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DB52DB52/T953—2014貴州辣椒品種SSR標(biāo)記鑒定技術(shù)規(guī)程2014-10-30發(fā)布2014-11-30實(shí)施貴州省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局貴州省農(nóng)業(yè)委員會(huì)I 1 1 1 1 2 2 3 51GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)簡(jiǎn)單重復(fù)序列(SimpleSequen稱量121.1gTris置于1L燒杯中，加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?，用濃鹽酸調(diào)pH值至24.56%變性測(cè)序膠稱取460g尿素，57g丙烯酰胺，3g甲叉雙丙烯酰胺，200ml5×TBE溶液，再加少量ddH2O，短暫加熱(≯37℃),攪溶溶解，濾紙過(guò)濾，加水定容至1000ml。4.9終止液分析天平，純水儀，制冰機(jī)，臺(tái)式低溫冷凍離心機(jī)，移液器，PCR儀，凝膠成像系統(tǒng)，電Hpms1-139、CA514621、CA515055、BM59622、BM619394℃預(yù)變性5min；94℃變性45s，55℃-60將制好的凝膠板插入電泳槽，設(shè)45℃,額定功率70W-75W，先預(yù)電泳30min，然后將檢測(cè)樣品加入槽內(nèi)，設(shè)50℃,在額定功率75W-80W下，電泳1-2個(gè)小時(shí)，當(dāng)指示劑二甲苯青距離玻璃板底部約1將凝膠浸入固定液，輕搖20min，取出用ddH2O清洗2次；再將凝膠放入用ddH2O清洗2次；緊接著將凝膠放入顯影液中，輕搖至DNA條帶清晰出現(xiàn)為止，將出現(xiàn)清晰條帶膠板轉(zhuǎn)4用分子標(biāo)記差異值≥2作為品種（或品系、自交系）的特異性判定標(biāo)準(zhǔn)，亦即如果兩個(gè)品種（511213242526273839344R：AAGACATGAAATCCACA445566R:CCAACCACCATGGTTC78AACCAGCAATCCCATGAAA8R：AAACTGTCATATATTTG88889R：AACTTTAAGACTCAAAATC99G:TCCTTAACCTTACGAAAGGAAACTAAACACACTT

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