臨床專用生化分析儀分析技術(shù)

臨床專用生化分析儀分析技術(shù)教學(xué)要求和目標(biāo)掌握各分析技術(shù)的基本原理和分析方法熟悉各分析技術(shù)儀的結(jié)構(gòu)組成特點(diǎn)，儀器的維護(hù)保養(yǎng)，質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用了解各分析技術(shù)儀的分類第一節(jié)濁度自動(dòng)化分析技術(shù)一、濁度分析的基本原理在一定條件下，可溶性抗原與抗體在液相中特異結(jié)合，形成有一定大小的抗原顆粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度當(dāng)光線通過(guò)介質(zhì)中的復(fù)合物顆粒時(shí)吸收、透射、散射和折射通過(guò)測(cè)量透射光或散射光信號(hào)強(qiáng)弱被測(cè)物的量。濁度分析方法的分類檢測(cè)器的位置及接收光信號(hào)的性質(zhì)分透射免疫濁度法（turbidimetryimmunoassay散射免疫濁度法（nephelometryimmunoassay測(cè)定方式分：終點(diǎn)濁度法與速率濁度法濁度形成原理分：沉淀反應(yīng)濁度法與膠乳凝集比濁（粒子增強(qiáng)免疫濁度法）終點(diǎn)散射濁度法檢測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)與起始點(diǎn)之間信號(hào)變化的方法速率散射濁度法速率是指在單位時(shí)間內(nèi)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)形成復(fù)合物的量。是在抗原與抗體反應(yīng)的最高峰測(cè)定其復(fù)合物形成的量，該峰值的高低與抗原的量成正比。粒子增強(qiáng)免疫濁度法選擇大小適中、均勻一致的膠乳顆粒吸附或交聯(lián)抗體；當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時(shí)，則發(fā)生聚集。單個(gè)膠乳顆粒在入射光波長(zhǎng)之內(nèi)，光線可透過(guò)。當(dāng)兩個(gè)或更多膠乳顆粒凝聚時(shí)，透過(guò)光減少，光減少的程度與膠乳凝集量成正比。靈敏感度較高。二、濁度分析儀的分類和基本結(jié)構(gòu)自動(dòng)生化分析儀散射濁度分析儀應(yīng)用較為普遍的有固定時(shí)間散射分析儀、速率散射分析儀和雙光路自動(dòng)免疫濁度分析儀自動(dòng)散射濁度分析儀的組成分析系統(tǒng)：用于加樣、稀釋、保溫和測(cè)試等。包括散射測(cè)濁儀、加液系統(tǒng)、試劑轉(zhuǎn)盤、樣品轉(zhuǎn)盤、卡片閱讀器等計(jì)算機(jī)系統(tǒng)：用于輸入病人數(shù)據(jù)、選擇程序菜單、計(jì)算參考曲線和儲(chǔ)存測(cè)試結(jié)果散射濁度分析儀光路示意圖?冷凍標(biāo)本β-脂蛋白可向陰極漂移；應(yīng)用較為普遍的有固定時(shí)間散射分析儀、速率散射分析儀和雙光路自動(dòng)免疫濁度分析儀散射免疫濁度法（nephelometryimmunoassay在一定條件下，原電池的電動(dòng)勢(shì)與被測(cè)離子活度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系。?對(duì)某些急診檢驗(yàn)項(xiàng)目特別異常的結(jié)果，應(yīng)及時(shí)與臨床聯(lián)系，以便緊急處置終點(diǎn)濁度法與速率濁度法?通常采用流動(dòng)式毛細(xì)管結(jié)構(gòu)，即在毛細(xì)管的側(cè)臂開多個(gè)小孔，孔里插入各種離子選擇性電極電壓越高，電場(chǎng)強(qiáng)度越大，遷移率越大，帶電粒子移動(dòng)越快?標(biāo)本量的要求盡可能做到嚴(yán)格和精確四、電解質(zhì)分析的質(zhì)量控制四、電解質(zhì)分析的質(zhì)量控制電源、電泳槽、電泳條帶分析裝備(或掃描儀)三部分的結(jié)構(gòu)分離，加樣、電泳、電泳后的染色和脫色等均需手工操作，人工設(shè)置參數(shù)完成電泳。分析系統(tǒng)：用于加樣、稀釋、保溫和測(cè)試等。②追加抗體，濁度繼續(xù)增大?大多數(shù)廠家的電泳載體是瓊脂糖凝膠，其保存期至少在半年以上。三、濁度分析儀的保養(yǎng)常規(guī)保養(yǎng)日保養(yǎng)①關(guān)機(jī)前沖洗管道，以防止管道阻塞②開機(jī)前應(yīng)檢查注射器，防止漏液③檢查D、B、A、W液面高度④光路校正周保養(yǎng)①更換流動(dòng)比色杯和小磁棒②清潔探針的外部③檢查蠕動(dòng)泵和鉗制閥控制著管路中液體的流動(dòng)情況月保養(yǎng)①更換注射器插桿頂端②空氣過(guò)濾網(wǎng)沖洗③疏通標(biāo)本和抗體探針的內(nèi)部半年保養(yǎng)①更換管道②機(jī)械潤(rùn)滑四、濁度分析的質(zhì)量控制（一）抗原過(guò)剩校正檢測(cè)方法：①連續(xù)監(jiān)測(cè)抗原抗體反應(yīng)曲線，呈現(xiàn)異常②追加抗體，濁度繼續(xù)增大③標(biāo)本兩種稀釋度測(cè)定，濃度高的濁度反而低（二）減少偽濁度偽濁度：除待測(cè)抗原抗體復(fù)合物產(chǎn)生的濁度外，其它可引起透射光或散射光變化的濁度都稱為偽濁度減少偽濁度的方法：?采用新鮮、合格標(biāo)本?保持比色杯和稀釋杯清潔?使用合格的抗體試劑?嚴(yán)格控制增濁劑的濃度（三）選擇合適的入射光波長(zhǎng)入射光波長(zhǎng)的選擇原則：除了抗原抗體免疫復(fù)合物外，反應(yīng)體系中的其他成分對(duì)入射光的干擾應(yīng)為最小，因?yàn)槠渌煞治樟瞬糠秩肷涔?，透射比濁法測(cè)定結(jié)果將使抗原濃度偏高，而散射比濁法測(cè)定將使抗原濃度偏低。手工操作、半自動(dòng)電泳、全自動(dòng)電泳、全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)是在抗原與抗體反應(yīng)的最高峰測(cè)定其復(fù)合物形成的量，該峰值的高低與抗原的量成正比。?標(biāo)本量的要求盡可能做到嚴(yán)格和精確除了抗原抗體免疫復(fù)合物外，反應(yīng)體系中的其他成分對(duì)入射光的干擾應(yīng)為最小，因?yàn)槠渌煞治樟瞬糠秩肷涔?，透射比濁法測(cè)定結(jié)果將使抗原濃度偏高，而散射比濁法測(cè)定將使抗原濃度偏低。重點(diǎn)是掃描系統(tǒng)的比色濾鏡及光源。電極系統(tǒng)的保養(yǎng)

定期更換電極膜和電極內(nèi)充液

定期進(jìn)行去蛋白清洗及電極的活化

液路系統(tǒng)的保養(yǎng)

保證液路無(wú)蛋白質(zhì)、脂類沉積和鹽類結(jié)晶

每天關(guān)機(jī)前均進(jìn)行管路的清洗

沖洗完畢重新定標(biāo)四、濁度分析的質(zhì)量控制透射免疫濁度法（turbidimetryimmunoassay三、電解質(zhì)分析儀的維護(hù)和保養(yǎng)臨床專用生化分析儀分析技術(shù)透射免疫濁度法（turbidimetryimmunoassay二、電泳儀的分類和基本結(jié)構(gòu)?用于將樣品、定標(biāo)液和稀釋液等吸取和輸送至電極管道中，并完成電極、管道沖洗與廢液排除④盡快送檢，勿劇烈振蕩，避日光照射；?血清鉀增高和血清鉀降低（四）儀器校正選擇合適的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)曲線的繪制校準(zhǔn)曲線的形狀取決于抗血清和促聚劑的濃度的選擇，也與免疫濁度法類型、校正方法及校準(zhǔn)品的質(zhì)量有關(guān)。多推薦5點(diǎn)或6點(diǎn)定標(biāo)。適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)方法進(jìn)行曲線擬合五、特定蛋白濁度分析的

臨床應(yīng)用

特定蛋白臨床常規(guī)項(xiàng)目免疫功能監(jiān)測(cè)免疫球蛋白：IgG、IgM、IgA、C3、C4臨床意義：IgG、IgA、IgM檢測(cè)有助于了解機(jī)體抗感染能力，有助于疾病的正確診斷和有效治療。在免疫復(fù)合物疾病中，C3、C4檢測(cè)可以了解其消耗程度。包括指示電極和參比電極溫度升高時(shí)，介質(zhì)黏度下降，分子運(yùn)動(dòng)加劇，引起自由擴(kuò)散加快、區(qū)帶變寬和分辨率下降如利尿劑促進(jìn)K+、Na+、Cl從尿中排出。電源、電泳槽、電泳條帶分析裝備(或掃描儀)三部分的結(jié)構(gòu)分離，加樣、電泳、電泳后的染色和脫色等均需手工操作，人工設(shè)置參數(shù)完成電泳。終點(diǎn)濁度法與速率濁度法如血清標(biāo)本加入／L的疊氮鈉，冷凍保存的穩(wěn)定性更好?鉀電極：纈氨霉素和聚氯乙烯（PVC）膜電極（二）ISE電位分析方法當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時(shí)，則發(fā)生聚集。離子選擇性電極（ionselectiveelectrodeelectrode，ISE）是一類用特殊敏感膜制成，對(duì)溶液中某種特定離子具有選擇性響應(yīng)的電化學(xué)傳感器。單個(gè)膠乳顆粒在入射光波長(zhǎng)之內(nèi)，光線可透過(guò)。應(yīng)用較為普遍的有固定時(shí)間散射分析儀、速率散射分析儀和雙光路自動(dòng)免疫濁度分析儀散射濁度分析儀光路示意圖?保持比色杯和稀釋杯清潔一、濁度分析的基本原理適應(yīng)癥：①免疫力低，反復(fù)感染病人；②自身免疫性疾??；②多發(fā)性骨髓瘤；④慢性肝??；⑤非何杰金氏淋巴瘤；⑥白血??；⑦良性單克隆免疫球蛋白??；⑧先天性或獲得性低免疫球蛋白血癥；⑨對(duì)白、球蛋白比例異常者的隨訪⑩術(shù)后感染、移植排斥反應(yīng)第二節(jié)電解質(zhì)自動(dòng)化分析技術(shù)一、電解質(zhì)分析的原理和方法離子選擇性電極（ionselectiveelectrodeelectrode，ISE）是一類用特殊敏感膜制成，對(duì)溶液中某種特定離子具有選擇性響應(yīng)的電化學(xué)傳感器。常用于測(cè)量離子的活度或濃度。ISE基本結(jié)構(gòu)通常由電極管、內(nèi)電極、電極內(nèi)充溶液和電極膜（或稱敏感膜）四個(gè)部分組成。電極電位產(chǎn)生基于膜材料與溶液界面發(fā)生的離子交換反應(yīng)當(dāng)電極置于溶液中時(shí)，由于離子交換和擴(kuò)散作用，改變了二相中原有的電荷分布，因而形成雙電層，其間產(chǎn)生一定的電位差即膜電位ISE的電位與溶液中特定離子活度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系，即符合Nernst方程一、濁度分析的基本原理透射免疫濁度法（turbidimetryimmunoassay重點(diǎn)是掃描系統(tǒng)的比色濾鏡及光源。?工作原理的不同分為：移動(dòng)界面電泳、區(qū)帶電泳、穩(wěn)態(tài)電泳或稱置換電泳?嚴(yán)格控制增濁劑的濃度選擇合適的校準(zhǔn)品在一定條件下，原電池的電動(dòng)勢(shì)與被測(cè)離子活度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系。當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時(shí)，則發(fā)生聚集。?標(biāo)本量的要求盡可能做到嚴(yán)格和精確ISE的電位與溶液中特定離子活度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系，即符合Nernst方程透射免疫濁度法（turbidimetryimmunoassay單個(gè)膠乳顆粒在入射光波長(zhǎng)之內(nèi)，光線可透過(guò)。電壓越高，電場(chǎng)強(qiáng)度越大，遷移率越大，帶電粒子移動(dòng)越快②減少輸液對(duì)結(jié)果的影響。?標(biāo)本是否需要稀釋或濃縮，根據(jù)需要而定3.電極電位測(cè)量ISE的EISE

值不能直接測(cè)定必須將ISE與參比電極共同浸入待測(cè)樣品中組成一個(gè)原電池，通過(guò)測(cè)量E電池來(lái)測(cè)定EISE

值。在一定條件下，原電池的電動(dòng)勢(shì)與被測(cè)離子活度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系。（二）ISE電位分析方法?標(biāo)準(zhǔn)比較法（或直讀法）：指在pH計(jì)或離子計(jì)上直接讀出數(shù)值的方法，適用于少量樣本的分析?標(biāo)準(zhǔn)曲線法：適用于大批量的試樣分析?標(biāo)準(zhǔn)加入法：當(dāng)待測(cè)溶液組分較復(fù)雜，很難控制相同的離子強(qiáng)度時(shí)，選用標(biāo)準(zhǔn)加入法（二）ISE樣本測(cè)定方式

?直接法：指樣本不經(jīng)稀釋直接測(cè)量離子活度。全血測(cè)定，迅速方便、結(jié)果準(zhǔn)確，不會(huì)因血清中水體積所占比例改變而影響結(jié)果?間接法：樣本經(jīng)緩沖液稀釋后由電極測(cè)量離子活度。樣品用量少，不易堵塞管道，電極壽命長(zhǎng)直接法比間接法測(cè)定結(jié)果高3％～5％，因?yàn)檠暗鞍踪|(zhì)等不包含有K＋、Na＋二、電解質(zhì)分析儀分類和結(jié)構(gòu)（一）電解質(zhì)分析儀的分類?半自動(dòng)和全自動(dòng)電解質(zhì)分析儀?濕式和干式電解質(zhì)分析儀?電解質(zhì)分析儀、含電解質(zhì)分析的血?dú)夥治鰞x、含電解質(zhì)分析的自動(dòng)生化分析儀離子選擇性電極組：包括指示電極和參比電極?通常采用流動(dòng)式毛細(xì)管結(jié)構(gòu)，即在毛細(xì)管的側(cè)臂開多個(gè)小孔，孔里插入各種離子選擇性電極?負(fù)壓吸樣?多參數(shù)同時(shí)測(cè)量鈉、鉀、氯電極?鈉電極：鉛硅酸鈉的玻璃膜電極?鉀電極：纈氨霉素和聚氯乙烯（PVC）膜電極?氯電極：銀／氯化銀電極液路系統(tǒng)?常由標(biāo)本盤、溶液瓶、驅(qū)動(dòng)電機(jī)、采樣針、電極系統(tǒng)、蠕動(dòng)泵、三通閥、管道等組成。?用于將樣品、定標(biāo)液和稀釋液等吸取和輸送至電極管道中，并完成電極、管道沖洗與廢液排除電路系統(tǒng)?微處理器、信號(hào)放大及數(shù)據(jù)采集、蠕動(dòng)泵和三通閥控制、輸入輸出、電源電路等五大模塊組成。?共同完成對(duì)儀器各部件的動(dòng)作控制，對(duì)電極mV值進(jìn)行處理和計(jì)算，并顯示或打印輸出結(jié)果。程序控制系統(tǒng)包括儀器微處理系統(tǒng)、儀器設(shè)定與測(cè)定和自動(dòng)清洗程序等。顯示操作系統(tǒng)鍵盤、液晶顯示、觸摸屏等三、電解質(zhì)分析儀的維護(hù)和保養(yǎng)每日維護(hù)檢查試劑量，清潔儀器表面及吸樣探針，棄去瓶中的廢液每周維護(hù)清洗液路，除去蛋白質(zhì)、脂類沉積和鹽類結(jié)晶。每月維護(hù)用酒精棉球清潔泵管和不銹鋼轉(zhuǎn)軸，在泵管的彎處涂硅油或白色凡士林等潤(rùn)滑劑。每季度進(jìn)行MV值試驗(yàn)檢查電極的MV值是否符合說(shuō)明書要求。電極系統(tǒng)的保養(yǎng)

定期更換電極膜和電極內(nèi)充液

定期進(jìn)行去蛋白清洗及電極的活化

液路系統(tǒng)的保養(yǎng)

保證液路無(wú)蛋白質(zhì)、脂類沉積和鹽類結(jié)晶

每天關(guān)機(jī)前均進(jìn)行管路的清洗

沖洗完畢重新定標(biāo)

儀器的保養(yǎng)四、電解質(zhì)分析的質(zhì)量控制分析前質(zhì)量控制樣本的采集與處理①采血器具干燥、清潔②減少輸液對(duì)結(jié)果的影響。③采血中應(yīng)避免溶血。④盡快送檢，勿劇烈振蕩，避日光照射；不能立即測(cè)定應(yīng)分離血清，置于4℃冰箱中保存。⑤與空氣接觸時(shí)，CO2

，pH抗凝劑的影響抗凝劑：不能用EDTA、檸檬酸鹽或草酸鹽等抗凝劑。肝素常不超過(guò)20U/ml血樣。藥物的影響藥物或其代謝產(chǎn)物引起患者體內(nèi)被測(cè)物的濃度發(fā)生改變。如利尿劑促進(jìn)K+、Na+、Cl從尿中排出。藥物直接對(duì)ISE的響應(yīng)產(chǎn)生影響：如水楊酸鹽對(duì)抗凝劑的影響Cl電極、維生素C對(duì)K+電極響應(yīng)有干擾等分析中質(zhì)量控制定標(biāo)校正液各廠家的定標(biāo)校正液不能互換使用電極保養(yǎng)使用一段時(shí)間后就需要保養(yǎng)質(zhì)控品選用質(zhì)量好、性能穩(wěn)定和對(duì)離子選擇性電極響應(yīng)沒(méi)有干擾的質(zhì)控血清分析后的質(zhì)量控制異常結(jié)果的分析取舍：?如Glu、HCO3ˉ、K+過(guò)高：血樣放置過(guò)長(zhǎng)?多項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果過(guò)低：樣品稀釋比例不對(duì)、有纖維蛋白凝塊或吸樣針部分堵塞?對(duì)某些急診檢驗(yàn)項(xiàng)目特別異常的結(jié)果，應(yīng)及時(shí)與臨床聯(lián)系，以便緊急處置五、電解質(zhì)分析技術(shù)的臨床應(yīng)用?低鈉血癥和高鈉血癥?血清鉀增高和血清鉀降低?低氯血癥和高氯血癥電泳自動(dòng)化分析技術(shù)一、影響電泳的因素

待分離物質(zhì)的性質(zhì)粒子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快。緩沖液的性質(zhì)溶液的pH值影響其帶電性質(zhì)、凈電荷量。緩沖液離子強(qiáng)度一般在0.02～／kg之間。電場(chǎng)強(qiáng)度電壓越高，電場(chǎng)強(qiáng)度越大，遷移率越大，帶電粒子移動(dòng)越快支持介質(zhì)的性質(zhì)包括黏性吸附對(duì)泳動(dòng)的阻礙作用，支持介質(zhì)的分子篩和電滲作用溫度升高時(shí)，介質(zhì)黏度下降，分子運(yùn)動(dòng)加劇，引起自由擴(kuò)散加快、區(qū)帶變寬和分辨率下降二、電泳儀的分類和基本結(jié)構(gòu)電泳技術(shù)的分類?工作原理的不同分為：移動(dòng)界面電泳、區(qū)帶電泳、穩(wěn)態(tài)電泳或稱置換電泳?有無(wú)支持物分為：自由電泳和支持物電泳（區(qū)帶電泳）。?電源控制的不同分為：恒壓電泳、恒流電泳、恒功率電泳。自動(dòng)化程度的不同分為：手工操作、半自動(dòng)電泳、全自動(dòng)電泳、全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)其他分類方式：支持載體的裝置形式，區(qū)帶電泳可分成水平平板電泳、垂直板狀電泳、垂直柱狀電泳、U型管電泳、倒V字形電泳、毛細(xì)管電泳等。電泳儀的基本結(jié)構(gòu)手工電泳儀電源、電泳槽、電泳條帶分析裝備(或掃描儀)三部分的結(jié)構(gòu)分離，加樣、電泳、電泳后的染色和脫色等均需手工操作，人工設(shè)置參數(shù)完成電泳。自動(dòng)電泳分析儀將電源、電泳槽、烘箱、染色缸等組合在一起，采用計(jì)算機(jī)對(duì)電泳過(guò)程進(jìn)行控制，部分乃至全部操作由電泳儀完成；分為半自動(dòng)或全自動(dòng)電泳儀。三、自動(dòng)電泳儀的使用和保養(yǎng)每天保養(yǎng)重點(diǎn)是電極的維護(hù)，每天電泳后，應(yīng)當(dāng)用干濾紙擦凈電極，避免緩沖鹽沉積于電極上或酸堿對(duì)電極的腐蝕。每月保養(yǎng)重點(diǎn)是掃描系統(tǒng)的比色濾鏡及光源。四、電泳分析的質(zhì)量控制電泳分析前質(zhì)量控制電泳分析方法的選擇加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室與臨床醫(yī)生的溝通，宣傳實(shí)驗(yàn)室所開展的電泳技術(shù)及應(yīng)用；全面了解電泳儀的結(jié)構(gòu)和原理、電泳結(jié)果的意義，合理使用電泳分析方法。標(biāo)本采集：宜采