血清堿性磷酸酶活性測定

血清堿性磷酸酶活性測定演示文稿當前1頁，共14頁，星期一。第一頁，共十四頁。優(yōu)選血清堿性磷酸酶活性測定當前2頁，共14頁，星期一。第二頁，共十四頁。主要內容：⑴實驗目的⑵實驗原理⑶實驗器材與試劑⑷實驗操作⑸計算⑹臨床意義⑺注意事項當前3頁，共14頁，星期一。第三頁，共十四頁。

酶活力：也稱酶活性，是表示催化某一特定反應的能力?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特定化學速度表示。

酶催化反應速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。

底物減少量或生成物增加量酶促反應速度=

單位時間基本概念當前4頁，共14頁，星期一。第四頁，共十四頁。實驗目的掌握酶活力測定的一般方法掌握血清中ALP活力測定方法與臨床意義當前5頁，共14頁，星期一。第五頁，共十四頁。思考

如何測定酶活力的大??？

酶活力：酶催化某一化學反應的能力，其衡量的標準是酶促反應速度的大小。

酶促反應的速度：常用單位時間內底物的減少量或產物的生成量來表示。

當前6頁，共14頁，星期一。第六頁，共十四頁。酶活力測定方法終止測定法（或定時法）：

*本次實驗的方法

通常是酶作用一段時間后，加入強酸、強堿、蛋白沉淀劑等終止酶促反應，測定這段時間內底物的減少量或產物的生成量，計算酶促反應的平均速度。

連續(xù)監(jiān)測法：

連續(xù)監(jiān)測法是指每隔一定時間（2～60s），連續(xù)多次測定酶反應過程中某一反應產物或底物量隨時間變化的數據，求出酶反應初速度，間接計算酶活性濃度的方法。

適用于自動生化分析儀

目前已取代固定時間法而成為臨床實驗室測當前7頁，共14頁，星期一。第七頁，共十四頁。堿性磷酸酶（ALP）是一組在堿性環(huán)境中水解磷酸酯的酶類。來源：廣泛分布于人體的骨、腎、肝、腸、血清、膽汁等部位，但骨骼、牙齒、腎和肝臟中含量較多。正常人血清中ALP主要來源于肝臟。是一種能夠將對應底物去磷酸化的酶，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。而該脫去磷酸基團的過程稱為去磷酸化或脫磷酸化。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中有最大活力。什么是ALP？當前8頁，共14頁，星期一。第八頁，共十四頁。當前1頁，共14頁，星期一。鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定最后所顯色的作用。比較少見，主要見于呆小癥，重癥慢性腎炎、乳糜瀉、當前7頁，共14頁，星期一。當前9頁，共14頁，星期一。鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定最后所顯色的作用。酶催化反應速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。掌握血清中ALP活力測定方法與臨床意義混勻，37℃水浴保溫5min，同時將底物預熱此液應避光保存，如出現(xiàn)藍綠色即作廢。比較少見，主要見于呆小癥，重癥慢性腎炎、乳糜瀉、適用于自動生化分析儀當前11頁，共14頁，星期一。54g)，冷卻后加氯仿2ml防腐，在4℃冰箱保存。100（kings單位）當前5頁，共14頁，星期一。掌握血清中ALP活力測定方法與臨床意義18g(磷酸苯二鈉如含2分子結晶水，則應稱取2.當前12頁，共14頁，星期一。掌握酶活力測定的一般方法單位時間當前8頁，共14頁，星期一。成人：3~13Kings單位，兒童：5~28Kings單位。當前9頁，共14頁，星期一?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特定化學速度表示。36g，4-氨基安替比林1.在臨床上，血清ALP測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標。正常人血清中ALP主要來源于肝臟。5g，溶于800mL蒸餾水中，定容至1L。54g)，冷卻后加氯仿2ml防腐，在4℃冰箱保存。實驗原理堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，其顏色深淺與ALP活性成正比。磷酸苯二鈉+H2O

苯酚+磷酸氫二鈉苯酚+4-氨基安替比林

紅色醌亞胺衍生物ALPpH=10鐵氰化鉀當前9頁，共14頁，星期一。第九頁，共十四頁。試劑與儀器器材：

5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可調式移液器，721E分光光度計，1cm比色皿，37℃恒溫水浴試劑：

1．0.1mol/L碳酸鹽緩沖液(pH10.0)無水碳酸鈉6.36g，碳酸氫鈉3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于800mL蒸餾水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。

2．20mmol/L磷酸苯二鈉溶液先將500ml蒸餾水煮沸，迅速加入磷酸苯二鈉2.18g(磷酸苯二鈉如含2分子結晶水，則應稱取2.54g)，冷卻后加氯仿2ml防腐，在4℃冰箱保存。（用剩的溶液不應再倒回瓶中）

3．顯色液（鐵氰化鉀的硼酸溶液）稱取鐵氰化鉀2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸餾水400ml中，兩液混合后，加蒸餾水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出現(xiàn)藍綠色即棄去)。

4．酚標準工作液（0.05mg/ml）購買合格的二級標準品。當前10頁，共14頁，星期一。第十頁，共十四頁。實驗操作取4支試管，如下操作：立即混勻。用510nm波長（紅色醌物質的最大吸收波長）比色，以蒸餾水調零點，讀取各管吸光度。*保持反應時溫度是均衡的，37°C測定管標準管空白管對照管血清（ml）0.100——————酚標準液——0.100————蒸餾水————0.100——pH10碳酸鹽緩沖液1.001.001.001.00混勻，37℃水浴保溫5min，同時將底物預熱底物液1.001.001.001.00混勻，37℃水浴保護15min鐵氰化鉀溶液3.003.003.003.00血清———————0.100當前11頁，共14頁，星期一。第十一頁，共十四頁。計算公式:參考值:成人：3~13

Kings單位，兒童：5~28Kings單位。ALP活力=（A測定—A對照）（A標準—A空白）X0.05X100（kings單位）當前12頁，共14頁，星期一。第十二頁，共十四頁。此液應避光保存，如出現(xiàn)藍綠色即作廢。當前1頁，共14頁，星期一。4．酚標準工作液（0.取4支試管，如下操作：成人：3~13Kings單位，兒童：5~28Kings單位。正常人血清中ALP主要來源于肝臟。酶催化反應速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。混勻，37℃水浴保溫5min，同時將底物預熱可以用在一定條件下所催化的某一特定化學速度表示。18g(磷酸苯二鈉如含2分子結晶水，則應稱取2.鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定最后所顯色的作用。取4支試管，如下操作：掌握酶活力測定的一般方法（用剩的溶液不應再倒回瓶中）1mol/L碳酸鹽緩沖液(pH10.臨床意義在臨床上，血清ALP測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標。1.血清ALP活性升高

肝膽疾病：

阻塞性黃疸、急性或慢性黃疸性肝炎、肝癌等；骨骼疾?。河捎诠堑膿p傷或疾病使成骨細胞內所含高濃度的ALP釋放進入血液中，引起血清ALP活性增高，如纖維性骨炎、成骨不全癥、佝僂病、骨軟化病、骨轉移癌和骨折修復愈合期等。2.血清ALP活性降低:

比較少見，主要見于呆小癥，重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質等。當前13頁，共14頁，星期一。