酶的最適pH果膠酶的最適pH范圍為。③酶的抑制劑：Fe3+、Ca2+、Zn2+等

金屬離子對果膠酶有抑制作用。

（一）探究溫度對果膠酶活性的影響

1、實(shí)驗(yàn)原理果膠酶的活性受溫度影響。處于時，活性最高。果肉的、果汁的與

果膠酶的活性大小成正比。

2、實(shí)驗(yàn)操作流程

討論：為什么在混合蘋果泥和果膠酶之前，要將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理？將果泥

和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理，可以保證，避免了果泥

和果膠酶混合時影響混合物的溫度，從而影響果膠酶活性的問題。

（二）探究pH對果膠酶活性的影響

1、實(shí)驗(yàn)原理果膠酶的活性受pH影響，處于,酶的活性最高，高于或低于此值活性均下降果肉

的、果汁的與果膠酶的活性大小成正比。

2、實(shí)驗(yàn)操作流程

想一想，為什么能夠通過測定濾出的蘋果汁的體積大小來判斷果膠酶活性的高低？果膠酶將果膠分解為

小分子物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以通過濾紙，因此蘋果汁的體積大小反應(yīng)了果膠酶的催化分解果膠的能力。

在不同的溫度和pH下，果膠酶的活性越大，蘋果汁的體積就o

在探究溫度或pH的影響時，是否需要設(shè)置對照？如果需要，又應(yīng)該如何設(shè)置？為什么？需要設(shè)置對照

實(shí)驗(yàn)，不同的溫度梯度之間或不同的pH梯度之間就可以作為對照，這種對照稱為相互對照。

（三）探究果膠酶的用量1、實(shí)驗(yàn)原理在一定的條件下，隨著酶濃度的增加，果汁的體積增加；當(dāng)酶

濃度達(dá)到某一數(shù)值后，再增加酶的用量，果汁的體積不再改變，此值即是酶的最適用量。

2.畫出果膠酶的用量對酶活性的影響曲線并標(biāo)出酶的最適用量：

《血紅蛋白的提取和分離》

基礎(chǔ)知識

1.凝膠色譜法

凝膠色譜法也稱做,是根據(jù)分離蛋白質(zhì)的有效方法。凝膠實(shí)際上

是一些由構(gòu)成的多孔球體，在小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)

分子通過凝膠時速度不同，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程,移動

速度；而相對分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在移動，路

程,移動速度。相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離。

2.緩沖溶液

緩沖溶液的作用是o緩沖溶液通常由—

溶解于水中配制而成的。生物體內(nèi)進(jìn)行的各種生物化學(xué)反應(yīng)都是在一定的pH下進(jìn)行的，例如：血漿的pH

是,要在實(shí)驗(yàn)條件下準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的過程，必須保持體外的pH與體內(nèi)的基本一致。

3.電泳

電泳是指o許多重要的生物大分子，如多肽、核酸

等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)會帶上o在電場的作用下，這些帶電分子

會向著與其所帶電荷的電極移動。電泳利用了待分離樣品中各分子以及分子本

身的、的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的,從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。

兩種常用的電泳方法是和，在測定蛋白質(zhì)分子量時通常使

用o蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于

以及等因素。

4.蛋白質(zhì)的提取和分離

蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：、、和O

5.樣品處理

血液由和組成，其中紅細(xì)胞最多。紅細(xì)胞具有

的特點(diǎn)。紅細(xì)胞中有一種非常重要的蛋白質(zhì),其作用是,血紅蛋白有—

個肽鏈組成，包括，其中每條肽鏈環(huán)繞一個,磁基團(tuán)可攜帶。血

紅蛋白因含有呈現(xiàn)紅色。

紅細(xì)胞的洗滌洗滌紅細(xì)胞的目的是,采集的血樣要及

時采用分離紅細(xì)胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的,將下層暗紅色的倒

入燒杯，再加入，緩慢攪拌,低速短時間離心，如此重復(fù)洗滌三次，直

至，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。

血紅蛋白的釋放在和作用下，紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。加入蒸儲水的目的

是o加入甲苯的目的是o

分離血紅蛋白溶液將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明

的,第2層為白色薄層固體，是,第3層是紅色透明液體，這是,

第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置

片刻后，分出下層的紅色透明液體。

透析即為：1mL的血紅蛋白溶液裝入中，將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的量的濃度為

20mmol/L的中，透析12h。透析可以去除樣品中的雜質(zhì)，或用于更換樣品

的。透析的原理是-透析的目的

是。

6.凝膠色譜操作

第一步要制作,第二步要,因?yàn)樗匝b柱前需要根據(jù)

色譜柱的內(nèi)體積計算所需要的凝膠量。在裝填凝膠柱時，不得有存在。因?yàn)闅馀?/p>

會，降低分離效果。第三步是o

7純化即為__________

調(diào)節(jié)緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝

3膠面平齊，關(guān)閉出口。

加入蛋白質(zhì)樣品：用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞移動加到色譜柱的頂端。加樣后，

I打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全滲入凝膠層后，

J關(guān)閉出口。

調(diào)節(jié)緩沖液面：加入20mmol/L的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度

洗脫：連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進(jìn)行洗脫。洗脫瓶的作用：洗脫

I洗脫瓶的緩沖液流速要保持

收集分裝蛋白質(zhì)：待接近色譜柱底端時，用試管收集。

8純度鑒定-----------------------

三、注意事項(xiàng)

1.電泳技術(shù)

電泳技術(shù)就是在的作用下，利用待分離樣品中各種分子以及分子、

等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的,從而達(dá)到對樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的目的。

2.紅細(xì)胞的洗滌

如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去的原因。此外，離心速度過高和時間過

長，會使和一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。

3.如何檢測凝膠色譜柱的裝填是否成功

由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否

裝填得均勻。

止匕外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)，觀察色帶移動的情況。如果，說明凝膠色譜柱制

作成功，凝膠色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。

4.為什么凝膠的裝填要緊密、均勻？

如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分

子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動次序，影響分離的效果。

5.沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的不但節(jié)約,還能除去凝膠中可能帶有的

和排除凝膠內(nèi)的o

6.6-75代”代表,75表示,即每克凝膠膨脹時吸水go

7.裝填完后，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填

8.加入檸檬酸鈉有何目的？

為什么要低速、短時離心？___________________________________

紅細(xì)胞的洗滌時什么要緩慢攪拌？o

9.與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞的特點(diǎn)及這一特點(diǎn)對進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離的意義

哺乳動物及人的成熟的紅細(xì)胞是雙面凹圓餅狀，沒有和o其含有

的血紅蛋白是_______________色的，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應(yīng)該收集

脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實(shí)驗(yàn)操作。

10.如何檢測血紅蛋白的分離是否成功

如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平

整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與有關(guān)。

11、能從凝膠色譜的分離原理分析為什么凝膠的裝填要緊密、均勻嗎？

答凝膠色譜法也稱為分配色譜法，它是根據(jù)分離蛋白質(zhì)的方法之一。所用的凝膠實(shí)際上

是一些微小的,這些小球體大多數(shù)是由構(gòu)成，小球體內(nèi)部有許多貫穿的

通道，當(dāng)一個含有各種分子的樣品溶液緩慢流經(jīng)時，各分子在色譜柱內(nèi)進(jìn)行兩種不同的運(yùn)動，即垂直向下

的運(yùn)動和無規(guī)則的擴(kuò)散運(yùn)動，的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之

間，通過的路程,移動速度；的蛋白質(zhì)分子比較容易

進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過的路程，移動速度o因此，樣品中相對分子質(zhì)

量較大的蛋白質(zhì)流出，相對分子質(zhì)量中等的分子后流出，相對分子質(zhì)量最小的分子最后

流出，，從而使各種相對分子質(zhì)量不同的分子得以分離。如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱

內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動次序，影響分

離的效果。

菊花組織培養(yǎng)

要點(diǎn)1植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)

當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時，在一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他

外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株（即細(xì)胞全能性）。

要點(diǎn)2植物組織培養(yǎng)的基本過程

（1）基本過程

人為使用植物激素控制

（2）基本概念

細(xì)胞分化：植物的個體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這

些差異的過程叫做細(xì)胞分化。

愈傷組織：離體的植物組織或細(xì)胞，培養(yǎng)一段時間后，會通過細(xì)胞有絲分裂，形成愈傷組織。愈傷組

織o

（去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化，

或者叫做去分化。

：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再

分化。

（3）植物體細(xì)胞發(fā)育成完整植株（表現(xiàn)出全能性）的條件。

脫離原來所在植物體（離體）、營養(yǎng)供給、激素控制、無菌條件、適宜的溫度、PH和光照等。

要點(diǎn)3影響植物組織培養(yǎng)的因素

（1）材料因素的影響

不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大，容易進(jìn)行無性繁殖的植物也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。同一種

植物材料，材料的年齡、保存時間的長短也有影響。幼齡、保存時間短的植物材料容易培養(yǎng)成功。菊花的

組織培養(yǎng)，0

（2）營養(yǎng)因素的影響

需要配置適宜的培養(yǎng)基，常用的一種培養(yǎng)基是其主要成分包

括：,如N、P、K、Ca、Mg、S；,如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、

Co；,如甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素，以及蔗糖等。

在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。

注意：

人及動物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。

植物的營養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。

微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質(zhì)五類。

滅菌：采取的滅菌方法是滅菌。MS培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？MS培養(yǎng)基有哪些

特點(diǎn)？大量元素和微量元素提供植物細(xì)胞所必需的;提供碳源，維持細(xì)胞滲透壓；甘氨

酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的需求。

微生物培養(yǎng)基以營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量_____營養(yǎng)。

（3）激素的影響

在配置好的MS培養(yǎng)基中，常常需要添加。植物激素中和

啟動、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。植物激素的濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，都

會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

①按照不同的順序使用這兩類激素，會得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果

先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素

細(xì)胞既分裂又分化

同時使用___________________________________________________

②當(dāng)同時使用這兩類激素時，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向。

生長素用量比細(xì)胞分裂素用量植物細(xì)胞的發(fā)育方向

比值高時有利于——分化、抑制——的形成

有利于的分化、抑制的形

比值低時

成

比值適中時促進(jìn)—_的生長

（4）pH、溫度、光照等條件的影響

不同的植物對各種條件的要求往往不同。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)，一般將pH控制在左右，溫度

控制在，并且每日用日光燈照射12h。

要點(diǎn)4植物組織培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的繁殖，保持遺傳的一致；可以實(shí)現(xiàn)花卉的連續(xù)生

產(chǎn),不受開花季節(jié)的限制。屬于繁殖（方式）

5、植物細(xì)胞：具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個體的能力，即

每個生物細(xì)胞都具有全能性。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來，這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r間和空間

條件下，通過基因的選擇性表達(dá)，構(gòu)成不同組織和器官。

8、對外植體進(jìn)行表面時，就要考慮藥劑的效果，又要考慮植物的能力。

9、接種過程中插入外植體時形態(tài)學(xué)上端朝上，每個錐形瓶接種7?8個外植體，要求操作。

10、移栽：栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將

幼苗移植到消過毒的或等環(huán)境中生活一段時間，進(jìn)行。最后進(jìn)行露天栽培。

胡蘿卜素的提取

1、胡蘿卜素性質(zhì)：結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于微溶于，易溶于等有機(jī)溶劑。

B—胡蘿卜素在人體內(nèi)可以被氧化成,因而胡蘿卜素具有預(yù)防夜盲癥等疾病。另外還可以用作食品、

飲料、飼料的添加劑。

2、提取B—胡蘿卜素實(shí)驗(yàn)方法：提取B—胡蘿卜素的方法主要有三種：①從中提取②從大

面積養(yǎng)殖的中獲得③利用微生物的生產(chǎn)

步驟①粉碎