中東呼吸綜合征冠狀病毒實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告

中東呼吸綜合征冠狀病毒實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告一、生物因子（一）一般特性中東呼吸綜合征（MiddleEastRespiratorySyndrome,MERS）冠狀病毒是一種新型的冠狀病毒，是導(dǎo)致人呼吸道傳染病的病原體，系冠狀病毒β屬成員。大多數(shù)MERS冠狀病毒感染病例發(fā)生在沙特，但目前歐洲、非洲、亞洲和美洲已經(jīng)發(fā)現(xiàn)病例。世界衛(wèi)生組織通報(bào)，2012年6月6日沙特一名60歲男性患者因感染MERS冠狀病毒發(fā)病，后發(fā)展為急性腎功能衰竭而于6月24日死亡，截至2014年4月，該病毒在沙特共確診感染411例，死亡病例達(dá)112例。MERS冠狀病毒為有包膜病毒，直徑多為60～120nm，包膜上有放射狀排列的花瓣樣或纖毛狀突起，長(zhǎng)約20nm或更長(zhǎng)，基底窄，形似王冠。成熟病毒呈圓球形、橢圓形，成熟的和未成熟的病毒體在大小和形態(tài)上都有很大的差異，可以出現(xiàn)很多古怪的形態(tài)，如腎形、馬蹄形、鈴鐺形等，很容易與細(xì)胞器混淆。在大小上，病毒顆粒從開始的400nm減小到成熟后期的60～120nm。（二）來(lái)源目前發(fā)現(xiàn)的患者發(fā)病前均到過(guò)中東沙特等地。大多數(shù)MERS冠狀病毒感染病例發(fā)生在沙特。目前仍未明確確定該病毒以何種方式傳播到人體，但許多專家認(rèn)為，駱駝最可能是最初將該病毒傳播到人體的動(dòng)物，患者也是MERS冠狀病毒的傳染源，已經(jīng)出現(xiàn)在長(zhǎng)時(shí)間接觸的情況下MERS冠狀病毒有限人傳人的，但目前沒(méi)有證據(jù)表明MERS冠狀病毒可以在一般人群中傳播。由于流行病學(xué)資料有限，不排除其他動(dòng)物、隱性感染者等其他傳染源。（三）傳染性最新研究表明，MERS冠狀病毒人間傳染性比SARS冠狀病毒更低，但危險(xiǎn)性卻強(qiáng)于SARS冠狀病毒。不排除今后發(fā)生病毒在人體內(nèi)的適應(yīng)性增強(qiáng)或?qū)е聜鞑チ訌?qiáng)的突變風(fēng)險(xiǎn)。（四）傳播途徑MERS冠狀病毒最主要的傳播途徑是呼吸道近距離的飛沫傳播。含有病毒的分泌物可以在許多物體表面存活，與患者接觸同一公共設(shè)施也會(huì)導(dǎo)致被感染。雖然病毒的傳播能力尚不清楚，但由于是新病毒，建議遵循高傳染性嚴(yán)重呼吸道感染疾病的指南進(jìn)行病例管理。（五）易感性人群對(duì)病毒普遍易感。（六）潛伏期潛伏期不明確，其他人類冠狀病毒的潛伏期一般為3～10d。（七）劑量—效應(yīng)關(guān)系尚不清楚這種MRES冠狀病毒的特性，其劑量關(guān)系有待研究。（八）致病性病例主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、氣促和呼吸困難等急性重癥呼吸道感染癥狀。該病毒能導(dǎo)致急性腎衰竭。（九）變異性冠狀病毒屬巢狀病毒目，冠狀病毒科，主要分為α、β、γ三個(gè)屬。α、β屬僅對(duì)哺乳動(dòng)物致病，γ屬主要引起鳥類感染。人冠狀病毒按抗原差異可以分成不同的抗原群，以往發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒有抗原1、2群，其代表株分別為HCoV-229E和HCoV-OC43。2003年出現(xiàn)的SARS病毒不同于上述兩種抗原群。此外，2004年以后荷蘭等地又發(fā)現(xiàn)有新毒株，如HCoV-NL63、HCoV-HKU1。如今在沙特出現(xiàn)的MERS冠狀病毒為冠狀病毒β屬，單股正鏈RNA病毒，其基因組約為30000個(gè)核苷酸組成，與SARS冠狀病毒有約54.9%的同源性，但基因組的組成形式與其他冠狀病毒相似。目前的基因序列分析表明MERS冠狀病毒迄今變異較小，基因序列與早期發(fā)現(xiàn)的病毒之間未發(fā)現(xiàn)能引起傳染性與毒性重要變化的差異。（十）穩(wěn)定性冠狀病毒在環(huán)境中穩(wěn)定性較好。室溫24℃下病毒在尿液里至少存活2d，在腹瀉病人的痰液和糞便里能存活到4d以上，在血液中至少可存活約15d,在塑料、玻璃、馬賽克、金屬、布料、復(fù)印紙等多種物體表面均可存活約2～3d。病毒對(duì)溫度敏感，隨溫度升高，抵抗力下降，37℃可存活4d，56℃加熱90min、75℃加熱30min能夠滅活病毒，紫外線照射60min可破壞病毒的感染性。病毒對(duì)有機(jī)溶劑敏感，乙醚4℃24h可完全滅活病毒，75%乙醇5min可使病毒失去活力，含氯的消毒劑5min可以滅活病毒。（十一）預(yù)防和治療1.預(yù)防預(yù)防要針對(duì)傳染源、傳播途徑、易感人群三個(gè)環(huán)節(jié)，采取以管理和控制傳染源，預(yù)防控制醫(yī)院內(nèi)傳播為主的綜合性防治措施，努力做到“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早隔離、早治療”。（1）控制傳染源。在MERS冠狀病毒流行的情況下，要采取措施，確?！八脑纭贝胧┞鋵?shí)到位。強(qiáng)調(diào)就地隔離、就地治療，避免遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移（轉(zhuǎn)運(yùn)）。對(duì)每例MERS病人、疑似病人都應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi)開展流行病學(xué)調(diào)查，追溯其發(fā)病前的接觸史和癥狀期的密切接觸者，對(duì)癥狀期密切接觸者均應(yīng)實(shí)施醫(yī)學(xué)觀察，一般采取家庭觀察；必要時(shí)實(shí)施集中醫(yī)學(xué)觀察，但要注意避免交叉感染。對(duì)可疑的發(fā)熱病人，應(yīng)立即讓其住院而進(jìn)行隔離治療。（2）切斷傳播途徑。加強(qiáng)院內(nèi)感染控制，建立健全院內(nèi)感染管理組織，制定醫(yī)院內(nèi)預(yù)防MERS冠狀病毒感染的管理制度，嚴(yán)格消毒，落實(shí)醫(yī)務(wù)人員個(gè)體防護(hù)措施，促使醫(yī)務(wù)人員形成良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣。對(duì)病人及疑似病人及探視者實(shí)施嚴(yán)格管理。原則上對(duì)于MERS冠狀病毒感染的病人應(yīng)禁止陪護(hù)與探視。（3）易感人群的保護(hù)。研究表明，正確使用干擾素對(duì)MERS病毒的感染者有預(yù)防作用。但目前尚無(wú)特效的疫苗或藥物預(yù)防方法2.治療目前尚無(wú)特異性治療措施，主要采取對(duì)癥支持治療。（十二）事故分析迄今為止，國(guó)內(nèi)外還未報(bào)道實(shí)驗(yàn)室感染事件，一旦發(fā)生此類事件，應(yīng)按照體系規(guī)定程序進(jìn)行報(bào)告。對(duì)開展MERS冠狀病毒檢測(cè)、科研工作的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行嚴(yán)格控制，確保實(shí)驗(yàn)室生物安全。從事MERS冠狀病毒科研，檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)加強(qiáng)生物安全管理，應(yīng)建立健全熱性傳染病病原管理組織；制定和完善MERS冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)操作規(guī)范；加強(qiáng)可能暴露于MERS冠狀病毒或潛在感染性材料的相關(guān)業(yè)務(wù)人員生物安全知識(shí)培訓(xùn)和風(fēng)險(xiǎn)意識(shí)教育；切實(shí)落實(shí)各項(xiàng)管理制度，預(yù)防和控制實(shí)驗(yàn)室等渠道造成MERS冠狀病毒的感染和傳播；建立實(shí)驗(yàn)室工作人員可疑癥狀報(bào)告制度，并保證他們能及時(shí)被定點(diǎn)專科醫(yī)院收治。二、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與風(fēng)險(xiǎn)控制（一）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)BSL-3實(shí)驗(yàn)室從事MERS病毒的細(xì)胞分離培養(yǎng)、病毒的TCID50測(cè)定和中和實(shí)驗(yàn)，制備MERS冠狀病毒抗原片、MERS冠狀病毒的血清學(xué)抗原或抗體檢測(cè)。1.MERS冠狀病毒的細(xì)胞分離培養(yǎng)（見(jiàn)表8-31） 序號(hào)實(shí)驗(yàn)操作可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風(fēng)險(xiǎn)1、接種前標(biāo)本處理1、標(biāo)本轉(zhuǎn)移至生物安全柜離心管掉落破裂或破碎，感染性物質(zhì)濺出，同時(shí)可能產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)標(biāo)本處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面輔含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙。低2、對(duì)咽拭子標(biāo)本進(jìn)行擠壓、對(duì)肺組織進(jìn)行漂洗、組織研磨產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)標(biāo)本處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)下面輔新鮮配制的含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙。低3、標(biāo)本離心產(chǎn)生氣溶膠或破裂溢出低生物安全柜內(nèi)或離心機(jī)實(shí)驗(yàn)室采用帶有安全套蓋的離心套筒，如離心過(guò)程中發(fā)生收集管破裂，應(yīng)關(guān)閉電源，在生物安全柜內(nèi)處理相關(guān)感染性物質(zhì)，徹底清潔和消毒離心機(jī)套桶。如果在不帶有安全套筒的離心機(jī)操作，離心過(guò)程中發(fā)生收集管破裂時(shí)，應(yīng)關(guān)閉電源并且保持離心機(jī)蓋子關(guān)閉30min。如果在機(jī)器停止運(yùn)行后發(fā)生了破裂，離心機(jī)蓋應(yīng)立即關(guān)閉并保持30min，并及時(shí)通知本實(shí)驗(yàn)室生物安全員采取相應(yīng)措施低4、標(biāo)本轉(zhuǎn)移離心管1、離心管開蓋時(shí)液體濺出，離心管滑落，打翻標(biāo)本2、標(biāo)本轉(zhuǎn)移時(shí)，吸頭漏液3、加樣時(shí)，感染性液體濺出，污梁離心管外部、手臂或生物安全柜臺(tái)面低生物安全柜內(nèi)1、在操作時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以防開蓋時(shí)離心管滑落、打翻或?yàn)R出2、使用移液器時(shí)，確保吸頭與移液器連接緊密，吸取或吹打液體時(shí)動(dòng)作要輕緩3、樣品打開前進(jìn)行短暫離心，去除樣品管蓋上的殘留，避免開蓋時(shí)樣品濺出4、使用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000ml/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒糟紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒糟消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理2、接種細(xì)胞過(guò)程1、吸取處理后標(biāo)本接種細(xì)胞標(biāo)本滴落臺(tái)面或抽吸的過(guò)程形成氣溶膠低生物安全柜內(nèi)使用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理低2、移至孵箱孵育接種后培養(yǎng)瓶遺跌落，形成氣溶膠低實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)將培養(yǎng)瓶口擰緊，轉(zhuǎn)移時(shí)使用轉(zhuǎn)移托盤低3、孵育后Hank’s液清洗細(xì)胞形成氣溶膠，清洗液濺灑低生物安全柜內(nèi)操作時(shí)在生物安全柜內(nèi)放好帶有消毒液的紗布。用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套低4、加生長(zhǎng)液形成氣溶膠低生物安全柜內(nèi)加生長(zhǎng)液時(shí)動(dòng)作輕柔，避免對(duì)著細(xì)胞生長(zhǎng)面加液，加液后及時(shí)將瓶口擰緊或蓋上培養(yǎng)板蓋。低3、培養(yǎng)觀察1、顯微鏡觀察移動(dòng)過(guò)程跌落導(dǎo)致溢出或形成氣溶膠低實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)為避免大量病毒產(chǎn)生危害，一次病毒培養(yǎng)體積不超過(guò)100mL。將培養(yǎng)瓶口擰緊，放置托盤中，移動(dòng)時(shí)輕緩，注意安全。大量培養(yǎng)物溢出時(shí)，停止實(shí)驗(yàn)，先用一塊布或紙巾蓋上，再把消毒劑倒到上面，實(shí)驗(yàn)人員先退出實(shí)驗(yàn)室，至少靜置30min，然后才可把布和紙巾等物品清理走低2、培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)程形成氣溶膠低培養(yǎng)箱內(nèi)放在CO2孵箱內(nèi)的病毒培養(yǎng)瓶需擰緊，密封袋包裝，并放在托盤上，以防止污染孵箱低4、培養(yǎng)物收獲細(xì)胞培養(yǎng)物的收獲分裝分裝過(guò)程滴落臺(tái)面，污染管壁，凍存管封口不嚴(yán)低生物安全柜內(nèi)為避免大量病毒產(chǎn)生危害，一次病毒培養(yǎng)體積不超過(guò)100mL。操作時(shí)在生物安全柜內(nèi)放好帶有清毒液的紗布。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。分裝病毒時(shí)應(yīng)使用帶墊圈、密封效果好的旋蓋管，分裝時(shí)注意安全，確保病毒不污染管外壁，管外壁經(jīng)75%醫(yī)用酒精紗布擦拭后方可移出生物安全柜低表8-31MERS冠狀病毒的細(xì)胞分離培養(yǎng)的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施2、病毒的TCID50測(cè)定和中和實(shí)驗(yàn)（見(jiàn)8-32）表8-32病毒的TCID50測(cè)定和中和實(shí)驗(yàn)的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施序號(hào)實(shí)驗(yàn)操作可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風(fēng)險(xiǎn)1、接種前培養(yǎng)物處理1、標(biāo)本轉(zhuǎn)移至生物安全柜離心管掉落破裂或破碎，感染性物質(zhì)濺出，同時(shí)可能產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)培養(yǎng)物處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面輔含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙。低2、對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行稀釋、振蕩產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)稀釋與振蕩時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低2、接種細(xì)胞過(guò)程1、吸取稀釋后標(biāo)本接種細(xì)胞標(biāo)本滴落臺(tái)面或抽吸的過(guò)程形成氣溶膠低生物安全柜內(nèi)使用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理低2、移至孵箱孵育接種后培養(yǎng)板跌落，形成氣溶膠低實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)將細(xì)胞培養(yǎng)板蓋好，用封口膜妥善密封，轉(zhuǎn)移時(shí)使用轉(zhuǎn)移托盤低3、培養(yǎng)觀察1、顯微鏡觀察CPE移動(dòng)過(guò)程跌落導(dǎo)致溢出或形成氣溶膠低實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)放置托盤中，移動(dòng)時(shí)輕緩，注意安全。培養(yǎng)物溢出時(shí)，停止實(shí)驗(yàn)，先用一塊布或紙巾蓋上，再把消毒劑倒到上面，實(shí)驗(yàn)人員先退出實(shí)驗(yàn)室，至少靜置30min，然后才可把布和紙巾等物品清理走低2、培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)程形成氣溶膠低培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)板放在CO2孵箱內(nèi)需妥善密封并放在托盤上，以防止污染孵箱低3、制備MERS冠狀病毒抗原片（見(jiàn)8-33）表8-33制備MERS冠狀病毒抗原片的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施序號(hào)實(shí)驗(yàn)操作可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風(fēng)險(xiǎn)1、制備前培養(yǎng)物處理1、培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至生物安全柜離心管掉落破裂或破碎，感染性物質(zhì)濺出，同時(shí)可能產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)培養(yǎng)物處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面輔含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙。低2、對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行處理產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)稀釋與振蕩時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)下面鋪新鮮配制的含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低2、抗原片制備過(guò)程吸取病毒液玻片、風(fēng)干，以及固定過(guò)程標(biāo)本滴落臺(tái)面或抽吸的過(guò)程形成氣溶膠、風(fēng)干和固定過(guò)程產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)使用濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理低4、MERS冠狀病毒的抗原或抗體檢測(cè)（見(jiàn)表8-34）表8-34MERS冠狀病毒的抗原或抗體檢測(cè)的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施序號(hào)實(shí)驗(yàn)操作可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風(fēng)險(xiǎn)1、標(biāo)本處理1、標(biāo)本轉(zhuǎn)移至生物安全柜離心管掉落破裂或破碎，感染性物質(zhì)濺出，同時(shí)可能產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)標(biāo)本或血清處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一理發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低2、對(duì)標(biāo)本或血清進(jìn)行稀釋、振蕩產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)稀釋與振蕩時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)并立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低2、抗原抗體反應(yīng)與結(jié)果測(cè)定過(guò)程1、吸取稀釋后標(biāo)本或血清至微孔或抗原片標(biāo)本滴落臺(tái)面或抽吸的過(guò)程形成氣溶膠低生物安全柜內(nèi)使用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理低2、移至孵箱孵育加樣后微孔板或抗原片跌落形成氣溶膠低實(shí)驗(yàn)室污染區(qū)將微孔板或抗原片置濕盒中，封口膜妥善密封，轉(zhuǎn)移時(shí)使用轉(zhuǎn)移托盤低3、微孔板或抗原片洗滌洗滌后的液滴滴落臺(tái)面或抽吸的過(guò)程形成氣溶膠及洗滌液中含有病毒低生物安全柜內(nèi)使用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理低4、酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度或熒光顯微鏡觀察移動(dòng)過(guò)程跌落導(dǎo)致溢出或形成氣溶膠低實(shí)驗(yàn)室污染區(qū)放置托盤中，移動(dòng)中輕緩，注意安全。此時(shí)微孔板或抗原片中殘留感染性病毒的可能已極低。溢出或滴落時(shí)，停止實(shí)驗(yàn)，先用一塊布或紙巾蓋上，再把消毒劑倒到上面，實(shí)驗(yàn)人員先退出實(shí)驗(yàn)室，至少靜置30min，然后才可把布和紙巾等物品清理走。另應(yīng)注意反應(yīng)液的化學(xué)危害或抗原片跌落破裂導(dǎo)致的物理傷害低2、設(shè)施設(shè)備設(shè)施設(shè)備中，生物安全柜、培養(yǎng)箱、離心機(jī)、振蕩器、冰箱、高壓滅菌器的可能風(fēng)險(xiǎn)，以及控制措施見(jiàn)表8-35表8-35設(shè)施、設(shè)備的可能風(fēng)險(xiǎn)和控制措施儀器名稱可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生可能性后果描述控制措施生物安全柜氣流異常不大可能對(duì)實(shí)驗(yàn)人員及實(shí)驗(yàn)室的高度危險(xiǎn)操作培訓(xùn)，設(shè)備定期維護(hù)。使用時(shí)，觀察窗不要抬得過(guò)高；柜內(nèi)盡量少放儀器和物品，不要阻塞后面氣口處的空氣流通；禁止在柜內(nèi)使用酒精燈；在柜內(nèi)的所有工作都要在工作臺(tái)中央或后部進(jìn)行，并且通過(guò)觀察窗能看見(jiàn)柜內(nèi)的操作；盡量減少操作者后面的人員走動(dòng)，操作者不要頻繁移動(dòng)及揮動(dòng)手臂以免破壞定向氣流；前面的空氣柵格不要被吸管或其他材料擋??；生物安全柜的風(fēng)扇在工作開始前及操作結(jié)束后至少要再運(yùn)行5min培養(yǎng)箱二氧化碳泄漏；電源短路；培養(yǎng)物產(chǎn)生氣溶膠可能性低人員接觸污染1、每次使用二氧化碳培養(yǎng)箱時(shí)，注意觀察二氧化碳?xì)獗?，以及培養(yǎng)箱顯示是否正常，確保電源線連接正常，電源線周圍無(wú)液體存在2、定期更換二氧化碳培養(yǎng)箱的空氣濾膜3、嚴(yán)格規(guī)范操作，定期檢查離心機(jī)離心管發(fā)生破裂，氣溶膠釋放可能性低人員接觸污染配備有安全套筒的離心機(jī)，可轉(zhuǎn)移到生物安全柜內(nèi)處理振蕩器產(chǎn)生氣溶膠、泄漏和窗器破裂可能性低人員樣品接觸污染必須使用塑料的器皿，因?yàn)椴ＡЭ赡軙?huì)破裂釋放出感染性物質(zhì)，而且可能傷及操作者。在操作結(jié)束后，容器應(yīng)在生物安全柜里才能重新開啟冰箱保存管泄漏可能性極低人員樣品接觸污染操作培訓(xùn)，做好個(gè)人防護(hù)高壓滅菌器人員接觸高溫部位，發(fā)生燙傷可能性中等人員發(fā)生燙傷操作培訓(xùn)，做好個(gè)人防護(hù)

（三）人員1.健康監(jiān)護(hù)和健康狀況評(píng)估實(shí)驗(yàn)人員、輔助人員、后勤保障人員上崗前應(yīng)建立個(gè)人健康檔案，進(jìn)行定期的健康體檢和相應(yīng)的免疫接種。人員的健康狀況應(yīng)當(dāng)符合實(shí)驗(yàn)室的安全工作要求。從事MERS冠狀病毒研究的實(shí)驗(yàn)室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室工作。出現(xiàn)下列情況時(shí)不能進(jìn)入；患發(fā)人性疾病、感冒、上呼吸道感染，或其他導(dǎo)致抵抗力下降的情況；妊娠；已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室控制區(qū)域內(nèi)連續(xù)工作4h以上，或其他原因造成的疲勞狀態(tài)；心理素質(zhì)不穩(wěn)定的也盡量避免進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室；未經(jīng)充分專業(yè)技能操作技能培訓(xùn)的人員。MERS冠狀病毒實(shí)驗(yàn)人員的健康監(jiān)護(hù)從開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)開始，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束后最長(zhǎng)潛伏期結(jié)束，期間應(yīng)每日早晚測(cè)量體溫并觀察相應(yīng)癥狀并記錄。若操作者或其所在實(shí)驗(yàn)室了工作人員在此期間出現(xiàn)發(fā)熱、體溫高于38℃等類似癥狀，則應(yīng)被視為可能發(fā)生實(shí)驗(yàn)室感染，應(yīng)立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，采取、早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早隔離、早治療以控制管理傳染源為主的綜合性防治措施，對(duì)疑似感染者采取嚴(yán)格的隔離防護(hù)措施，送至指定醫(yī)院就診，并做好轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的安全隔離和防護(hù)、消毒工作。另外措施有實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)前采集本底血清樣本，實(shí)驗(yàn)活動(dòng)期間每天測(cè)體溫，必要時(shí)采集血液樣本進(jìn)行前后對(duì)比檢測(cè)，以確定是否感染。2.人員資質(zhì)和培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)人員、輔助人員、后勤保障人員上崗前均須接受嚴(yán)格的生物安全，以及相關(guān)操作的技術(shù)培訓(xùn)，包括實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、設(shè)備、個(gè)體防護(hù)、實(shí)驗(yàn)操作等培訓(xùn)。同時(shí)，必須熟悉和嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室的管理要求。人員資質(zhì)培訓(xùn)的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施見(jiàn)表8-36.表8-36人員資質(zhì)培訓(xùn)的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施潛在風(fēng)險(xiǎn)因素發(fā)生可能性后果嚴(yán)重性控制措施實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)水平技術(shù)培訓(xùn)不足或操作不熟練導(dǎo)致誤操作嚴(yán)重實(shí)驗(yàn)人員需接受相關(guān)技術(shù)培訓(xùn)并考核合格后方能上崗；定期進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)和演練人員健康水平實(shí)驗(yàn)人員身體狀況不佳或患有基礎(chǔ)疾病中實(shí)驗(yàn)室工作人員每年參加體檢，預(yù)留本底血清標(biāo)本；實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行BSL-3實(shí)驗(yàn)室前需測(cè)量體溫，體溫高于37℃者不能進(jìn)入未經(jīng)授權(quán)人員未經(jīng)授權(quán)人員進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室高進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室須得到相關(guān)部門和實(shí)驗(yàn)負(fù)責(zé)人的批準(zhǔn)，應(yīng)詳細(xì)登記出入時(shí)間，并保證2名以上的人員可以進(jìn)入（四）意外事件、事故帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)MERS冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室的安全防護(hù)重點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中盡量減少氣溶膠的產(chǎn)生和相關(guān)人員的呼吸道的保護(hù)，如佩戴N95口罩等，防止通過(guò)吸入氣溶膠而感染。1.臨床標(biāo)本的處理疑似MERS冠狀病毒感染的病人的咽拭子。肺組織和血液標(biāo)本等標(biāo)本當(dāng)中可能含活病毒，但濃度不詳。對(duì)此類臨床標(biāo)本的操作都必須在實(shí)驗(yàn)室的安全柜內(nèi)操作，實(shí)驗(yàn)操作人員按三級(jí)防護(hù)級(jí)別進(jìn)行個(gè)體防護(hù)。2.涉及活病毒的操作涉及活病毒的操作是指如病毒分離、組織培養(yǎng)、TCID50測(cè)定、中和實(shí)驗(yàn)、間接免疫實(shí)驗(yàn)等，以及MERS冠狀病毒抗原、抗體檢測(cè)前，對(duì)血清進(jìn)行56℃水浴90min滅活處理，以及MERS冠狀病毒電鏡標(biāo)本制作，超薄切片標(biāo)本甲醛，餓酸固定前的實(shí)驗(yàn)。此類實(shí)驗(yàn)必須在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作人員按三級(jí)防護(hù)級(jí)別進(jìn)行個(gè)人防護(hù)。3.已滅活的病毒或標(biāo)本的操作已滅活的病毒或血清標(biāo)本等，用于病毒特異性核酸、抗原、抗體檢測(cè)和電鏡切片的觀察實(shí)驗(yàn)時(shí)，可在BSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)操作人員按二級(jí)防護(hù)級(jí)盡量使用塑料材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)物品，避免使用尖銳物品和利器。必須使用時(shí)應(yīng)倒放在耐扎的容器內(nèi)，使用后收集在待定的帶蓋的銳器容器內(nèi)保存至最后消毒處理或銷毀。禁止將使用后的一次性針頭重新套在針頭套，嚴(yán)格禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。禁止徒手處理破損或打碎的玻璃器材。對(duì)實(shí)驗(yàn)室的臺(tái)面，應(yīng)當(dāng)對(duì)其銳角進(jìn)行處理，如加裝桌角保護(hù)器或?qū)ψ澜沁M(jìn)行打磨等，使桌角保持光滑，避免割傷皮膚。4.實(shí)驗(yàn)室操作后的消毒措施涉及臨床標(biāo)本和活病毒的實(shí)驗(yàn)操作，在實(shí)驗(yàn)完畢后用含0.5%有效氯的次氯酸鈉消毒劑溶液擦拭工作臺(tái)面、生物安全柜內(nèi)壁及臺(tái)面，實(shí)驗(yàn)器材表面用70%酒精擦拭后移除生物安全柜。廢棄物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)121℃高壓處理30min后才允許運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。在BSL-2實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行核酸擴(kuò)增、抗體檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)室，為了確保安全，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢液和使用過(guò)的耗材等都必須用含有10%有效氯的次氯酸鈉消毒液浸泡30min后，才允許運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室并存放在指定的存放點(diǎn)進(jìn)行集中處理。5.標(biāo)本接種處理量的控制出于安全考慮以及便于操作，如果處理臨床標(biāo)本以備接種，每次操作的標(biāo)本不應(yīng)超過(guò)20份；如果處理經(jīng)過(guò)擴(kuò)增后的標(biāo)本，病毒的原始容積≤2.5ml/份時(shí)，每次操作的標(biāo)本不能超過(guò)10份；2.5～10.5ml/份時(shí)，每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本不能超過(guò)5份；>10.5ml/份時(shí)，每次操作的標(biāo)本不能超過(guò)3份。（五）其他風(fēng)險(xiǎn)控制其他風(fēng)險(xiǎn)主要包括對(duì)化學(xué)、物理、輻射、電器和水災(zāi)、火災(zāi)等自然等引起的風(fēng)險(xiǎn)。1、化學(xué)風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)熟知實(shí)驗(yàn)涉及的試劑的化學(xué)品安全說(shuō)明書，本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能接觸免疫學(xué)檢測(cè)中的酸、堿、抗原片制備過(guò)程中的固定試劑，應(yīng)注意操作輕緩，防止濺落而接觸皮膚。如發(fā)生皮膚接觸，應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)，在做好緊急處置后，撤離實(shí)驗(yàn)區(qū)，用大