DB32T 3356-2018 南京椴組培育苗技術(shù)規(guī)程

65.020.4065.020.40B61B61備案號：58093-2018DB32ICSICSTechnicalTechnicalregulationforpropagationofTiliamiqueliana江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局IDB32/T3356—2018本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省中國科學(xué)院植物研究所提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省中國科學(xué)院植物研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：湯詩杰、束曉春、李乃偉、王歡利、王仲偉。1DB32/T3356—2018南京椴組培育苗技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了南京椴組織培養(yǎng)技術(shù)中外植體選擇與處理、腋芽誘導(dǎo)、繼代增殖、生根培養(yǎng)、煉苗、移栽和移栽后管理的技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于南京椴的組織培養(yǎng)快速繁殖。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB6001育苗技術(shù)規(guī)程3外植體選擇與處理3.1外植體母株選擇選擇生長健壯且無病蟲害的母株。宜選擇1年生苗齡的實(shí)生容器苗，不宜選擇其他苗齡，忌用地栽3.2外植體母株管理于3月份，將腋芽尚未萌發(fā)的南京椴容器苗，移至玻璃溫室培養(yǎng)。使用培養(yǎng)架將容器苗底部隔離地面50cm。每隔10d，噴灑多菌靈1次，使用40%多菌靈可濕性粉劑500～800倍液。切忌將容器苗地表放置，以免根系扎入帶菌土壤中生長。3.3外植體選擇外植體母株枝條未木質(zhì)化之前，剪下枝條，去除葉片，保留1cm長葉柄，作為外植體。主干基部保留3-4個飽滿的腋芽。在8月初、9月初與10月初，可重復(fù)3次外植體取樣。3.4外植體消毒先用毛刷對枝條表面刷洗，并通過清水沖洗干凈。再用84消毒液（稀釋50倍在搖床上振蕩消毒15min-20min，并通過流水沖洗20min-30min。于無菌操作臺上，用75％乙醇消毒50s-60s，然后立即倒入0.1％的升汞消毒10min，最后無菌水洗滌4次，每次振蕩3min-5min。3.5外植體分段將消毒后的枝條，切割成0.6cm長的莖段，每段帶1個腋芽。4腋芽誘導(dǎo)2DB32/T3356—2018將莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行初代誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為25℃,首先在黑暗中培養(yǎng)24小時，然后光照培養(yǎng)20d：光照時間為10-16小時/天，光照強(qiáng)度為2000lx，所述初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基，添加的激素水平為：6-BA0.2mg/L+KT0.1mg/L+IBA0.04mg/L+GA30.2mg/L，誘導(dǎo)培養(yǎng)基PH為5.8。5繼代增殖初代培養(yǎng)20d后，將10cm高的初代苗切割為1cm莖段，每莖段帶1腋芽，切除葉片，接入繼代增殖培養(yǎng)基，進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，繼代培養(yǎng)20d，培養(yǎng)溫度為25℃,光照時間為10-16小時/天，光照強(qiáng)度為2000lx，繼代增殖培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基，并添加反式玉米素0.2mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.1mg/L，培養(yǎng)基PH為5.8。6生根培養(yǎng)繼代培養(yǎng)40d后，南京椴無根試管苗進(jìn)行切分，每株均有2個不定芽，接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)20d，培養(yǎng)溫度為25℃,光照時間為10-16小時/天，光照強(qiáng)度為2000Lx，生根培養(yǎng)基1/2MS培養(yǎng)基，并添加IBA3.0mg/L+NAA1.0mg/L，培養(yǎng)基PH為5.8。7煉苗培養(yǎng)當(dāng)生根苗的不定根長至4cm左右，生根數(shù)在4-8根時，將組培瓶從培養(yǎng)室取出，不打開瓶蓋，在溫室或蔭棚馴化3d，環(huán)境遮光度為60%。馴化后打開瓶蓋，繼續(xù)馴化2d后從瓶中取出組培苗，洗凈根部培養(yǎng)基后用40%多菌靈可濕性粉劑（500～800）倍液浸泡20min。8移栽8.1栽培基質(zhì)選擇基質(zhì)成分為重量比1:3:2的黃心土、珍珠巖和草炭土。8.2栽培容器選擇采用50孔穴盤，圓形口、尖底的5cm×11cm穴盤。舊穴盤需消毒后才可使用。8.3移栽方法組培苗上方使用帶孔PVC膜覆蓋保濕，放在通風(fēng)陰涼處培養(yǎng)20d-30d，培養(yǎng)到第15d將PVC膜移除，換用折光率75%的遮陽網(wǎng)。9移栽后管理9.1光照管理初始光照強(qiáng)度宜在5000lx左右，15d后將光照提高至15000lx。9.2溫度管理移栽苗培養(yǎng)溫度為18℃~28℃,以25℃恒溫為最佳。3DB32/T3356—20189.3水分管理移栽苗初始培養(yǎng)濕度范圍為70％～85％，培養(yǎng)30d后，將濕度控制在50%～75％。9.4消毒與施肥管理每隔10d噴1次多菌靈1000倍液。每隔15d噴施可溶性完全肥料（N:P:K=3:1:1）1000倍液1次。4DB32/T3356—2018（規(guī)范性附錄）WPM培養(yǎng)基母液成分組成名稱成分含量（mg/L）①單位母液加入藥品（g）0.5L2.0L大量K2SO49909.9MgSO4?7H2O3703.7KH2PO4NH4NO34004.08微量MnSO4?4H2O22.52.259ZnSO4?7H2O8.60.86H3BO36.20.62CuSO4?5H2O0.250.025Na2MoO4?2H2O0.250.025鈣鹽Ca(NO3)2?4H2O55627.8鐵鹽②FeSO4?7H2O27.82.78Na2-EDTA37.33.73有機(jī)物肌醇2468甘氨酸2.00.2VB10.1VB60.50.05VB50.50.05注：①此處含量為最終WPM培養(yǎng)基中的含量。②先將Na2EDTA用去離子水溶解，加熱至沸騰2-3次，再用一個瓶子溶好鐵鹽，待Na2EDTA完全冷卻以后，再將5DB32/T