DB51-T 2852-2021 普通級實驗用貓 微生物學(xué)監(jiān)測

DB51Conventionalexperimentalcat—Pathogenicsurv四川省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 2 3 4 5 5 6 8 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位：四川省農(nóng)村科技發(fā)展中心、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)、四川省藥品檢驗1普通級實驗用貓微生物學(xué)監(jiān)測NY/T541動物疫病實驗室檢驗采樣方法NY/T564豬巴氏桿菌病診斷技術(shù)3.13.2普通級實驗用貓conventionalexpe4檢測要求24.2檢測項目普通級實驗用貓微生物檢測項目應(yīng)符合表1▲▲▲▲●●○○○3a檢測結(jié)果存疑，需要進一步確診時，應(yīng)結(jié)合臨床癥狀和前期檢測結(jié)果，按照表2中普通級實驗用貓微生物檢測方法應(yīng)符合表24注：貓泛白細胞減少癥病毒、貓皰疹病毒I型、貓杯狀病毒、貓狂犬病病毒為免疫要求項目，應(yīng)按照本標(biāo)準(zhǔn)中“抗體檢測”要求，檢測70%以上的抗體合格率，在發(fā)現(xiàn)疑似癥狀時應(yīng)使用本標(biāo)準(zhǔn)中“核酸檢測”要求，判定陰性7.2采樣7.2.2.1可按微生物、寄生蟲采樣要58.2抗原和核酸檢查9檢測結(jié)論6上游引物序列（5′-3′）：CTGCTACT）：A.3對照設(shè)立Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板DN94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35個循環(huán)；72℃延伸1A.5.2產(chǎn)物參考序列CGTCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATAATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAGACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCATCTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATGTATATCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCATATACTATTGAAAATTCTGTACCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTTTTTTGATTGTAAACTAGACTAACACATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTAC7A.6結(jié)果判定判定貓泛白細胞減少癥病毒陽性；未出現(xiàn)401bp目8）：）：Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板DN94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，54℃退火30s，72℃延伸1min，35個循環(huán)；72℃延伸GCGGATTACACCACCACTCTCGATTGGATTGTATTCGGCGAGCTTGGTAATATTAGCAGCCAGAACAGAAATGTTACTCGTATCTGCGGGGGTAAACTAGTAACTCCCAAAATTCTCAGACCGCGCTGCGCGATAAATGCCAATATGGGTATTAGAGTGAGCTTCTCCCCCCCTGGTGGTAGAATCTTGGTTATTAAACCCACAGAATCTGTTAATTGTTTCAAACCCTCACGACGTTGAATGTCTTTACTAGTCATATTTTTTGAAAAACGACACGTTTTCAGCTCAATTAGAAAACATATACCACCCCCTTCTCCCTCAAATTGTATAGTACATACCAGGTCGGCGACGACCCAAGTTAACCTCACATGCTAGGTACACGCCCTTAGC9判定貓皰疹病毒I型陽性；未出現(xiàn)409bp目的片段時，判定貓皰疹按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進行，提取的RNA于）：）：使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒對所提RNA進行反轉(zhuǎn)錄，95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，55℃退火40s，72℃延伸1min，30個循環(huán)；72℃延伸AACCTGCGCTAACGTGCTTAAATACTATGATTGGGATCCCCACATCAGATTGGTTATCAACCCCAATAAATTTCTTCCTATTGGTTTCTGTGATAATCCTCTAATGTGTTGCTACCCAGAATTGCTCCCAGAATTCGGAACTGTGTGGGATTGTGATCAATCCCCACTGCCTACCTGGAGTCAATCCTTGGTGATGATGAATGGGCTTCAACTTACGATGCCATTGACCCTGTTGTTCCACCAATGCACTGGGCAGGCAAGATCTTCCAACCTCACCCTGGAGTTCTGATGCATTTTCTAATAAATGAAGTTGCAAAGGGCTGGGATCCAAGTTTGCTTCCGTTTGGAAGCAGATGACGGATCCATAACCACACCTGAACAGGGTACTGCGGTTGGTGGCGTCATTGCCCAACCCAGCGCTCGTCGGCAGCTGCAGACATGGCATCTGGTAAGAGTGTTGACTCTGAGTGGGAGGAATTCTTTTCCTTCCATACTAGTGTCAACTGGCAACTGAAACACAAGGAAAGATTCTGTTCAAACAGTCACTGGGACCCCTTCTCAACCCTTACCTTGAACACTTATCTAAACTCGCTTGGTCAGGCTCTATAGATGTTAGGTTTTCTATCTCTGGTTCTGGTGTCTTTGGGGGAAAACTAGCCGCAATAGTTGTCCCACTGTCGATCCTGTCCAAAGCACTTCCATGCTACAATACCCTCATGTGTTGTTTGATGCTCGACAGGTTGAACCAGTGATCTTTTCCTGATCTGAGGAATTCACTATATCACCTCATATCTGATACTGATACTACATCTCTGGTAATAATGGTTTACAATGATCTTATTATATGCAAATGAAGCTAACTCTTCTGGGTGTATTGTCA）：）：）：）：使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒對所提RNA進行反轉(zhuǎn)錄，95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，30個循環(huán)；72℃延伸295℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，30個循環(huán)；72℃延伸2CAAGATGTGCGCTAACTGGAGTACCATCCCGAACTTTAGATTCTTAGCTGGAACCTACGACATGTTTTTCTCTCGGATTGTTGTACTCAGCTATAAGAGTGGGCACAGTTGTCACTGCTTATGAAGACTGCTCAGGGTTGGTATCGTTCACAGGGTTCATAAAGCAAATCTCACCGCGAGAGAGGCAATCCTATATTTCTTCCACAAGAACTTTGAGGAAGAAATAAGAA。）：）：）：）：95℃預(yù)變性5min；95℃變性45s，95℃預(yù)變性5min；95℃變性45s，GCTCCCCAGTTGACCAGAGTTCGACCTTCCGCCTCATTTAAACTAACCAATCCCCATGCCTCTCGCTTCTGTACGCGCGCTGCTATAAAACGAGCCATCAGCCCCCAACGGGCGCGCAAGTCTTTGCTGAGACTTGACCGCCCCGGGTACCCGTGTACGAATAAACTGCCGATTGCATCTGACTCGTGGTCTCGGTGTTCCGTGGGCGCGGGGCCTCATCGCCGAGGAAGACCCAGTTCGGGGGTCTTTCGGGGCTCGTCCGGGATAGAGACCCCCAACCCCCGGGACCACCGACCCACCATCAGGAGGTAAGCTGGCCGGCGACCATATCTGTTTGTATAAGTGTCTCTGTCAATTGATCTGATTTTGGCGGTGGGATCGAAGGAGCTGACGAGCTCGTACTTCGCCCCCGCAACCCTGACGTTCCACGGGTGTCTGATGTCTGGAGCCTCTAGTGGGACAGCCATTGGGGCTCATCTGTTTGGGGTCTCACCTGAATACAGGTGATCGGAGACGAGGGAGCCGGACCCTCAAAGTCTCTTTCTGAGGTTTCATTTTCGGTTTGGTACC空白對照：在擴增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙空白對照：在擴增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板陽性對照出現(xiàn)146bp、290bp和390bp目的片段，陰性）：）：GTGATGCTATCATGACTAGGTGTCTTGCTATATATGATTGTTTTGTCAAACGTGTAGATTGGTCCATTGTGTACCCTTTTAAATGAAGAGAAGATCAATAAAGCTGGTCGCATTGTACAATCACATGTCATGAGAGCTGCTCTTAAAGTTTTCAACCCTGCTGCAATTCACGATGTTGGTAATCCAAAAGGTATTCGTTGTGCTGCGACACCCATACCGTGGTTTTGTTATG