檢驗(yàn)科總膽固醇測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號：JYK-3-SH-024版本/修訂號：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第5頁共5頁編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01血清總膽固醇測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請：血清總膽固醇(縮寫TC)測定；組合項(xiàng)目申請：血脂測定。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2檢驗(yàn)申請單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。2.1.3急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無法確認(rèn)標(biāo)本與申請單對應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存 2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。2.2.2標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定1天，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定7天。-20℃可保存數(shù)月；-70℃至少可保存半年；應(yīng)避免標(biāo)本反復(fù)凍溶。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時(shí)間超過1天的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹?fàn)顟B(tài)。抽血前3天內(nèi)避免高脂飲食，24小時(shí)內(nèi)不飲酒。2.3.2不建議采集抗凝血標(biāo)本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是肝素。EDTANa2(1mg／mL)抗凝。2.1.5抽血前最好停用影響血脂的藥物（如調(diào)脂藥、避孕藥、某些降壓藥、激素等）數(shù)天或數(shù)周，否則應(yīng)記錄用藥情況。2.1.6妊娠后期各項(xiàng)血脂都會(huì)增高，應(yīng)在產(chǎn)后或終止哺乳后3個(gè)月查血才能反映基本血脂水平。3方法原理CHOD-PAP法，雙波長終點(diǎn)法。膽固醇酯水解酶(CEH)將血清中的膽固醇酯(CE)水解成游離膽固醇(Chol)，膽固醇氧化酶(CHOD)將水解生成的膽固醇和血清中原來存在游離膽固醇氧化成△4-膽甾烯酮，并產(chǎn)生過氧化氫(H2O3)，最后在過氧化物酶(POD)的作用下H2O3與4-氨基安替比林(4-AAP)和酚(三者合稱PAP)縮合，生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應(yīng))。醌亞胺在520nm波長處有吸收峰，吸光度與標(biāo)本中總膽固醇呈正比。4試劑及其他用品4.1試劑：總膽固醇測定(CHOD-PAP法)試劑盒（貨號TC6150），由北京利德曼生化股份有限公司出品。4.2試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲(chǔ)存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定14天。開蓋后避免污染。當(dāng)試劑變混濁，或者試劑出現(xiàn)明顯的粉紅色，或空白吸光率>0.3時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。4.3試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)單試劑型，即開即用，無特殊準(zhǔn)備。4.4試劑盒主要成分：緩沖液30mmol/LPH=6.5±0.24-氨基安替比林0.25mmol/L膽固醇酯酶>150U/L膽固醇氧化酶>100U/L過氧化物酶>5000U/L苯酚25mmol/L疊氮鈉<0.01%5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品：Beckman-CoulterSYNCHRONLXMULTI校準(zhǔn)液（P/N442600），其濃度可溯源至美國國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究所（NIST）標(biāo)準(zhǔn)參考材料。5.2校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：線性模式，1個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。5.3校準(zhǔn)周期：校準(zhǔn)間隔時(shí)間不限。但在：①更換試劑批號或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；②儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后，進(jìn)行一次校準(zhǔn)。5.4校準(zhǔn)液重建方法：Beckman-CoulterSYNCHRONLXMULTI校準(zhǔn)液即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個(gè)不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測定：在每一批標(biāo)本中測定兩個(gè)水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí)糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動(dòng)生化分析儀器。8標(biāo)本檢測步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。主要分析參數(shù)參見說明書。10結(jié)果計(jì)算血清總膽固醇濃度（mmol/L）＝×校準(zhǔn)液膽固醇濃度(mmol/L)儀器根據(jù)此公式自動(dòng)給出每個(gè)標(biāo)本測定結(jié)果。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：0.0～19.3mmol/L，超過此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV<4.0％，總CV<5.0％；12.2準(zhǔn)確度：測量結(jié)果在貝克曼質(zhì)控血清靶值±2SD范圍內(nèi)。不同方法學(xué)試劑的質(zhì)控結(jié)果之間會(huì)存在差異，使用時(shí)請確保質(zhì)控選擇與試劑的方法學(xué)保持一致。12.3靈敏度：膽固醇為4.5mmol/L時(shí)的顯色吸光度A520nm約0.21-0.23。12.4線性范圍：0.0～19.3mmol/L。12.5方法的有限性及干擾因素：12.5.1血清中多種非膽固醇甾醇也可參與測定反應(yīng)，但一般人血清中非膽固醇甾醇約占總膽固醇的1％，因此這種影響可以不計(jì)。12.5.2內(nèi)源性干擾物溶血為1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黃疸30mg/ml、抗壞血酸100mg/ml對測試結(jié)果無明顯影響。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平13.1參考范圍：2.9～5.68mmol/L。13.2醫(yī)學(xué)決定水平我國血脂異常防治建議XE"血脂異常防治建議"（1997）提出：XE"TC"合適范圍：≤5.20mmol/L(200mg/dl)；邊緣升高：5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dl)；升高：≥5.72mmol/L(220mg/dl)14臨床意義14.1總膽固醇除了可以作為高膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外，不是其他任何疾病的診斷指標(biāo)，對于動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病而言，TC是一個(gè)明確的危險(xiǎn)因子，與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān)，總膽固醇水平每增加1%，冠心病的危險(xiǎn)性增加2%。14.2影響總膽固醇水平的因素有：①年齡與性別，TC水平往往隨年齡上升，但到70歲或80歲后有所下降，中青年女性低于男性，50歲后女性高于男性；②長期的高膽固醇、高飽和脂肪和高熱量飲食可使總膽固醇增高；③遺傳因素；④其他，如缺少運(yùn)動(dòng)、腦力勞動(dòng)、精神緊張等可能使總膽固醇升高。14.3高膽固醇血癥有原發(fā)性與繼發(fā)性兩類。原發(fā)的如家屬性高膽固醇血癥、低密度脂蛋白受體缺陷癥、家屬性apo-B缺陷癥、多源性(polygenic)高總膽固醇、混合性高脂蛋白血癥。繼發(fā)的見于腎病綜合征、甲狀腺機(jī)能減退、糖尿病、妊娠等。14.4低膽固醇血癥也有原發(fā)的與繼發(fā)的，前者如家屬性的無β或低β脂蛋白血癥；后者如甲亢、營養(yǎng)不良、慢性消耗性疾病等。嚴(yán)重肝病病人血清總膽固醇不一定很低，但由于血清卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶活力低下，血清膽固醇酯占總膽固醇的比例可低達(dá)50％以下。14.5不應(yīng)憑一次血脂檢測結(jié)果作出血脂水平異常的診斷，有懷疑時(shí)應(yīng)在兩月內(nèi)進(jìn)行再次或多次測定，且兩次測定至少要相隔一周；在判斷是否存在高脂血癥或決定防治措施之前，至少應(yīng)有兩次血脂檢驗(yàn)的記錄。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個(gè)測定結(jié)果，審核者對發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：審核與血脂其他指標(biāo)和與載脂蛋白等的關(guān)系，總膽固醇濃度主要與LDL-C、HDL-C呈正相關(guān)，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定通常無威脅生命的‘緊急值’”17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott自動(dòng)生化分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。17.2生化檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)