消毒質(zhì)量現(xiàn)場(chǎng)采樣及檢測(cè)方法

消毒質(zhì)量現(xiàn)場(chǎng)采樣及檢測(cè)方法采樣及檢測(cè)原則

GB15982-1995醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：

采樣時(shí)間：消毒處理后，醫(yī)療活動(dòng)前期間

采樣后盡快檢測(cè)，送檢時(shí)間≤6小時(shí)，若樣品保存0—4℃，送檢時(shí)間≤24h一、空氣器材：9cm普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板方法：平板暴露法（沉降法）一般情況：按GB15982-1995醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積≤30m2,設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線(xiàn)三點(diǎn)，內(nèi)外布點(diǎn)距墻壁1m；室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)中央及四角5點(diǎn)，四點(diǎn)的布點(diǎn)位置距墻1m，暴露時(shí)間5min培養(yǎng)時(shí)間：48小時(shí)計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)（cfu/m3）=50000N/(A×T)A：平板面積（cm2）T：平板暴露時(shí)間N：平均菌落數(shù)檢出限：對(duì)于≤30m2房間，如果3塊平板共長(zhǎng)1個(gè)菌，則根據(jù)公式，計(jì)算結(jié)果為52.3報(bào)＜53cfu/m3如果先四舍五入，保留一位小數(shù)，以平均菌量0.3計(jì)，結(jié)果是47.2，報(bào)＜48cfu/m3數(shù)值的不同與在哪一步采取數(shù)字修約有關(guān)對(duì)于＞30m2房間計(jì)算結(jié)果為31.4，報(bào)＜32cfu/m3上述情況說(shuō)明：平板沉降5分鐘只能適用于衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)值高于檢測(cè)限的空氣采樣，例如普通手術(shù)室，標(biāo)準(zhǔn)值≤200cfu/m3對(duì)于潔凈度要求高的環(huán)境，該方法的最低檢出限與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不一致GB15928-1995規(guī)定Ⅰ類(lèi)環(huán)境≤10cfu/m3怎么解決？延長(zhǎng)采樣時(shí)間潔凈手術(shù)室：依據(jù)GB50333-2002檢測(cè)平板沉降方法：沉降時(shí)間30min布點(diǎn)要求及沉降菌標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域等級(jí)潔凈度布點(diǎn)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)（cfu/皿）特別潔凈手術(shù)室手術(shù)區(qū)百級(jí)≥13點(diǎn)≤0.2周邊區(qū)千級(jí)≥5點(diǎn)≤0.4標(biāo)準(zhǔn)潔凈手術(shù)室手術(shù)區(qū)千級(jí)≥5點(diǎn)≤0.75周邊區(qū)萬(wàn)級(jí)≥2點(diǎn)≤1.5一般潔凈手術(shù)室手術(shù)區(qū)萬(wàn)級(jí)≥2點(diǎn)≤2周邊區(qū)十萬(wàn)級(jí)≥2點(diǎn)≤4二、物體表面1、采樣液對(duì)于只清潔、未消毒的表面：無(wú)菌生理鹽水消毒后的物體表面：根據(jù)使用消毒劑選擇含相應(yīng)中和劑的采用液2．采樣方法5cm×5cm標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格板棉拭采樣≥100cm2；門(mén)把手等不規(guī)則物體表面：直接涂抹3、中和劑的選擇消毒劑中和劑成分0.5%碘伏0.5%硫代硫酸鈉、0.5%吐溫80消毒劑2000mg/L有效氯0.5%硫代硫酸鈉、0.5%吐溫8075%乙醇0.5%卵磷脂、0.5%吐溫80季銨鹽0.5%卵磷脂、0.5%吐溫80洗必泰0.5%卵磷脂、0.5%吐溫802%戊二醛1%甘氨酸、0.5%吐溫80中和劑中需要加硫代硫酸鈉的：過(guò)氧化氫、過(guò)氧乙酸、二氧化氯、氧化還原電位水、臭氧、含氯消毒劑、碘和其他消毒劑要加卵磷脂和吐溫80的：乙醇、洗必泰、季銨鹽類(lèi)、要加甘氨酸的：戊二醛、三氯生、對(duì)氯間二甲苯酚、要加皂基的：聚六亞甲基胍（若沒(méi)有皂基，可將1%組氨酸、5%卵磷脂、10%吐溫80加入D/E肉湯

醫(yī)院常用手消毒劑的中和劑舉例：愛(ài)護(hù)佳（3M公司）：2%卵磷脂4%吐溫80百能牌免洗外科手消毒液：2%甘氨酸6%卵磷脂10%吐溫80詩(shī)樂(lè)氏（含雙氯苯雙胍乙烷）、凈手（氯羥基二苯醚）：1%組氨酸4%卵磷脂6%吐溫804、檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)：取1ml接種平皿金黃色葡萄菌：1ml接種9mlSCDLP液體培養(yǎng)基，36±1℃培養(yǎng)24h，血平板分離乙型溶血性鏈球菌：樣品1ml接種1%葡萄糖肉湯沙門(mén)氏菌：按照GB4789.41ml加入增菌液中四、工作人員手1．采樣液：無(wú)菌生理鹽水適合只清潔，未用消毒劑的情況含相應(yīng)中和劑的采樣液適用于消毒后采樣手衛(wèi)生效果的監(jiān)測(cè)方法WS/T313-2009《醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范》附錄B如果消毒后采樣，需要用證實(shí)符合要求的中和劑怎樣知道用何種中和劑？通過(guò)進(jìn)貨時(shí)查驗(yàn)產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告或進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)2．采樣方法被檢人員五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子，在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面積約30cm2）并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭，剪去操作者手接觸部位，將棉拭投入10ml采樣液。檢測(cè)方法：混勻器振蕩20秒或用力振打80次，取1ml接種，36℃培養(yǎng)48小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)：衛(wèi)生手消毒：監(jiān)測(cè)的細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤10cfu/cm

外科手消毒：監(jiān)測(cè)的細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤5cfu/cm五．使用中消毒液1．采樣時(shí)間：更換前，使用中的消毒液2．需要檢測(cè)微生物污染情況的：采樣液：含相應(yīng)中和劑的營(yíng)養(yǎng)肉湯，采樣方法：取1.0ml消毒液加入9.0ml含中和劑的營(yíng)養(yǎng)肉湯3．需要測(cè)定含量：另取干凈、干燥的采樣瓶直接取樣采樣量＞100ml要求采樣量滿(mǎn)足檢測(cè)需要。標(biāo)準(zhǔn)要求：使用中的消毒液污染的微生物≤100cfu/ml；不得檢出致病性微生物使用中消毒液有效成分含量要求符合標(biāo)識(shí)濃度六、內(nèi)窺鏡采樣依據(jù)：內(nèi)鏡清洗消毒技術(shù)規(guī)范方法檢測(cè)部位：內(nèi)鏡的內(nèi)腔面用無(wú)菌注射器抽取10ml含相應(yīng)中和劑的緩沖液，從待檢內(nèi)鏡活檢口注入，用15ml無(wú)菌試管從活檢出口收集，及時(shí)送檢，2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)一般情況的中和劑

酸化水：0.5%硫代硫酸鈉、0.5%吐溫80

戊二醛：1%甘氨酸、0.5%吐溫80采樣時(shí)注意事項(xiàng)：避免污染防止酒精燈火焰?zhèn)皟?nèi)鏡鏡頭操作一人難以完成，需要兩人配合采樣時(shí)最好標(biāo)明內(nèi)鏡編號(hào)，有問(wèn)題好追溯（不合格查明原因，消毒液?jiǎn)栴}還是生物膜問(wèn)題）

檢測(cè)：菌落計(jì)數(shù)：充分振蕩，取0.5ml接種2個(gè)平皿后傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂，35℃培養(yǎng)48h后計(jì)數(shù)致病菌：0.2ml接種血平板

0.2ml接種中國(guó)蘭平板

0.2ml接種SS平板涂布35℃培養(yǎng)48h

觀察有無(wú)致病菌生長(zhǎng)七．污水1、檢測(cè)依據(jù)：GB18466-2005醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染排放標(biāo)準(zhǔn)2、檢測(cè)項(xiàng)目余氯的檢測(cè)：用干凈空瓶采樣，現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。直接用余氯測(cè)試盒檢測(cè)余氯糞大腸菌群沙門(mén)氏菌志賀氏菌的檢測(cè)：采樣：污水采樣加入含1g硫代硫酸鈉的滅菌瓶中，根據(jù)GB18466-2005檢測(cè)八．滅菌器1、壓力蒸汽滅菌器滅菌效果：嗜熱脂肪桿菌芽孢培養(yǎng)溫度：56±1℃《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年a.檢測(cè)方法：下排氣式壓力蒸汽滅菌器、預(yù)真空和脈動(dòng)真空滅菌器，生物指示劑置于標(biāo)準(zhǔn)包中心部位，標(biāo)準(zhǔn)包置于排氣口上方。b.手提壓力蒸汽滅菌器用通氣儲(chǔ)物盒代替標(biāo)準(zhǔn)包，盒內(nèi)盛滿(mǎn)中試管，生物指示劑放于中心部位放于中心部位兩只滅菌試管內(nèi)，儲(chǔ)物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部WS310.3-2009《醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第3部分：清洗消毒及滅菌效果》

按照《消毒技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定，將嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片制成標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試包，或使用一次性標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試包，對(duì)滅菌器的滅菌質(zhì)量進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)生物監(jiān)測(cè)包置于滅菌器排氣口的上方或生產(chǎn)廠家建議的滅菌器內(nèi)最難滅菌的部位，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。具體監(jiān)測(cè)方法為：將生物指示物置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包的中心部位。標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包由16條41cm×66cm的全棉手術(shù)巾制成。制作方法：將每條手術(shù)巾的長(zhǎng)邊先折成3層，短邊折成2層，然后疊放，制成23cm×23cm×15cm大小的測(cè)試包。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無(wú)菌條件下取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56℃±1℃培養(yǎng)7d（自含式生物指示物按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)執(zhí)行），觀察培養(yǎng)結(jié)果。小型壓力蒸汽滅菌器因一般無(wú)標(biāo)準(zhǔn)生物監(jiān)測(cè)包，應(yīng)選擇滅菌器常用的、有代表性的滅菌包制作生物測(cè)試包，置于滅菌器最難滅菌的部位，且滅菌器應(yīng)處于滿(mǎn)載狀態(tài)。生物測(cè)試包應(yīng)側(cè)放，體積大時(shí)可平放。采用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時(shí)，應(yīng)直接將一支生物指示物，置于空載的滅菌器內(nèi)，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后取出，規(guī)定條件下培養(yǎng)，觀察結(jié)果。2、環(huán)氧乙烷滅菌器滅菌：枯草桿菌黑色變種芽孢生物指示管置于常規(guī)生物測(cè)試包中，測(cè)試包放在最難滅菌的部位（整個(gè)裝載滅菌包的中心部位），滅菌周期完成后取出，36±1℃培養(yǎng)7天觀察結(jié)果（自含式生物指示物應(yīng)遵循產(chǎn)品說(shuō)明），觀察顏色變化，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。常規(guī)生物指示包的制備：取一個(gè)20ml無(wú)菌注射器，去年針頭，拔出針?biāo)?，將生物指示劑放入針筒?nèi)，帶孔的塑料帽應(yīng)朝向針頭處，再將注射器的針?biāo)ú寤蒯樛?，之后用一條全棉小毛巾兩層包裹，置于紙塑包裝袋中，封裝。3、干熱滅菌器：按照《消毒技術(shù)規(guī)范》采用枯草桿菌黑色變種芽孢菌片，制成標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)試包，置于滅菌器最難滅菌的部位，并設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。將枯草桿菌芽孢菌片分別裝入無(wú)菌試管內(nèi)（1片/管）。滅菌器與每層門(mén)把手對(duì)角線(xiàn)內(nèi)、外角處放置2個(gè)含菌片的試管，試管帽于試管旁，關(guān)好柜門(mén)，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，待溫度降至80℃時(shí)，加蓋試管帽后取出試管。在無(wú)菌條件下，加入普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（5ml/管）,36℃±1℃培養(yǎng)48h，觀察初步結(jié)果，無(wú)菌生長(zhǎng)管繼續(xù)培養(yǎng)至第7日九．紫外線(xiàn)輻照強(qiáng)度1．器材：紫外輻照計(jì)2．檢測(cè)方法：開(kāi)燈5min后，探頭放在燈管中心距高1m處檢測(cè)3．注意事項(xiàng)：儀器定期檢定，在檢定期內(nèi)使用每次使用時(shí)需要儀器調(diào)零個(gè)人防護(hù)：眼罩、口罩、帽子、防止紫外線(xiàn)灼傷。十、血液凈化室（中心）的監(jiān)測(cè)依據(jù)：血液凈化標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程2010版透析用水的水質(zhì)監(jiān)控：（P22~23)1.電導(dǎo)率約10μs/cm2.純水的pH值應(yīng)維持在5~73.細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)每月1次，要求細(xì)菌數(shù)<200cfu/ml；采樣部位為反滲水輸水管路末端，每臺(tái)透析機(jī)每年至少監(jiān)測(cè)1次內(nèi)毒素檢測(cè)每3個(gè)月1次，<2Eu/ml，每臺(tái)透析機(jī)至少每年檢測(cè)1次?；瘜W(xué)污染物監(jiān)測(cè)1次1年工作人員手衛(wèi)生依據(jù)：血液凈化標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程2010版P19：要求遵守《醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范》衛(wèi)生手≤10cfu/cm2外科手≤5cfu/cm2空氣和物體表面血液凈化標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程2010版P20參照血液透析中心感染控制的管理要求，明顯被污染的表面應(yīng)用≥500mg/L有效氯消毒液消毒應(yīng)達(dá)到《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB15982-1995規(guī)定的對(duì)三類(lèi)環(huán)境的要求空氣培養(yǎng)≤500cfu/m3物體表面≤10cfu/cm2

國(guó)內(nèi)消毒產(chǎn)品相關(guān)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

談智一、滅菌劑與高水平消毒劑(一)定義滅菌劑：能殺滅一切微生物達(dá)滅菌要求的制劑。高水平消毒劑：可殺滅各種微生物，對(duì)細(xì)菌芽孢的殺滅作用達(dá)到消毒效果的制劑。(二)相關(guān)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1、消毒技術(shù)規(guī)范(衛(wèi)生部，2002)：滅菌劑能在說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的一半（0.5T）殺滅芽孢，定性滅菌試驗(yàn)達(dá)到合格；高水平消毒劑懸液法對(duì)芽孢的殺滅指數(shù)≥5.00：載體法對(duì)芽孢的殺滅指數(shù)≥3.00。2、美國(guó)官方分析化學(xué)協(xié)會(huì)(AOAC)消毒劑標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法：滅菌劑效果評(píng)價(jià)，要求以枯草桿菌黑色變種芽孢為指標(biāo)，720個(gè)載體全部無(wú)菌生長(zhǎng)。3、歐洲標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)消毒劑與防腐劑測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)(CEN)：滅菌保證水平10-6。二、抗（抑）菌劑與皮膚黏膜消毒劑(一)定義

抗菌劑：殺滅或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的制劑。

抑菌劑：抑制或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的制劑。

皮膚黏膜消毒劑：殺滅皮膚黏膜上的微生物達(dá)消毒要求的制劑。

(二)相關(guān)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1、我國(guó)：評(píng)價(jià)依據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》(衛(wèi)生部，2002)》《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB15979-2002)》。(1)皮膚黏膜消毒劑；懸液法對(duì)細(xì)菌殺滅對(duì)數(shù)值≥5.00，對(duì)真菌殺滅對(duì)數(shù)值≥4.00；載體法的殺滅對(duì)數(shù)值≥3.00①外科洗手和皮膚消毒：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、大腸桿菌作用時(shí)間≤3min。

②衛(wèi)生洗手消毒：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、大腸桿菌作用時(shí)間≤1min。

⑧皮膚黏膜消毒：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌作用時(shí)間≤5min。

④足部消毒：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌作用時(shí)間≤5min。(2)抗(抑)菌洗劑：接觸皮膚黏膜，具有一定殺(抑)菌作用的制劑(栓劑、皂劑除外)。抑菌洗劑不得用于破損的皮膚黏膜。

①抗菌洗劑：對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌與白色念珠菌殺滅率≥90%。參照國(guó)標(biāo)進(jìn)行定量殺菌試驗(yàn)。

②抑菌洗劑：對(duì)大、金、白念抑菌率≥50%。參照國(guó)標(biāo)進(jìn)行定量抑菌試驗(yàn)。消毒劑