現(xiàn)代分子生物學(第三版)課后答案-第五章分子生物學研究方法(上)

第五章分子生物學的研究方法（上）西南大學生命科學學院09級XX(僅代表個人觀點)1，哪些重要的科學發(fā)現(xiàn)和實驗推動了DNA重組技術的產(chǎn)生和發(fā)展？答：1，確定遺傳信息的攜帶者是DNA而不是蛋白質；2，DNA的雙螺旋結構模型和半保留復制機制的提出；3，中心法則，操縱子學說的提出和密碼子的破譯；4，重組工具酶的發(fā)現(xiàn)；5，運載體重組質粒的發(fā)現(xiàn)。2，如何理解PCR擴增的原理和過程。答：原理：DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。過程：1，變性，將DNA在臨近沸點的溫度下加熱使變性，雙鏈打開；2，退火，引物與模版的相結合；3，鏈的延伸，DNA合成。3，簡述定量PCR的原理和過程。答：實時定量PCR反應在帶透明蓋的塑料小管中進行，激發(fā)光可以直接頭孤傲管蓋，使其中的熒光探針被激發(fā)。一逛探針事先混合在PCR反應液中，只有與DNA結合之后，才能被激發(fā)發(fā)出熒光。隨著新和成DNA片段的增加，結合到DNA上的熒光探針，即被激發(fā)產(chǎn)生的熒光增加。4，基因組DNA文庫和cDNA文庫在構建原理和用途上的主要區(qū)別是什么？答：基因組DNA是把某種生物的基因組DNA切成適當大小，分別與載體結合，導入微生物細胞形成克隆。應用：主要用于基因組作圖、測序和克隆序列的對比。cDNA文庫是以mRNA為模版反轉錄而成的序列，與適當?shù)妮d體（常用噬菌體或質粒載體）連接后轉化受體菌，則每個細菌含有一段cDNA，并能繁殖擴增。應用：篩選目的基因、大規(guī)模測序、金銀芯片雜交等功能基因組學的研究。5，基因克隆的方法主要有哪幾種？簡述各種方法的作用和用途。答：1，RACE技術，用于在已知cDNA序列的基礎上克隆5’端和3’端缺失的序列；2，應用cDNA差示分析法克隆基因，在沒有任何探針的情況下，通過降低cDNA群體復雜性和更換cDAN兩端接頭的方法特異性的擴增目的基因片段。3，Gateway大規(guī)?？寺〖夹g，用于實現(xiàn)不需要傳統(tǒng)的酶切連接過程的基因快速克隆和載體間平行轉移，為大規(guī)?？寺』蚪M注視的可譯框架提供保障；4，基因的圖位克隆法，用于分離未知形狀目的基因。6，在基因操作實踐中有哪些檢測核酸和蛋白質相對分子質量的方法？答：核酸凝膠電泳、蛋白質SDS，蛋白質組學的研究對象和目的是什么？主要有哪些技術和方法。答：研究對象：某遺物種、個體、器官、組織或細胞在特定條件、特定時間所表達的全部蛋白質圖譜。技術：雙向電泳技術、蛋白質印跡法、蛋白質的質譜分析技術8，SNP作為第三代遺傳標記的優(yōu)點是什么？答：(1)SNPs在基因組中的相對高頻分布，非常適合用于關聯(lián)分析。(2)SNP在人群中是二等位基因性的，在任何人群中其等位基因頻率都可估計出來；(3)與串聯(lián)重復的微衛(wèi)星位點相比，SNP是高度穩(wěn)定的，尤其是處于編碼區(qū)的SNP(cSNP)，而前者的高突變率容易引起對人群的遺傳分析出現(xiàn)困難；(4)部分位于基因內部的SNP可能會直接影響產(chǎn)物蛋白質的結構或基因表達水平，因此，它們本身可能就是疾病遺傳機制的候選改變位點；(5)易于進行自動化、規(guī)?；治?，縮短了研究時間。9，基因分型的方法有哪些？簡述其原理。答：基因分型是利用生物學檢測方法測定個體基因型的技術。又稱為基因型分析，PCR基因分型技術，使用技術包括聚合酶鏈反應（PCR）、DNA片段分析、寡核苷酸探針（ASOprobes）、基因測序、核酸雜交、基因芯片技術等。10，已知一個cDNA3’端的部分序列，請設計實驗流程得到該基因的全長cDNA。答