畜肉中龍膽紫含量的測定-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MSMS）法

2畜肉中龍膽紫含量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法本文件描述了畜肉品中龍膽紫及其代謝物隱性龍膽紫液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法的原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、試驗步驟、試驗數(shù)據(jù)處理、回收率、精密度本文件方法檢出限為0.5μg/kg，方法定量GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格試樣中的龍膽紫及其代謝物隱性龍膽紫用乙腈（1%甲酸）提取，混合陽離子固相柱凈化，液相色）：）：5.72%甲酸-水溶液：取甲酸（5.35.9乙酸銨溶液（5mmol/L，pH7.0取乙酸銨（5.5）0.385g5.11乙酸銨-乙腈溶液：取乙酸銨溶液（5.9）100mL5.120.1%甲酸-乙酸銨溶液：取甲酸（5.335.15混合標準中間工作溶液：分別準確稱取適量標準物質(zhì)（5.13精確至0.1mg用乙腈（5.2））；）；0℃~4℃以下避光保存，有效期1個月）。）；）；ng/mL的混合內(nèi)標標準工作液（于0℃~4℃以下避光保存，有效期1個月）。5.19濾膜：孔徑為0.22μm的聚四氟乙烯濾200μL，混合15s，加入兩粒陶瓷均質(zhì)子，在振蕩器振蕩5min，使試樣均勻分散于乙腈中；用超聲超聲10min，于5000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至25mL的比色管中；再向離心管加入11mL乙腈上清液合并至上述比色管中，用乙腈（5.2）定容至25.0mL，搖勻，作為備用445℃氮氣吹至近干后，用乙酸銨-乙腈溶液（5.11）定容至2.0mL，渦旋混勻，過濾膜后重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。a）色譜柱：C18柱，2.7μm，100mm×2.1mm（內(nèi)徑），或相當者；b）流動相：0.1%甲酸-乙腈（5.2）溶液和5mmol/L的乙酸銨（0.1%甲酸）水溶液（5.12），梯度0）；h）監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRMj）母離子、子離子、錐孔電壓及碰撞電壓見表2。母離子m/z子離子m/z5100和1000μL混合系列標準工作溶液（5.15），加入40μL混合內(nèi)標工作液（5.16），和50μg/L的系列基質(zhì)匹配標準工作溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用），按照液相色譜和質(zhì)譜參考工作條件（7.3.1和7.3.2）進行測定，以定量離子色譜峰的峰面積為縱坐標，與其對應(yīng)的溶液濃度為橫坐標作圖按液相色譜和質(zhì)譜參考工作條件（7.3.1和7.3.2）測定7.2得到的試樣溶液，如果出色譜之內(nèi)，超出線性范圍的試樣溶液可用乙酸銨-AAiA'isCsCisV1VX=（1）AisAsC'isV2m X—試樣中龍膽紫和隱性龍膽紫的殘留量，單位為微克每千克(μg/kgAi—試樣溶液中龍膽紫和隱性龍膽紫的峰面積；Ais—試樣溶液中龍膽紫和隱性龍膽紫內(nèi)標的峰面積；As—基質(zhì)匹配標準溶液中龍膽紫和隱性龍膽紫的峰面積；A'is—基質(zhì)匹配標準溶液中龍膽紫和隱性龍膽紫內(nèi)標的峰面積；Cis—試樣溶液中龍膽紫和隱性龍膽紫內(nèi)標濃度，單位為微克每升(μg/LCs—基質(zhì)匹配標準溶液中龍膽紫和隱性龍膽紫濃度，單位為微克每升(μg/L）；C'is—基質(zhì)匹配標準溶液中龍膽紫和隱性龍膽紫內(nèi)標濃度，單位為微克每升(μg/L）；6V—上機前定容的體積，單位為毫升（mLV1—備用液定容體積，單位為毫升（mL）；V2—過柱備用液的體積，單位為毫升（mLm—試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；計算結(jié)果扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。本方法的批內(nèi)相對標準偏差≤15%，批間相對標準偏差≤20%。7龍膽紫、隱性龍膽紫和內(nèi)標物的英文名稱、分子式、CAS