免疫學(xué)期末考試問答題 2024衛(wèi)生學(xué)考試學(xué)習(xí)資料

《免疫學(xué)》期末考試4選2問答題舉例說明細(xì)胞因子在醫(yī)學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用細(xì)胞因子是機(jī)體免疫細(xì)胞和一些非免疫細(xì)胞產(chǎn)生的一組具有廣泛生物活性的異質(zhì)性肽類調(diào)節(jié)因子，包括：①白細(xì)胞介素（ILS）；②集落刺激因子（CSF）；③干擾素（IFN）；④腫瘤壞死因子（TNF）；⑤轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）；⑥小分子免疫肽，如轉(zhuǎn)移因子、胸腺肽等。各種細(xì)胞因子的生物學(xué)功能，請(qǐng)參考第六章。它們的臨床治療，目前主要有兩個(gè)方面：（1）促進(jìn)造血與免疫功能重建：在放射性骨髓損傷，腫瘤放療及化療后以及骨髓移植后，機(jī)體的免疫功能十分低下，極易受細(xì)菌、病毒及其他致病因子的感染。大多數(shù)細(xì)胞因子除作用于成熟的免疫細(xì)胞，參與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)外，醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理還具有促進(jìn)骨髓干細(xì)胞增殖、分化心及促進(jìn)T細(xì)胞在胸腺內(nèi)發(fā)育的作用。如各各CSF、EPO、IL-3、IL-6、IL-7、IL-9、干細(xì)胞因子（SCF）等都可刺激不同的造血干細(xì)胞的增殖分化。不同細(xì)胞因子之間可協(xié)同促進(jìn)造血與免疫功能的重建。（2）惡性腫瘤的治療：一些細(xì)胞因子，如TNF本身就有殺腫瘤細(xì)胞作用。但大多數(shù)細(xì)胞因子本身并不能殺傷腫瘤細(xì)胞，但可通過增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的功能來抑制腫瘤的生長(zhǎng)。IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ等都有這種作用。但細(xì)胞因子單獨(dú)應(yīng)用，需大劑量，毒副作用強(qiáng)，因此目前認(rèn)為細(xì)胞因子聯(lián)合應(yīng)用或細(xì)胞因子與抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用，可以提高腫瘤的治療效果，減少副作用。（二）舉例說明HLA與醫(yī)學(xué)實(shí)踐的關(guān)系HLA這一多態(tài)系統(tǒng)在其種系發(fā)展過程中被保存下來，具有特殊的生物學(xué)意義。

1靶功能

HLAⅠ類抗原分布于所有有核細(xì)胞。其抗原特異性在于肽鏈抗原決定簇的特定氨基酸順序。這些抗原可被外來物質(zhì)例如某種病毒或化學(xué)物質(zhì)加以改變，當(dāng)這些基因產(chǎn)物被改變之后，便成為自身免疫原，成為免疫排除的耙子?？梢?，耙功能的實(shí)質(zhì)在于“識(shí)別自我”，以保證機(jī)體的完整性。因此，分布于所有細(xì)胞及其多態(tài)性這一特點(diǎn)十分重要。

2識(shí)別功能

HLA的識(shí)別功能實(shí)指在免疫反應(yīng)中特有的協(xié)同作用。抗體在B細(xì)胞生成，但在多數(shù)情況下，需要巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞參與。其過程是：抗原經(jīng)巨噬細(xì)胞處理后，抗原信息傳遞給T輔助細(xì)胞，后者再將信息傳給B細(xì)胞，使B細(xì)胞進(jìn)而分化生成專一抗體。在這個(gè)過程中，T輔助細(xì)胞不僅識(shí)別致敏巨噬細(xì)胞上的抗原，同時(shí)也要識(shí)別巨噬細(xì)胞是否與其本身的Ⅱ類抗原相一致。就是說，只有巨噬細(xì)胞的單體型和T輔助細(xì)胞的單體型相一致時(shí)，T輔助細(xì)胞才被激活，從而使免疫反應(yīng)在嚴(yán)密的遺傳控制下進(jìn)行。

HLA在醫(yī)學(xué)上的意義如下：1.HLA與同種器官移植的關(guān)系器官移植的成敗主要取決于供、受者間的組織相容性,其中HLA等位基因的匹配程度起關(guān)鍵作用。組織相容性程度的確定，涉及對(duì)供受者作HLA分型和進(jìn)行交叉配合試驗(yàn)。在同種器官移植中，Ⅱ類分子的相容性往往更加重要。HLA與輸血反應(yīng)的關(guān)系HLA分型主要與非溶血性輸血反應(yīng)等白細(xì)胞抗原引起的輸血反應(yīng)有關(guān)，主要見于反復(fù)輸血治療的患者中。3.HLA與疾病的相關(guān)性HLA是人體對(duì)疾病易感的主要免疫遺傳學(xué)成分或與疾病關(guān)聯(lián)的原發(fā)成分。HLA和疾病關(guān)聯(lián)的機(jī)制是由于同一個(gè)HLA座位上的等位基因，在結(jié)構(gòu)上的差異。分析這些差異何醫(yī)學(xué)''教育網(wǎng)搜集整理以會(huì)造成個(gè)體免疫應(yīng)答能力的不同，為闡明該疾病發(fā)生的分子免疫學(xué)基礎(chǔ)，提供了有價(jià)值的切入途徑。4.HLA的\o"生理學(xué)"\t"/new/37a176a2009/_blank"生理學(xué)意義HLA的生理學(xué)意義主要有作為抗原提呈分子參與特異性免疫應(yīng)答和作為調(diào)節(jié)分子參與固有免疫應(yīng)答（如編碼某些補(bǔ)體成份，調(diào)節(jié)NK細(xì)胞和部分殺傷細(xì)胞的活性，在應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮作用等）。疾病HLA抗原相對(duì)危險(xiǎn)性RR強(qiáng)直性脊柱炎Ⅰ類型

B27＞100青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎B2724Reiter病B2730～50牛皮癬性關(guān)節(jié)炎B176Bechat綜合征Cw69發(fā)作性睡眠B5110～15尋常天皰瘡Ⅱ類

DR220I型糖尿病DR424多發(fā)性硬化癥DR3/DR420全身性\t"/Article/Class573/_blank"紅斑狼瘡DR24全身性硬化癥Ⅲ類C4AQOC4BQOC4AQO6119（三）流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用【摘要】流式細(xì)胞術(shù)(FCM)是一種對(duì)單細(xì)胞快速定量分析的新技術(shù),能夠快速分析單個(gè)細(xì)胞的多種特性，其既可以定性也可以定量，適于大量樣品的檢測(cè)。隨著流式細(xì)胞分析技術(shù)與方法的日臻完善和臨床應(yīng)用范圍不斷拓寬，幾乎臨床醫(yī)學(xué)各學(xué)科都涉及到流式細(xì)胞分析技術(shù)的應(yīng)用，已逐漸成為推動(dòng)臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要手段,本文就流式細(xì)胞術(shù)在臨床上的應(yīng)用進(jìn)展作一綜述。

流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,FCM)是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的對(duì)單細(xì)胞定量分析的一種新技術(shù)。它借鑒了熒光標(biāo)記技術(shù)、激光技術(shù)、單抗技術(shù)和計(jì)算機(jī)技術(shù),具有極高的檢測(cè)速度與統(tǒng)計(jì)精確性,而且從單一細(xì)胞可以測(cè)得多個(gè)參數(shù),為生物醫(yī)學(xué)與臨床檢驗(yàn)提供了全新視角和強(qiáng)有力手段[1]。目前,隨著單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展,流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)廣泛使用在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐的各個(gè)方面,發(fā)揮著重要作用。本文就其在臨床上的應(yīng)用綜述如下。

1流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)中的應(yīng)用

FCM可以進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群分析,可同時(shí)檢測(cè)出一種或幾種淋巴細(xì)胞表面亞群分析,將不同的淋巴細(xì)胞亞群區(qū)分開來,并計(jì)算出它們相互間的比例。通過對(duì)患者淋巴細(xì)胞各亞群數(shù)量的測(cè)定了解淋巴細(xì)胞的分化功能,鑒別新的淋巴細(xì)胞亞群。更重要的是通過研究大多數(shù)疾病的特異性淋巴細(xì)胞亞群或某些細(xì)胞表面標(biāo)志的存在、缺乏、過度表達(dá)等,對(duì)一些疾病,如免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤等診斷、治療、免疫功能重建和器官移植監(jiān)測(cè)等有重要的臨床意義。如HIV主要侵襲CD4+T細(xì)胞而導(dǎo)致CD4淋巴細(xì)胞減少,CD4/CD8淋巴細(xì)胞比值下降,為艾滋病的診斷和治療提供依據(jù)[2]。在其它免疫功能性疾病的診治方面如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的淋巴細(xì)胞變化可反映該病的活動(dòng)情況和器官侵犯程度,伴有嚴(yán)重腎臟損害的SLE患者可出現(xiàn)低CD4+、高CD8+的現(xiàn)象[3]。此外,FCM可以用來進(jìn)行組織相容性抗原(HLA)群體分析;HLA-B27抗原陽(yáng)性與強(qiáng)直性脊柱炎等一系列關(guān)節(jié)病有著不同程度的正相關(guān)。FCM應(yīng)用HLA-B27特異性單抗檢測(cè)抗原，其敏感性較傳統(tǒng)的微量細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)大大提高,同時(shí)多參數(shù)的熒光測(cè)定使我們能夠在特定的細(xì)胞亞群中分析HLA-B27[4-5],還可以利用FCM進(jìn)行移植配型移植后免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)。

2流式細(xì)胞術(shù)在血液學(xué)中的應(yīng)用

血液系統(tǒng)腫瘤的診斷和治療FCM通過對(duì)外周血細(xì)胞或骨髓細(xì)胞表面抗原和DNA的檢測(cè)分析，對(duì)白血病、淋巴瘤等各種血液病的診斷、預(yù)后判斷和治療起著舉足輕重的作用。FCM采用各種抗血細(xì)胞表面分化抗原的單克隆抗體，借助于各種熒光染料測(cè)定一個(gè)細(xì)胞的多種參數(shù)，以正確地判斷出該細(xì)胞的屬性。各種血細(xì)胞系統(tǒng)都具有其獨(dú)特的抗原，當(dāng)形態(tài)學(xué)檢查難以區(qū)別時(shí)，免疫表型參數(shù)對(duì)各種急性白血病、淋巴瘤的診斷和鑒別診斷有決定性作用，其診斷的準(zhǔn)確性可達(dá)到90%左右[5]。微小殘留病變(MRD)是白血病復(fù)發(fā)的主要根源,FCM能在患者緩解期檢測(cè)是否有殘留病變細(xì)胞，及早發(fā)現(xiàn)后采取措施避免復(fù)發(fā)。而且測(cè)定DNA倍體和進(jìn)行細(xì)胞周期分析對(duì)指導(dǎo)白血病化療也有一定作用，不同的白血病患者或同一患者在不同病期白血病細(xì)胞增殖狀況不同，定期了解細(xì)胞增殖情況采取相應(yīng)藥物可以提高療效。急性白血病的多耐藥基因(MDR)也常用FCM檢測(cè)，F(xiàn)CM特有的敏感性和特異性，用于檢測(cè)二氨基苯茚酮mRNA的表達(dá)產(chǎn)物P糖蛋白(Pgp)及其活性(作為藥物的排出泵，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度)，可以更直接的反映耐藥程度。陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)是一種造血干細(xì)胞克隆病,細(xì)胞CD55、CD59抗原表達(dá)減低是該病的一個(gè)特點(diǎn)。FCM采用熒光標(biāo)記的單克隆抗體對(duì)血細(xì)胞CD59的表達(dá)做定量分析，可以協(xié)助臨床做出診斷并判斷疾病的嚴(yán)重程度。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)。FCM通過某些熒光染料(吖啶橙等)與紅細(xì)胞中RNA結(jié)合，定量測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞中RNA，得到網(wǎng)織紅細(xì)胞占成熟紅細(xì)胞的百分比。有報(bào)道認(rèn)為[6]FCM比目測(cè)法的精確度更高。此外，F(xiàn)CM還可以測(cè)量出網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟度，對(duì)紅細(xì)胞增殖能力的判斷很有意義，為干細(xì)胞移植術(shù)后恢復(fù)的判斷、貧血的治療監(jiān)測(cè)、腫瘤患者放、化療對(duì)骨髓的抑制狀況等提供了依據(jù)。造血干/祖細(xì)胞計(jì)數(shù)造血干/祖細(xì)胞具有自我復(fù)制和多向分化潛能，是各種血細(xì)胞和免疫細(xì)胞的始祖。造血干/祖細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)造血干細(xì)胞移植意義重大。CD34抗原是早期造血干/祖細(xì)胞的表面標(biāo)志，應(yīng)用FCM分析、計(jì)數(shù)CD34細(xì)胞已成為造血干/祖細(xì)胞移植、造血重建的重要指標(biāo)。由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白的表達(dá)水平的高低來判斷,FCM測(cè)定血小板膜糖蛋白的表達(dá)情況可以診斷血小板膜糖蛋白異常所致疾病,這類疾病很少見但病因明確,主要是GpⅡb/Ⅲa或GpⅠb/Ⅸ/Ⅴ缺陷所致?；颊哐“迥pⅡb/Ⅲa的缺乏,導(dǎo)致血小板聚集功能明顯低下,這就是常染色體隱性遺傳病-血小板無力癥。而巨血小板綜合征是由于GpⅠb/Ⅸ/Ⅴ復(fù)合物數(shù)量或質(zhì)量的缺陷導(dǎo)致的遺傳性出血性疾病。FCM還可以通過單抗免疫熒光標(biāo)記血小板膜糖蛋白監(jiān)測(cè)血小板功能及活化情況,評(píng)價(jià)活化血小板程度在血栓性疾病和血栓前狀態(tài)發(fā)生發(fā)展中的作用,有利于血栓栓塞性疾病的診斷和治療,此外血小板活化時(shí)細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度是活化血小板監(jiān)測(cè)的一項(xiàng)非免疫性指標(biāo),免疫性血小板減少性紫癜患者血漿中可產(chǎn)生血小板自身抗體,結(jié)合在血小板表面,稱為血小板相關(guān)抗體,檢測(cè)血小板表面或血清中的相關(guān)抗體,可用于該病的診斷及治療監(jiān)測(cè)[7]。

3流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用

FCM在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用主要是利用DNA含量測(cè)定進(jìn)行包括癌前病變及早期癌變的檢出、化療指導(dǎo)以及預(yù)后評(píng)估等工作,FCM可精確定量DNA含量,能對(duì)癌前病變的性質(zhì)和發(fā)展趨勢(shì)做出判斷,有助于癌變的早期診斷[6]。首先需要把實(shí)體瘤組織解聚、分散制備成單細(xì)胞懸液,用熒光染料(碘化吡啶P1)染色后對(duì)細(xì)胞的DNA含量進(jìn)行分析,將不易區(qū)分的群體細(xì)胞分成三個(gè)亞群(G期、S期、G2期),DNA含量直接代表細(xì)胞的倍體狀態(tài),非倍體細(xì)胞與腫瘤惡性程度有關(guān)。DNA非整倍體細(xì)胞峰存在可為腫瘤診斷提供有力依據(jù)[6]。腫瘤細(xì)胞DNA倍體分析對(duì)患者預(yù)后的判斷亦有重要作用。異倍體腫瘤惡性病變的復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率及死亡率均較高,而二倍體及近二倍體腫瘤的預(yù)后則較好。FCM不僅可以對(duì)惡性腫瘤DNA含量進(jìn)行分析,還可根據(jù)化療過程中腫瘤DNA分布直方圖的變化去評(píng)估療效,了解細(xì)胞動(dòng)力學(xué)變化,對(duì)腫瘤化療具有重要的意義。臨床醫(yī)師可以根據(jù)細(xì)胞周期各時(shí)相的分布情況,依據(jù)化療藥物對(duì)細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的干擾理論,設(shè)計(jì)最佳治療方案。從DNA直方圖直接地看到腫瘤細(xì)胞的殺傷變化,及時(shí)選用有效的藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞達(dá)到最大的殺傷效果。

4流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞凋亡和多藥耐藥基因中的應(yīng)用

細(xì)胞凋亡是機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞分化和病理狀態(tài)中細(xì)胞死亡的過程,凋亡典型的形態(tài)特征是核染色質(zhì)固縮并分離,細(xì)胞質(zhì)濃縮,細(xì)胞膜和核膜皺曲,核斷裂形成片斷,最后形成數(shù)量不等的凋亡小體。FCM可以進(jìn)行DNA含量分析,通過二倍體細(xì)胞G0/G1期峰前的亞二倍體峰來確定。在凋亡早期,一些與膜通透性改變及凋亡有關(guān)的蛋白在細(xì)胞膜表面有特定表達(dá)。通過FCM結(jié)合單克隆抗體可以檢測(cè)表達(dá)這些蛋白的細(xì)胞,從而確定細(xì)胞的凋亡情況。多重耐藥性(multidrugresistance,MDR)是由多藥耐藥基因編碼的P糖蛋白(P-gp)親脂化合物,包括多種抗癌藥物和熒光染料的跨膜性排出泵。從人淋巴細(xì)胞排除熒光染料與細(xì)胞內(nèi)P-gp的含量直接相關(guān)。當(dāng)淋巴細(xì)胞出現(xiàn)MDR陽(yáng)性細(xì)胞時(shí),患者對(duì)化療藥物開始出現(xiàn)耐藥性,需要考慮其它治療方式。多藥耐藥是腫瘤患者化療失敗的主要原因,FCM對(duì)多藥耐藥基因(如P170)和凋亡抑制基因及凋亡活化基因表達(dá)的測(cè)定,可為臨床治療效果分析提供有力依據(jù)[8]。

5流式細(xì)胞術(shù)在器官移植中的應(yīng)用

FCM在器官移植中占有重要地位,可被用來判斷供者與受者之間是否合適,用來鑒別和定型同種異體反應(yīng)抗體[6]。通過供者白細(xì)胞和受者的血清共同孵育,如果受者血清中存在針對(duì)供者的循環(huán)抗體,就會(huì)同供者的淋巴細(xì)胞結(jié)合,再加入熒光素標(biāo)記的二抗來顯示這種結(jié)合,此方法能在移植手術(shù)前發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)的受體。移植后免疫表型的監(jiān)測(cè)也很重要。FCM可用于檢測(cè)移植后血液或移植內(nèi)免疫成分的變化,以預(yù)防移植后免疫排斥反應(yīng),細(xì)胞免疫抑制治療效果和移植存活情況,可敏感地預(yù)測(cè)排斥反應(yīng)的發(fā)生,為臨床治療提供有效依據(jù)。

6流式細(xì)胞術(shù)在臨床細(xì)菌學(xué)中的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)在臨床細(xì)菌學(xué)中的應(yīng)用具有快捷、靈敏,能同時(shí)進(jìn)行多參數(shù)分析等優(yōu)點(diǎn),可廣泛用于細(xì)菌、病原體、毒素和血清抗體及藥敏試驗(yàn)。免疫熒光檢測(cè)方法中的流式微球分析(CBA)是FCM的一個(gè)新應(yīng)用。這種方法也可用于真菌、寄生蟲、病毒以及這些病原體的混合感染的檢測(cè)。近年來,FCM與熒光染料的聯(lián)合運(yùn)用可判斷細(xì)菌的活力和功能狀態(tài),由于速度快,該方法已被建議作為臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)藥敏試驗(yàn)。FCM藥敏檢測(cè)方法較多,通過測(cè)量加入藥物孵育后的散射光的DNA含量來判斷抗生素對(duì)細(xì)菌的敏感性。該法現(xiàn)