第三章-蛋白質(zhì)化學(xué)

第三章

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能

Structureandfunctionof

Protein第一節(jié)蛋白質(zhì)的分子組成第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)第三節(jié)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)第五節(jié)蛋白質(zhì)分離與純化的基本原理一、什么是蛋白質(zhì)？蛋白質(zhì)(protein)是由許多氨基酸（aminoacid)通過肽鍵相連形成的高分子含氮化合物。二、蛋白質(zhì)的生物學(xué)重要性1.蛋白質(zhì)是構(gòu)成生物體的基本成分占人體干重45%，細(xì)胞70%2.不同的蛋白質(zhì)具有不同的氨基酸組成，因此也具有不同的理化特性。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上的多樣性決定了其功能上的多樣性。蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)起著催化、運(yùn)輸、運(yùn)動(dòng)、防御、調(diào)節(jié)等多種生物功能

類別功能實(shí)例酶蛋白催化細(xì)胞內(nèi)幾乎所有的化學(xué)反應(yīng)，控制生物有新陳代謝淀粉酶運(yùn)輸?shù)鞍仔》肿雍碗x子的細(xì)胞間以及細(xì)胞器間的轉(zhuǎn)運(yùn)血紅蛋白運(yùn)動(dòng)蛋白生物機(jī)體的組織、器官或整體的運(yùn)動(dòng)肌動(dòng)蛋白激素蛋白調(diào)節(jié)有機(jī)體的各種新陳代謝活動(dòng)生長激素貯藏蛋白貯藏營養(yǎng)大豆球蛋白防御蛋白防御致病性微生物或病毒的侵入免疫球蛋白結(jié)構(gòu)蛋白某些細(xì)胞組織中的構(gòu)成成分角蛋白受體蛋白接受和傳遞調(diào)節(jié)信息鈣調(diào)蛋白毒性蛋白侵入動(dòng)物體能引起中毒癥狀甚至死亡蛇毒、抗原蛋白質(zhì)的功能

第一節(jié)蛋白質(zhì)的分子組成一、蛋白質(zhì)的元素組成1、主要元素：碳（50%—55%）、氫（6%—8%）、氧（19%—24%）、氮（13%—19%）；次要元素：硫、磷、鐵、錳、鋅、碘。2、蛋白質(zhì)元素組成的特點(diǎn)基于：各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近：平均為16%；體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主。則可通過測(cè)N→測(cè)Pr。即每克樣品蛋白質(zhì)的含量=每克樣品的含氮量×6.25二、組成蛋白質(zhì)的基本單位——氨基酸(aminoacids)1、氨基酸（AA）的通式

H

RCCOOHα-氨基和α-羧基

NH22、特點(diǎn)：（1）20種基本氨基酸中，除脯氨酸為亞氨基酸外，其余19種均符合通式；（2）除甘氨酸的R基為H外，其余19種α-碳原子為不對(duì)稱碳原子，有L、D型之分，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸均為L型；（3）不同氨基酸的側(cè)鏈基團(tuán)不同。丙氨酸(Ala)纈氨酸(Val)亮氨酸(Leu)異亮氨酸(Ile)苯丙氨酸(Phe)蛋氨酸(Met)色氨酸(Trp)脯氨酸(Pro)甘氨酸(Gly)絲氨酸(Ser)蘇氨酸(Thr)天冬酰胺(Asn)谷氨酰胺(Gln)酪氨酸(Tyr)半胱氨酸(Cys)天冬氨酸(Asp)谷氨酸(Glu)組氨酸(His)賴氨酸(Lys)精氨酸(Arg)3、氨基酸的分類（根據(jù)側(cè)鏈基團(tuán)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同）（1）非極性疏水性AA：R為疏水基團(tuán)，無極性。

Ala、Val、Leu、Ile、Met、Phe、Pro、Trp8種（2）極性中性AA：R不帶電荷，但顯極性。

Gly、Ser、Thr、Tyr、Cys、

Asn、Gln7種（3）酸性AA：R可電離帶負(fù)電荷，有極性。

Glu、Asp2種（4）堿性AA：R可電離帶正電荷，有極性。

Lys、Arg、His3種另，1996年發(fā)現(xiàn)了第21種氨基酸：硒半胱氨酸（selenocysteine）；

2002年發(fā)現(xiàn)了第22種氨基酸：吡咯賴氨酸（pyrrolysine)

。4.蛋白質(zhì)中少見的氨基酸羥脯氨酸、羥賴氨酸、四碘鉀腺原氨酸（甲狀腺素、T4）胱氨酸-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO--OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3半胱氨酸

+胱氨酸二硫鍵-HHHS-CH2-CH-COO-HS-CH2-CH-COO-+NH35.非蛋白質(zhì)氨基酸β-丙氨酸、D-苯丙氨酸、同型半胱氨酸、鳥氨酸、г-氨基丁酸三、氨基酸的性質(zhì)1、兩性電離性質(zhì)pH=pI

凈電荷=0

pH<

pI凈電荷為正pH>pI凈電荷為負(fù)CHRCOOHNH3+CHRCOONH2CHRCOONH3++H++

OH-+H++

OH-(pK′1)(pK′2)

當(dāng)氨基酸溶液在某一pH值時(shí)，其所帶正負(fù)電荷相等，成為兩性離子，在電場(chǎng)中既不向陽極也不向陰極移動(dòng)，此時(shí)溶液的pH值就稱為該氨基酸的等電點(diǎn)(isoelectricpoint)。等電點(diǎn)——使某種氨基酸所帶正、負(fù)電荷數(shù)相等時(shí)溶液的pH值。

甘氨酸

[Gly

+][Gly

±][Gly

-]

根據(jù)等電點(diǎn)的定義，在等電點(diǎn)時(shí)，氨基酸所帶的正負(fù)電荷相等，即：[Gly+]=[Gly-]因此有：方程兩邊取負(fù)對(duì)數(shù)，則得pI表示等電點(diǎn)時(shí)的pH，-lgK=pK，則查表得甘氨酸的pK1=2.34，pK2=9.60，即得甘氨酸的等電點(diǎn)pI=1/2（2.34+9.60）=5.97二羧基一氨基的谷氨酸等電點(diǎn)在等電狀態(tài)下（Glu

±），Glu

2-含量甚微，故不考慮。此時(shí)Glu的等電點(diǎn)為：==3.22pI=在等電狀態(tài)下，Lys2+含量很少，故不考慮。此時(shí)Lys的等電點(diǎn)為：二氨基一羧基的賴氨酸的解離平衡為：2、紫外吸收特性

A280nm

3、茚三酮反應(yīng)：可做氨基酸的定性、定量測(cè)定。氨基酸的α-氨基最特殊并且廣泛應(yīng)用的是與茚三酮的反應(yīng)。茚三酮在弱酸性溶液中與α-氨基酸共同加熱，引起氨基酸氧化脫氨、脫羧反應(yīng)，最后茚三酮與反應(yīng)產(chǎn)物——氨和還原茚三酮（hydrindantin）發(fā)生作用，生成藍(lán)紫色產(chǎn)物。水合茚三酮還原茚三酮還原茚三酮水合茚三酮紫色物質(zhì)（ruhemann紫）桑格反應(yīng)（Sangerreaction）桑格（Sanger）用2，4-二硝基氟苯（簡稱DNFB或FDNB）試劑測(cè)定氨基酸及肽中的游離氨基酸，在弱堿性溶液中，DNFB將α-氨基酸轉(zhuǎn)變成黃色的2，4-二硝基苯衍生物，簡稱DNP-氨基酸。在此氨基酸中α-氨基的一個(gè)H為2，4-二硝基苯基所取代。此反應(yīng)對(duì)鑒定多肽鏈的氨基末端的氨基酸特別有用。FDNB也與賴氨酸的ε-氨基反應(yīng)，但這個(gè)衍生物用層析法容易與α-氨基的DNP衍生物區(qū)別開。異硫氰酸苯酯反應(yīng)也稱為艾德曼反應(yīng)（Edmanreaction），艾德曼反應(yīng)是測(cè)定α-氨基的最有用的反應(yīng)。用苯異硫氰酸（phenylisocyanate）與α-氨基酸定量反應(yīng)，即生成苯氨基硫甲酰氨基酸衍生物，然后在硝基甲烷溶液中用甲酸處理，苯氨基硫甲酰氨基酸即裂解生成苯乙內(nèi)酰硫脲（phenylthiohydantoin，PTH）衍生物。這個(gè)反應(yīng)也稱艾德曼反應(yīng)（Edmandegradation）。這些衍生物無顏色，但容易用層析法分離后顯色后鑒定。艾德曼反應(yīng)廣泛用于鑒定多肽鏈中的N-末端氨基酸。在測(cè)定多肽鏈的氨基酸順序上，艾德曼反應(yīng)占有重要地位。第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)一、多肽的結(jié)構(gòu)1、肽鍵與肽肽鍵(peptidebond)：由一個(gè)AA的а-氨基與另一個(gè)氨酸的

а-羧基脫水縮合生成的化學(xué)鍵。肽peptide：AA通過肽鍵相連形成的化合物(二肽、三肽、寡肽和多肽)。寡肽oligopeptide

：

一般10肽以下多肽polypeptide：

一般10肽以上多肽鏈：由許多氨基酸借肽鍵相互連接而成的一種結(jié)構(gòu)。氨基酸殘基：多肽鏈中的氨基酸，由于參與肽鍵的形成，已非原來完整的分子，稱為——。多肽鏈有兩端：

N末端、C末端天然存在的活性肽類別：激素、抗菌素、輔助因子

實(shí)例：谷胱甘肽(glutathione)

短桿菌肽

促甲狀腺素釋放因子（TRH）

-天冬氨酰-苯丙氨酸甲酯（甜味劑）谷胱甘肽

谷胱甘肽在體內(nèi)參與氧化還原過程，作為某些氧化還原酶的輔因子，或保護(hù)巰基酶，或防止過氧化物積累。短桿菌肽S促甲狀腺素釋放因子（TRH）蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)

蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)高級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)（空間構(gòu)象）

由一條肽鏈形成的蛋白質(zhì)只有一、二、三級(jí)結(jié)構(gòu)，由二條或二條以上多肽鏈形成的蛋白質(zhì)才可能有四級(jí)結(jié)構(gòu)。二、蛋白質(zhì)分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)1、一級(jí)結(jié)構(gòu)(primarystructure)：指蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸的組成及排列順序。2、一級(jí)結(jié)構(gòu)維系鍵：肽鍵和二硫鍵。3、重要性：是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。三、蛋白質(zhì)分子的空間構(gòu)象(conformation)

蛋白質(zhì)的構(gòu)象指蛋白質(zhì)分子中原子和基團(tuán)在三維空間上的排列、分布及肽鏈的走向。蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象可分為二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu)。維持蛋白質(zhì)構(gòu)象的化學(xué)鍵：次級(jí)鍵（副鍵），由蛋白質(zhì)分子的主鏈和側(cè)鏈上的極性、非極性和離子基團(tuán)等相互作用而形成的。

如：氫鍵、疏水鍵、離子鍵、范德華力、二硫鍵、配位鍵。氫鍵(HydrogenBond)：一個(gè)已和負(fù)電性較強(qiáng)的原子共價(jià)結(jié)合的氫原子與一個(gè)負(fù)電性較強(qiáng)的原子之間產(chǎn)生的靜電引力。（一）蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)(secondarystructure)1.概念：蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對(duì)空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象。主鏈與側(cè)鏈由肽鍵和α-碳原子構(gòu)成的多肽鏈骨架稱為主鏈，伸展在外的R基團(tuán)稱為側(cè)鏈。2.主要形式：α-螺旋,β-折疊，β-轉(zhuǎn)角，無規(guī)則卷曲。主要維系鍵：氫鍵α-螺旋(α-helix)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：①右手螺旋：3.6AA/圈，螺距0.54nm。②氫鍵維系（形成于每個(gè)肽鍵的N-H和第四個(gè)肽鍵的羰基氧之間）。③側(cè)鏈伸向螺旋外側(cè)。④側(cè)鏈基團(tuán)影響螺旋的形成和穩(wěn)定。

(帶同種電荷，側(cè)鏈大的R基或Pro存在均妨礙α-螺旋形成)β-折疊

β－轉(zhuǎn)角（β-turn）

特征：多肽鏈中氨基酸殘基n的羰基上的氧與殘基（n+3）的氮原上的氫之間形成氫鍵，肽鍵回折1800。無規(guī)則卷曲示意圖無規(guī)則卷曲細(xì)胞色素C的三級(jí)結(jié)構(gòu)模體(motif)/超二級(jí)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)分子中α-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角等組合在一起，彼此相互作用，形成有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合體，作為三級(jí)結(jié)構(gòu)的單元，其基本結(jié)合形式有:αα,βββ,βαβ。結(jié)構(gòu)域(structuraldomain)：分子量大的蛋白質(zhì),多肽鏈往往以超二級(jí)結(jié)構(gòu)為單元組成兩個(gè)或兩個(gè)以上相對(duì)獨(dú)立的區(qū)域，再形成三級(jí)結(jié)構(gòu)，這些相對(duì)獨(dú)立的區(qū)域稱為結(jié)構(gòu)域。（二）蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)(tertiarystructure)1.概念:整條肽鏈中所有原子或基團(tuán)的空間排布稱為蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)，即多肽鏈中全部氨基酸殘基的相對(duì)空間位置。2.維系鍵:疏水作用、離子鍵、氫鍵、VanderWaals力等次級(jí)鍵。三級(jí)結(jié)構(gòu)的特征：

含多種二級(jí)結(jié)構(gòu)單元；

有明顯的折疊層次；

是緊密的球狀或橢球狀實(shí)體；

分子表面有一空穴(活性部位)；

疏水側(cè)鏈埋藏在分子內(nèi)部，親水側(cè)鏈暴露在分子表面。3.三級(jí)結(jié)構(gòu)的重要性：三級(jí)結(jié)構(gòu)形成后，蛋白質(zhì)分子才形成固有的分子形狀；才具有親水膠體的特性；功能蛋白質(zhì)的活性部位得以形成并表現(xiàn)出相應(yīng)的生物學(xué)活性。核糖核酸酶三級(jí)結(jié)構(gòu)示意圖N

His12CHis119Lys41

(三）蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)(quarternarystructure)1.概念:蛋白質(zhì)分子中各個(gè)亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用,稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)分子中每條具獨(dú)立三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈稱為亞基(subunit).2.維系鍵:疏水鍵、氫鍵、離子鍵等次級(jí)鍵。Hemoglobin思考：四級(jí)結(jié)構(gòu)中的亞基與結(jié)構(gòu)域有何不同？一、根據(jù)分子形狀分類：球狀蛋白：長短軸之比<10纖維狀蛋白：長短軸之比>10二、根據(jù)組成分類：單純蛋白結(jié)合蛋白：單純蛋白質(zhì)+輔基或非蛋白質(zhì)部分三、根據(jù)生物學(xué)功能分類四、根據(jù)溶解度分類：可溶性蛋白；醇溶性蛋白；不溶性蛋白蛋白質(zhì)的分類第三節(jié)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系一、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系

一級(jí)結(jié)構(gòu)→空間構(gòu)象→功能1.一級(jí)結(jié)構(gòu)中“關(guān)鍵”部分相同,其功能相同。如：不同動(dòng)物來源的胰島素一級(jí)結(jié)構(gòu)中“關(guān)鍵”部分變化,其活性也改變。Insulinofhuman2.一級(jí)結(jié)構(gòu)不同，生物學(xué)功能各異。如：催產(chǎn)素與抗利尿激素

SS加壓素H2N半胱酪苯丙谷胺天胺半胱脯精甘催產(chǎn)素H2N…………異亮………亮……………383.一級(jí)結(jié)構(gòu)變化與疾病的產(chǎn)生分子病如：鐮刀狀紅細(xì)胞性貧血

Hb：6位Glu→Val二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系⒈蛋白質(zhì)前體的活化另外，蛋白質(zhì)僅構(gòu)象發(fā)生改變,其功能活性也隨之改變。

核糖核酸酶

2.蛋白質(zhì)的變構(gòu)現(xiàn)象(allostericeffect):指一個(gè)蛋白質(zhì)與其配體(或其它蛋白)結(jié)合后,引起蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變,并伴隨其活性發(fā)生改變。協(xié)同效應(yīng):一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后,能影響此寡聚體中另一亞基與配體的結(jié)合。如:Hemoglobin與Myoglobin第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)一、兩性解離和等電點(diǎn)蛋白質(zhì)兩末端的氨基和羧基及側(cè)鏈中某些基團(tuán)在一定條件下均可解離.1.蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI):使某一蛋白質(zhì)分子所帶正負(fù)電荷數(shù)相等,凈電荷為零時(shí)溶液的PH值。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)沉淀、離子交換和電泳等基本原理均以蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點(diǎn)的特性為基礎(chǔ)。電泳:帶電粒子在電場(chǎng)中向電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象，可用于分離、鑒定蛋白質(zhì)。二、高分子性質(zhì)，即膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)為分子量1萬至100萬的高分子物質(zhì),其在溶液中形成的質(zhì)點(diǎn)直徑在1-100nm膠體質(zhì)點(diǎn)范圍內(nèi)。蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素:蛋白質(zhì)顆粒表面具水化層

蛋白質(zhì)顆粒表面帶同性電荷去除這兩個(gè)穩(wěn)定因素,蛋白質(zhì)極易沉淀。蛋白質(zhì)具有分子擴(kuò)散現(xiàn)象；布朗運(yùn)動(dòng)；可用超速離心法分離蛋白質(zhì)；有較大的粘度，隨蛋白質(zhì)分子的水合作用和分子的不對(duì)稱性增大而增大；不能透過半透膜，可用透析法純化蛋白。三.蛋白質(zhì)的沉淀1.概念：蛋白質(zhì)分子聚集而從溶液中析出的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的沉淀。2.常用的沉淀方法（1）鹽析法：(NH4)2SO4、NaCl、Na2SO4低鹽濃度可使蛋白質(zhì)溶解度增加，稱為鹽溶作用。高鹽濃度因破壞蛋白質(zhì)的水化層并中和其電荷，促使蛋白質(zhì)顆粒相互聚集而沉淀，稱為鹽析作用。采用不同鹽濃度可將蛋白質(zhì)分別沉淀，稱分級(jí)沉淀；并不易發(fā)生變性。（2）有機(jī)溶劑沉淀：乙醇、甲醇、丙酮等（3）某些酸類沉淀：PH<PI時(shí)，苦味酸、鎢酸、三氯乙酸（4）重金屬鹽沉淀：PH>PI時(shí)，Pb2+，Hg2+，Ag+，Cu2+（5）加熱凝固：變性沉淀，偏酸或偏堿不易。蛋白質(zhì)的凝固作用：蛋白質(zhì)經(jīng)加熱變成較堅(jiān)固的凝塊，不易再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中，稱為蛋白質(zhì)的凝固作用。四.蛋白質(zhì)的變性(denaturation)1.概念：在某些理化因素的作用下，蛋白質(zhì)特定的空間構(gòu)象發(fā)生改變或破壞，從而導(dǎo)致其生物學(xué)活性的喪失和一些理化性質(zhì)的改變的現(xiàn)象，稱為蛋白質(zhì)的變性。2.變性因素：理：加熱、高壓、紫外線、超聲波、劇烈震蕩等化：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子、尿素、乙醇、丙酮等3.變性的本質(zhì)：蛋白質(zhì)分子空間構(gòu)象的改變或破壞（二硫鍵和非共價(jià)鍵破壞），不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)改變或肽鍵的斷裂。4.變性作用的特征：生物活性喪失；某些理化性質(zhì)改變（溶解度降低，粘度增加，結(jié)晶能力消失，易被蛋白酶水解。）5.變性作用的應(yīng)用舉例：變性因素應(yīng)用于消毒及滅菌，制備、保存蛋白質(zhì)制劑需防止變性。6.復(fù)性：去除變性因素后，有些變性程度較輕的蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能。許多蛋白質(zhì)的變性為不可逆變性。變性的蛋白質(zhì)易于沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)不一定發(fā)生變性。五.蛋白質(zhì)顏色反應(yīng)（可做定性或定量測(cè)定）1.茚三酮反應(yīng)2.雙縮脲反應(yīng)氨基酸無此反應(yīng)3.酚試劑反應(yīng)六.蛋白質(zhì)的紫外吸收

A280nm第五節(jié)蛋白質(zhì)的分離與純化的基本原理㈠根據(jù)溶解度不同的分離純化方法鹽析、有機(jī)溶劑沉淀、等電點(diǎn)沉淀㈡根據(jù)分子大小不同的分離純化方法透析、超濾、凝膠層析、離心㈢根據(jù)電離性質(zhì)不同的分離純化方法電泳、離子交換層析㈣根據(jù)配體不同的分離純化方法親和層析透析及超濾法*透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。*超濾法

應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀*使用丙酮沉淀時(shí)，必須在0～4℃低溫下進(jìn)行，丙酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積。蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后，應(yīng)立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。

*鹽析(saltprecipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。*

免疫沉淀法：將某一純化蛋白質(zhì)免疫動(dòng)物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識(shí)別相應(yīng)的抗原蛋白，并形成抗原抗體復(fù)合物的性質(zhì)，可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白。電泳(elctrophoresis)

蛋白質(zhì)在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒，在電場(chǎng)中能向正極或負(fù)極移動(dòng)。這種通過蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù),稱為電泳。根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。

幾種重要的蛋白質(zhì)電泳:*聚丙烯酰胺凝膠電泳