05版藥典微生物限度檢查法操作要點(diǎn)

0505大腸埃希菌[CMCC（B）44102]菌液的制備：24～481ml50～l00cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培5~73~5ml0.9％無(wú)菌氯化鈉溶液，菌毛細(xì)吸管)0.9lml50～l00cfu（一 取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次1:101ml50~10012個(gè)平皿，培養(yǎng)，計(jì)算各菌株的回收率。試驗(yàn)組：5×2=102ml10個(gè)；菌液組：5×2=10個(gè)，即每個(gè)菌株的加菌量，每株2個(gè)皿。 共24個(gè)本底菌組：2個(gè)細(xì)菌計(jì)數(shù)，2個(gè)霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)。146個(gè)用于試驗(yàn)組計(jì)數(shù)，6個(gè)用于菌液組104個(gè)用于試驗(yàn)組計(jì)數(shù)，4個(gè)用于菌液組計(jì)數(shù)，2個(gè)用于霉菌本底菌回收率=[(試驗(yàn)組菌數(shù)-本底菌組菌數(shù))/菌液組菌數(shù)370%以上270%以上時(shí)，霉菌計(jì)數(shù)用該驗(yàn)至不含抑菌作用。測(cè)定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時(shí)，取同稀釋級(jí)的供試液2ml，lml供試液可等量分注多個(gè)平皿，傾注瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。具體操作：（1ml5個(gè)皿為例1:101ml50.2ml，每株試驗(yàn)菌試驗(yàn)組：5×10=502ml50個(gè)；菌液組：5×2=10個(gè)，即每個(gè)菌株的加菌量，每株2個(gè)皿。 共80個(gè)本底菌組：10個(gè)細(xì)菌計(jì)數(shù)，10個(gè)霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)。1glmllml，過pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜。沖洗后取出7（52個(gè)本底菌）（二）菌種大腸埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(CMCC(B)26乙型付傷寒沙門菌(SalmonellaparatyphiB)(CMCC(B)50銅綠假單胞菌(Pseudomonasaerugmosa)(CMCC(B)10菌液制備接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單10~l00cfu10~100cfu試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng) 結(jié)果判 陰性菌對(duì)照組不得檢出陰性對(duì)照菌。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，按此（一）2～3lml90mm的無(wú)菌平皿中（1ml供試液2個(gè)平板。陰性對(duì)照試驗(yàn)lml2培養(yǎng)和計(jì) 除另有規(guī)定外，細(xì)菌培養(yǎng)48小時(shí)，逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，一般以7272小時(shí)5～7天進(jìn)行菌落汁數(shù)并報(bào)告。菌落15，則兩個(gè)平1倍或以上。30～300之間、霉菌平均菌30～100之間的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)報(bào)告(取兩位有效數(shù)字)的依據(jù)。1個(gè)稀釋級(jí)的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以該級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍2(比值為高稀釋級(jí)22但不超55，或高1時(shí)，以<1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為1glmllml，過陰性對(duì)照試驗(yàn)lml培養(yǎng)和計(jì) 培養(yǎng)條件和計(jì)數(shù)方法同平皿法，每片濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過菌數(shù)報(bào)告規(guī)則1glml供試品的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù)；若濾膜上無(wú)菌落<1報(bào)告菌數(shù)(1g1ml供試品)，或<1乘以最低稀釋倍數(shù)的值（二）陽(yáng)性對(duì)照試 供試品進(jìn)行控制菌檢查時(shí)，應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn) 取稀釋液10m1照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)供試液制備增菌培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)挑取疑似菌落 生化試驗(yàn) 報(bào)告結(jié)lml含供試品0.1g01m1)、1100的供試液lml(含供試品001g或lml18～24小時(shí)。18～24小時(shí)。2所列的菌落2確證試驗(yàn)4～5個(gè)疑似菌落，分別接種于乳糖