DB14∕T 1515-2017 食用百合脫毒試管苗繁育技術(shù)規(guī)程

DB14山西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 2 2 2 3 3 4 41食用百合脫毒試管苗繁育技術(shù)規(guī)程操作、脫毒母株的獲取、脫毒試管苗鱗莖的誘導(dǎo)和增殖、脫毒試凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適LMoV（百合斑駁病毒）病毒的，在封閉容器內(nèi)繁殖的種24生產(chǎn)設(shè)施和儀器設(shè)備4.1生產(chǎn)設(shè)施4.2主要儀器設(shè)備超凈工作臺、壓力蒸汽滅菌鍋、鼓風(fēng)干燥箱、光照培養(yǎng)箱、人工氣候箱、冰箱解剖鏡）、空調(diào)、照度計(jì)、自動(dòng)控時(shí)器、溫濕度計(jì)、酶標(biāo)儀、高速冷凍離心機(jī)、電泳儀、電泳槽、PCR儀、微量移液器、電子天平、pH計(jì)、磁力攪拌器、電冰箱、移液槍、各種培養(yǎng)容器等。5培養(yǎng)基5.2植物生長調(diào)節(jié)劑母液的配制植物生長調(diào)節(jié)劑配制成濃度為0.5mg/mL～1mg/mL的母液。配制時(shí)，先用1mL～2mL95%乙醇溶解5.3培養(yǎng)基的制備分別加入不同濃度需用量的各種激素，定容后加入糖和瓊脂，放入蒸煮鍋內(nèi)煮開，用0.1mol/L的HCl鍋中進(jìn)行滅菌。滅菌時(shí)工作壓力穩(wěn)定在1.1kg/cm2（0.105MPa），溫度為121℃,滅菌時(shí)間20min。接種前，提前30min開啟無菌室室內(nèi)和超凈工作臺紫外燈照員方可進(jìn)入室內(nèi)操作。室內(nèi)若有浮塵，可用75%3選擇外觀無病毒癥狀的植株，以其飽滿、無病蟲害、無損傷的健康鱗莖為脫毒培養(yǎng)材料，取中心菌水沖洗4～5次，再用無菌濾紙吸去表面水分，置于無菌培養(yǎng)將滅過菌的鱗莖置于40倍體式顯微鏡（雙筒顯微鏡）下，用解剖針由mg/L+3%蔗糖培養(yǎng)基中，封口后，在培養(yǎng)瓶壁上標(biāo)注編號、接種日期等。的檢測，按照NY/T1744-200成分為1/2MS基本培養(yǎng)基，附加NAA0.5mg/L～1.0mg/L，蔗糖濃430～40d后分化出小鱗莖。培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度（25±2）℃,光照強(qiáng)度2000Lx～3000Lx，光照時(shí)間將誘導(dǎo)產(chǎn)生的試管鱗莖接種于MS+6-BA0.2mg/L～1.0mg/L+NAA0.1mg/L～0.5mg/L+6%～10%蔗糖培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)小鱗莖增殖。培養(yǎng)30～40d后，再轉(zhuǎn)接于MS+ZT1.0mg～3.0mg/L+IBA0.5mg~9脫毒試管鱗莖生根9.1試管鱗莖生根將增殖培養(yǎng)獲得的脫毒鱗莖接種于1/2MS+NAA0.1mg～0.5mg/L+6%～10%蔗糖培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)鱗莖生根。培養(yǎng)條件為溫度（22±2）℃,光照強(qiáng)度2000Lx～3000Lx，光照時(shí)間14h～16h/d。9.2試管鱗莖出瓶標(biāo)準(zhǔn)9.3病毒檢測移栽基質(zhì)用蛭石、沙、土1：2：3比例混合均勻，或用腐葉土、蛭石1：1比例混合基