免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件匯 馬春玲 01 免疫學(xué)檢驗(yàn)概論 -12 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)

第一章免疫學(xué)檢驗(yàn)概論免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)免疫學(xué)的基本概念

第一節(jié)

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導(dǎo)入提問(wèn)免疫學(xué)的基本概念“乙肝兩對(duì)半”需要檢查幾個(gè)項(xiàng)目？誰(shuí)和誰(shuí)是一對(duì)？1）乙肝表面抗原（HBsAg）2）乙肝表面抗體（HBsAb）3）乙肝e抗原（HBeAg）4）乙肝e抗體（HBeAb）5）乙肝核心抗體（HBcAb）Ag-Ab—*—

免疫學(xué)的基本概念免疫學(xué)/醫(yī)學(xué)免疫學(xué)概念免疫學(xué)：是研究生物機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)、功能及其與疾病關(guān)系的學(xué)科。醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：是研究人體免疫系統(tǒng)組成和功能、免疫應(yīng)答規(guī)律和效應(yīng)、免疫功能異常所致疾病及其發(fā)生機(jī)制，以及免疫學(xué)診斷、預(yù)防和治療的一門(mén)科學(xué)。—*—

免疫學(xué)的基本概念免疫概念免疫（immunology）：免疫是機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別和清除抗原性異物，維持自身生理平衡和穩(wěn)定的功能。微課：免疫學(xué)的基本概念—*—

免疫學(xué)的基本概念免疫分類(lèi)（1）固有性免疫/先天性免疫/非特異性免疫（2）適應(yīng)性免疫/獲得性免疫/特異性免疫關(guān)系：固有免疫往往是適應(yīng)性免疫的先決條件，適應(yīng)性免疫應(yīng)答的效應(yīng)分子可大大促進(jìn)固有免疫應(yīng)答。微課：免疫學(xué)的基本概念—*—

免疫學(xué)的基本概念免疫系統(tǒng)概念免疫系統(tǒng)（immunesystem）是機(jī)體執(zhí)行免疫應(yīng)答及免疫功能的重要系統(tǒng)。—*—

免疫學(xué)的基本概念免疫系統(tǒng)組成組成：免疫器官+免疫細(xì)胞+免疫分子骨髓T細(xì)胞抗體—*—

免疫學(xué)的基本概念免疫系統(tǒng)功能（1）免疫防御：防止外界病原體的入侵及清除已入侵的病原體和有害生物性分子的能力。（過(guò)強(qiáng)：超敏反應(yīng)；過(guò)弱：免疫缺陷）（2）免疫監(jiān)視：機(jī)體殺傷和清除異常突變細(xì)胞防止腫瘤發(fā)生的能力。（異常：腫瘤）—*—

免疫學(xué)基本概念免疫系統(tǒng)功能（3）免疫穩(wěn)定：機(jī)體免疫系統(tǒng)通過(guò)自身免疫耐受和免疫調(diào)節(jié)兩種機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的功能。（異常：自身免疫?。?—

免疫學(xué)的基本概念免疫系統(tǒng)功能自身免疫病之類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎超敏反應(yīng)之過(guò)敏性鼻炎免疫監(jiān)視異常之腫瘤免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史

第二節(jié)

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免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史免疫學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史（1）經(jīng)驗(yàn)免疫學(xué)階段（公元400年至18世紀(jì)末）人痘苗預(yù)防天花：天花痂皮粉鼻孔吹入預(yù)防天花（最早的原始疫苗）琴納發(fā)現(xiàn)牛痘苗：英國(guó).18世紀(jì)后期.EdwardJenner牛痘苗接種（世界上第一例成功的疫苗）微課：免疫學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史—*—

免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史種痘預(yù)防天花—*—

提問(wèn)免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史牛痘苗為什么可以預(yù)防人痘？天花病毒—*—

免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史免疫學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史（2）科學(xué)免疫學(xué)階段（18世紀(jì)末至20世紀(jì)中葉）1881年巴斯德獲得了炭疽桿菌減毒株，用于炭疽病的預(yù)防。巴斯德獲得了狂犬病病毒減毒株，制備成狂犬疫苗。vonBehring和他的同事Kitasato獲得抗毒素，開(kāi)創(chuàng)了人工被動(dòng)免疫的先河?！?—

免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史免疫學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史（2）科學(xué)免疫學(xué)階段（18世紀(jì)末至20世紀(jì)中葉）1883年，俄國(guó)學(xué)者ElieIlyaMetchnikoff提出了細(xì)胞免疫的假說(shuō)。1890年，興起了體液免疫的研究，提出了抗原抗體的概念，建立了體液免疫學(xué)說(shuō)。1897～1974年科學(xué)家相繼提出了抗體產(chǎn)生的側(cè)鏈學(xué)說(shuō)、克隆選擇學(xué)說(shuō)和免疫網(wǎng)絡(luò)學(xué)說(shuō)?！?—

設(shè)計(jì)情景提問(wèn)免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史長(zhǎng)期養(yǎng)狗的人預(yù)防狂犬病和已經(jīng)被攜帶狂犬病毒的“瘋狗”咬了一口預(yù)防狂犬病，這兩種情況選擇主動(dòng)免疫還是被動(dòng)免疫？—*—

免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史免疫學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史（3）現(xiàn)代免疫學(xué)階段（20世紀(jì)中葉至今）1978年日本生物學(xué)家SusumuTonegawa應(yīng)用基因重排技術(shù)，揭示了抗體多樣性的遺傳學(xué)基礎(chǔ)。1984年MarkDavis和ChienSaito等成功克隆了T細(xì)胞受體的基因?！?—

免疫學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史免疫學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史（3）現(xiàn)代免疫學(xué)階段（20世紀(jì)中葉至今）1975年Kohler和Milstein創(chuàng)立了雜交瘤技術(shù)，以用來(lái)大量制備單克隆抗體。1976年Morgan等建立了T淋巴細(xì)胞克隆技術(shù)應(yīng)答。控制免疫應(yīng)答的主要基因：MHC。免疫學(xué)檢驗(yàn)的概述

第三節(jié)

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免疫學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用免疫學(xué)檢驗(yàn)的性質(zhì)和任務(wù)免疫學(xué)檢驗(yàn)的課程目標(biāo)免疫學(xué)檢驗(yàn)的研究方法免疫學(xué)檢驗(yàn)的概述免疫學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用和發(fā)展趨勢(shì)

第四節(jié)

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免疫學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用免疫學(xué)檢測(cè)方法1）體液免疫檢測(cè)的方法。2）細(xì)胞免疫檢測(cè)的方法。免疫學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用和發(fā)展趨勢(shì)—*—

免疫學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用免疫學(xué)檢測(cè)的應(yīng)用范圍1）用于免疫性疾病的診斷。2）用于感染性疾病的診斷。3）用于腫瘤的診斷。

4）在其他方面的應(yīng)用免疫學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用和發(fā)展趨勢(shì)—*—

免疫學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用和發(fā)展趨勢(shì)免疫學(xué)檢驗(yàn)的發(fā)展趨勢(shì)

隨著免疫學(xué)的迅速發(fā)展，其已與分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)相互結(jié)合，成為生命科學(xué)的前沿學(xué)科。謝謝！第二章免疫系統(tǒng)免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)免疫系統(tǒng)免疫系統(tǒng)概念免疫系統(tǒng)（immunesystem）是在生物種系發(fā)育、進(jìn)化過(guò)程中逐步建立和完善的，是人和高等動(dòng)物執(zhí)行免疫功能，維持自身穩(wěn)定的組織系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)由免疫器官和組織、免疫細(xì)胞和免疫分子組成。免疫器官免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)免疫器官免疫器官分類(lèi)免疫器官（immuneorgan）按其發(fā)生和功能不同分為中樞免疫器官和外周免疫器官。中樞免疫器官中樞免疫器官組成

1、骨髓（bonemarrow）（禽類(lèi)的法氏囊相當(dāng)于骨髓）中樞免疫器官中樞免疫器官組成功能：（1）訓(xùn)化B細(xì)胞（2）造血

1、骨髓（bonemarrow）中樞免疫器官中樞免疫器官組成

2、胸腺（thymus）胸腺的大小和結(jié)構(gòu)隨年齡的不同有差異，直接影響免疫功能。微課：T細(xì)胞在胸腺內(nèi)訓(xùn)化成熟中樞免疫器官中樞免疫器官組成

2、胸腺（thymus）功能：（1）訓(xùn)化T細(xì)胞（2）分泌胸腺激素（無(wú)種屬特異性）中樞免疫器官T細(xì)胞在胸腺內(nèi)訓(xùn)化成熟（1）陽(yáng)性選擇：T細(xì)胞與MHC分子結(jié)合，獲得MHC限制性。（2）陰性選擇：T細(xì)胞與自身肽不結(jié)合，獲得自身耐受性。動(dòng)畫(huà)：T細(xì)胞訓(xùn)化成熟中樞免疫器官中樞免疫器官功能（1）出產(chǎn)成熟的免疫活性細(xì)胞（2）指導(dǎo)外周免疫器官發(fā)育（3）調(diào)節(jié)全身免疫功能外周免疫器官外周免疫器官組成

1、淋巴結(jié)（T細(xì)胞多）功能：（1）免疫細(xì)胞定居的場(chǎng)所（2）發(fā)生初次免疫應(yīng)答的場(chǎng)所（3）過(guò)濾作用（4）參與淋巴細(xì)胞再循環(huán)動(dòng)畫(huà)：淋巴結(jié)的功能外周免疫器官細(xì)胞免疫應(yīng)答基本過(guò)程（Th1為例）初始B細(xì)胞→漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）+記憶B細(xì)胞初始T細(xì)胞→效應(yīng)T細(xì)胞（產(chǎn)生細(xì)胞因子）+記憶T細(xì)胞體液免疫應(yīng)答基本過(guò)程初始B細(xì)胞漿細(xì)胞記憶B細(xì)胞抗體（Ab）初始T細(xì)胞效應(yīng)T細(xì)胞記憶T細(xì)胞細(xì)胞因子（CK）外周免疫器官淋巴細(xì)胞再循環(huán)血→HEV→淋巴結(jié)實(shí)質(zhì)→毛細(xì)淋巴管→輸出淋巴管→胸導(dǎo)管→血?jiǎng)赢?huà)：淋巴細(xì)胞再循環(huán)外周免疫器官外周免疫器官組成

2、脾臟（B細(xì)胞多）功能：（1）免疫細(xì)胞定居的場(chǎng)所（2）免疫應(yīng)答的場(chǎng)所（3）過(guò)濾作用（4）合成某些生物活性介質(zhì)外周免疫器官外周免疫器官組成

3、粘膜相關(guān)淋巴組織SIgA發(fā)揮局部免疫功能部位：呼吸道、消化道、泌尿生殖道等外周免疫器官外周免疫器官功能（1）免疫細(xì)胞定居的場(chǎng)所（2）發(fā)生免疫應(yīng)答的場(chǎng)所免疫細(xì)胞免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞類(lèi)型淋巴細(xì)胞（L）大淋巴細(xì)胞（L）樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）吞噬細(xì)胞中性粒細(xì)胞（N）紅細(xì)胞（RBC）嗜酸性粒細(xì)胞（E）嗜堿性粒細(xì)胞（B）單核細(xì)胞（M）血小板（PLT）淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞（L）組成分類(lèi)1：（大小不同）

1）小淋巴細(xì)胞（T細(xì)胞+B細(xì)胞）

2）大淋巴細(xì)胞（如NK細(xì)胞）大淋巴細(xì)胞小淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞（L）組成分類(lèi)2：（性質(zhì)和功能）

1）T細(xì)胞

2）B細(xì)胞

3）大顆粒淋巴細(xì)胞T淋巴細(xì)胞NK細(xì)胞B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞T淋巴細(xì)胞1、表面分子（活化→增殖、分化→效應(yīng)）（1）抗原活化T細(xì)胞1）主信號(hào)：TCR-CD3（傳遞信息）；CD4/CD8與MHCⅡ/Ⅰ類(lèi)分子結(jié)合。解析：TCR與抗原肽結(jié)合，為T(mén)細(xì)胞特有，由α、β、γ、δ鏈組成異二聚體，分別組成αβT細(xì)胞和γδT細(xì)胞。CD4為HIVgp120的受體。2）協(xié)同刺激信號(hào)：CD28-B7等。微課：T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞T淋巴細(xì)胞主信號(hào)協(xié)同刺激信號(hào)淋巴細(xì)胞T淋巴細(xì)胞1、表面分子（2）絲裂原活化T細(xì)胞

絲裂原受體：

1）植物血凝素受體

2）刀豆蛋白A受體

3）美洲商陸受體（3）增殖、分化—細(xì)胞因子受體微課：T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞T淋巴細(xì)胞2、亞群及功能（1）初始T細(xì)胞+效應(yīng)T細(xì)胞+記憶T細(xì)胞（2）輔助性T細(xì)胞（Th）+細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Tc）+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Td）微課：T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞T淋巴細(xì)胞微課：T淋巴細(xì)胞1）CD4+T細(xì)胞（一般為T(mén)h）/CD8+T細(xì)胞（一般為T(mén)c）2）Th1（輔助細(xì)胞免疫）/Th2（輔助體液免疫）3）Tc殺傷方式：穿孔素+顆粒酶/FasL-Fas（死亡配體-死亡受體）/TNF-α和TNF受體淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞1、表面分子（活化→增殖、分化→效應(yīng)）（1）抗原活化B細(xì)胞1）主信號(hào)：BCR（與抗原表位結(jié)合）-CD79a/CD79b（傳遞信息）解析：BCR=MIg=mIg，B細(xì)胞特異性標(biāo)志2）協(xié)同刺激信號(hào)：CD40-CD40L。微課：B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞微課：B淋巴細(xì)胞B細(xì)胞共受體：CD19/CD21（EBV受體）/CD81淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞1、表面分子（2）絲裂原活化B細(xì)胞

絲裂原受體：

1）細(xì)菌脂多糖受體

2）葡萄球菌A蛋白受體

3）美洲商陸受體（3）增殖、分化—細(xì)胞因子受體

(4）其他受體：IgGFc受體、補(bǔ)體受體微課：B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞2、亞群及功能（1）B1細(xì)胞（CD5＋B細(xì)胞：活化無(wú)需T細(xì)胞輔助）（2）B2細(xì)胞（CD5-B細(xì)胞：活化需要T細(xì)胞輔助）微課：B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞大顆粒淋巴細(xì)胞代表：NK細(xì)胞機(jī)制：穿孔素、顆粒酶直接攻擊抗原免疫類(lèi)型：非特異性免疫動(dòng)畫(huà)：抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)（ADCC）抗原提呈細(xì)胞抗原提呈細(xì)胞（APC）概念A(yù)PC：能捕捉、加工、處理抗原，并將抗原信息提呈給T淋巴細(xì)胞的一類(lèi)免疫細(xì)胞，在機(jī)體的免疫識(shí)別、免疫應(yīng)答與免疫調(diào)節(jié)中起重要作用?？乖岢始?xì)胞抗原提呈細(xì)胞（APC）分類(lèi)分類(lèi)：（1）專(zhuān)職APC：樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）、單核-巨噬細(xì)胞（M-Mφ）和B細(xì)胞。（2）非專(zhuān)職APC：內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等?？乖岢始?xì)胞樹(shù)突狀細(xì)胞樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）是目前所知的功能最強(qiáng)的專(zhuān)職APC，因其成熟時(shí)伸出很多樹(shù)突狀突起而得名?？苫罨跏糡細(xì)胞，具有提呈抗原、免疫激活和免疫調(diào)節(jié)等作用。抗原提呈細(xì)胞單核-巨噬細(xì)胞表面受體：IgGFc受體（FcγR）：參與調(diào)理吞噬與ADCC作用。補(bǔ)體受體：CRⅠ可與C3b結(jié)合，參與調(diào)理吞噬及免疫粘附作用。表面抗原：表達(dá)HLA-Ⅰ類(lèi)和Ⅱ類(lèi)抗原分子。功能：吞噬殺傷作用、呈遞TD抗原，啟動(dòng)免疫應(yīng)答、抗腫瘤作用、分泌生物活性介質(zhì)?？乖岢始?xì)胞單核-巨噬細(xì)胞抗原提呈細(xì)胞B細(xì)胞B細(xì)胞能夠通過(guò)其膜表面的抗原受體攝取蛋白抗原并將之加工處理成抗原肽，抗原肽與MHC-Ⅱ類(lèi)分子結(jié)合，表達(dá)于B細(xì)胞表面，有效地提呈給CD4+T細(xì)胞。抗原提呈細(xì)胞抗原提呈細(xì)胞（APC）分類(lèi)（2）非專(zhuān)職APC：內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等。其他免疫細(xì)胞其他免疫細(xì)胞紅細(xì)胞（RBC）、中性粒細(xì)胞（N）、血小板（PLT）、嗜酸性粒細(xì)胞（E）、嗜堿性粒細(xì)胞（B）和肥大細(xì)胞等。謝謝！第三章免疫化學(xué)免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)抗原免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)—*—

抗原：能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物（抗體或致敏淋巴細(xì)胞）在體內(nèi)外發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)。初始B細(xì)胞漿細(xì)胞記憶B細(xì)胞抗體（Ab）初始T細(xì)胞效應(yīng)T細(xì)胞記憶T細(xì)胞細(xì)胞因子（CK）抗原概念（Ag）抗原的概念抗原特性抗原（Ag）特性完全抗原：免疫原性+免疫反應(yīng)性半抗原：免疫反應(yīng)性半抗原+載體=完全抗原抗原的基本知識(shí)抗原的異物性異物性：化學(xué)結(jié)構(gòu)與宿主的自身成分相異或機(jī)體的免疫活性細(xì)胞從未接觸過(guò)的物質(zhì)。包括：1）同種異體物質(zhì)

2）異種物質(zhì)

3）自身物質(zhì)抗原的基本知識(shí)決定抗原免疫原性的因素1）分子量2）化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)3）物理狀態(tài)4）分子構(gòu)象的易接近性抗原的基本知識(shí)決定抗原免疫原性的因素5）宿主反應(yīng)性:年齡、性別、健康狀況6）免疫方法:免疫劑量、抗原進(jìn)入機(jī)體的途徑抗原的特異性抗原決定基概念：存在于抗原分子表面決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)。分類(lèi)：

1）構(gòu)象表位與順序表位2）T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位3）隱蔽性表位和功能性表位抗原的特異性抗原結(jié)合價(jià)概念：能與抗體分子結(jié)合的功能性抗原決定簇的數(shù)目。1）單價(jià)抗原2）多價(jià)抗原抗原的特異性共同抗原和交叉反應(yīng)共同抗原：兩個(gè)抗原間具有相同或相似的表位。交叉反應(yīng)：針對(duì)相同或相似表位的抗體可與具有該表位的抗原結(jié)合。動(dòng)畫(huà)：共同抗原和交叉反應(yīng)抗原的分類(lèi)根據(jù)抗原誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分類(lèi)1.胸腺依賴(lài)性抗原（TD-Ag）：刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體時(shí)需要T細(xì)胞輔助。（1）TD-Ag誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答主要產(chǎn)生IgG類(lèi)抗體（2）同時(shí)也能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答和免疫記憶抗原的分類(lèi)根據(jù)抗原誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分類(lèi)2.胸腺非依賴(lài)性抗原（TI-Ag）：刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體時(shí)不需要T細(xì)胞輔助。

（1）只有重復(fù)B細(xì)胞表位→體液免疫（2）產(chǎn)生的抗體以IgM為主，抗原簡(jiǎn)單，無(wú)記憶抗原的分類(lèi)根據(jù)抗原誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分類(lèi)3.超抗原：直接非特異性激活某些T細(xì)胞亞群或B細(xì)胞亞群的物質(zhì)，極低濃度即可激活大量的T細(xì)胞克隆，并產(chǎn)生極強(qiáng)的免疫應(yīng)答。動(dòng)畫(huà)：超抗原作用機(jī)制抗原的分類(lèi)根據(jù)抗原與機(jī)體的親緣關(guān)系分類(lèi)1.異種抗原：不同種屬間的抗原物質(zhì)。

（1）病原生物

（2）細(xì)菌外毒素與類(lèi)毒素

（3）動(dòng)物免疫血清

抗原的分類(lèi)根據(jù)抗原與機(jī)體的親緣關(guān)系分類(lèi)2.同種異型抗原：同種屬不同基因型個(gè)體間的抗原物質(zhì)。（1）血型抗原（ABO和Rh）（2）組織相容性抗原（如MHC分子）

MHC分子抗原的分類(lèi)根據(jù)抗原與機(jī)體的親緣關(guān)系分類(lèi)3.自身抗原：誘導(dǎo)宿主發(fā)生自身免疫應(yīng)答的自身組織。

（1）修飾的自身抗原（正常的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變）

（2）隱蔽的自身抗原（精子、晶狀體蛋白等）

（3）自身正常物質(zhì)（免疫系統(tǒng)異常）

抗原的分類(lèi)根據(jù)抗原與機(jī)體的親緣關(guān)系分類(lèi)4.異嗜性抗原：存在于人、動(dòng)植物和微生物之間的共同抗原。

（1）溶血性鏈球菌感染

（2）外斐試驗(yàn)

抗原的分類(lèi)根據(jù)抗原的基本性能分類(lèi)1.完全抗原=免疫原性+免疫反應(yīng)性2.半抗原=免疫原性半抗原+載體→完全抗原抗體與免疫球蛋白免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)抗體與免疫球蛋白抗體與免疫球蛋白抗體：是B細(xì)胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞產(chǎn)生的，能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白：具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)1.四肽鏈結(jié)構(gòu)兩條相同的重鏈兩條相同的輕鏈四條肽鏈間通過(guò)二硫鍵相連抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)2.

連接鏈（J鏈）由合成IgM、IgA的漿細(xì)胞產(chǎn)生的富含半胱氨酸的酸性糖蛋白，以二硫鍵形式共價(jià)結(jié)合到Ig的H鏈上。作用：將單體連接成多聚體抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)3.分泌片（SP）為黏膜上皮細(xì)胞合成和分泌含糖多肽，以非共價(jià)形式與IgA二聚體結(jié)合，是分泌型IgA的輔助成分。作用：抗蛋白水解酶、介導(dǎo)IgA轉(zhuǎn)運(yùn)抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的功能區(qū)110個(gè)AA左右通過(guò)鏈內(nèi)二硫鍵組成一個(gè)球形結(jié)構(gòu)域?？贵w與免疫球蛋白免疫球蛋白的功能區(qū)（1）可變區(qū)（V區(qū)）1）位置：近N端H鏈約l/4或1/5和L鏈約1/22）原因：AA種類(lèi)、排序、構(gòu)型變化大3）命名：VH、VL4）功能：結(jié)合抗原抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的功能區(qū)（2）恒定區(qū)（C區(qū)）1）位置：近C端H鏈約3/4或4/5和L鏈約1/22）原因：AA數(shù)量、種類(lèi)、排序、構(gòu)型及糖量較穩(wěn)定3）命名：CH1、CH2、CH3、CH4和CL抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的功能區(qū)（3）功能區(qū)1）VH和VL：識(shí)別和結(jié)合抗原2）CH1和CL：同種異型的遺傳標(biāo)志3）CH2（IgG）CH3（IgM）：?jiǎn)?dòng)補(bǔ)體活化的經(jīng)典途徑4）CH3（IgG、IgA）CH4（IgE）：與多種細(xì)胞表面Ig的Fc受體結(jié)合抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)（4）鉸鏈區(qū)1）富有彈性和伸展性2）鉸鏈區(qū)使Ig分子兩臂能張合自如3）有利于抗體分子與不同距離的抗原決定基結(jié)合抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的功能區(qū)（5）Ig的酶解片段

抗體與免疫球蛋白免疫球蛋白的抗原特異性抗體與免疫球蛋白抗體的生物學(xué)活性1.特異性結(jié)合抗原2.激活補(bǔ)體3.結(jié)合Fc受體（調(diào)理作用、介導(dǎo)超敏反應(yīng)、ADCC、與細(xì)菌蛋白結(jié)合）4.穿過(guò)胎盤(pán)和黏膜

五類(lèi)免疫球蛋白的特性和功能IgG1）血清中含量最高，半衰期最長(zhǎng)2）抗感染和再次應(yīng)答的主要抗體3）功能：激活補(bǔ)體、調(diào)理作用、ADCC、結(jié)合細(xì)菌蛋白、介導(dǎo)Ⅱ、Ⅲ型超敏反應(yīng)4）唯一能通過(guò)胎盤(pán)的Ig五類(lèi)免疫球蛋白的特性和功能IgM1)分子量最大，五聚體（巨球蛋白）2)免疫應(yīng)答早期產(chǎn)生，臍帶血IgM增高提示宮內(nèi)感染3)功能：急性感染的早期診斷，天然血型抗體為IgM類(lèi)五類(lèi)免疫球蛋白的特性和功能IgA1）黏膜局部抗感染免疫，阻止病原微生物黏附2）功能：血清型（全身免疫）、SIgA分泌型（局部免疫）血清型分泌型五類(lèi)免疫球蛋白的特性和功能IgD1）功能：尚不清楚（成熟B細(xì)胞有表達(dá)）五類(lèi)免疫球蛋白的特性和功能IgE1）產(chǎn)生最晚，含量最低2）功能：介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)（主要為呼吸道、消化道等）抗原抗體反應(yīng)免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)抗原抗體反應(yīng)的基本原理抗原抗體的結(jié)合力1.靜電引力2.范德華引力3.氫鍵4.疏水作用力抗原抗體反應(yīng)的基本原理抗原抗體的親和性與親和力親和性：指抗體的一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原決定基之間的結(jié)合強(qiáng)度，是兩者之間固有的結(jié)合力。親和力：是多價(jià)抗體分子與抗原表面的多個(gè)相應(yīng)抗原表位之間的結(jié)合強(qiáng)度?？乖贵w反應(yīng)的基本原理親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1.特異性機(jī)理：抗原表位與抗體CDR互補(bǔ)應(yīng)用：已知抗原→未知抗體；已知抗體→未知抗原抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)2.

可逆性（1）抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性，解離后仍然保持Ag、Ab各自原有的特性。（2）解離條件：低/高pH、凍融/高溫、高濃度鹽?？乖贵w反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)3.比例性反應(yīng)遵循一定的量比關(guān)系（1）最適比（2）前帶（3）后帶（4）等價(jià)帶抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)4.階段性兩階段：特異結(jié)合階段（不受外界影響，反應(yīng)快）→可見(jiàn)反應(yīng)階段（易受外界因素干擾，反應(yīng)慢）抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)的影響因素

1.抗原與抗體的本身因素（1）抗原因素：抗原的理化特性、相對(duì)分子質(zhì)量、抗原表位的種類(lèi)和數(shù)目（2）抗體因素：抗體的來(lái)源、濃度、親和力和特異性均可影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確程度。

抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)的影響因素2.環(huán)境因素（1）電解質(zhì)（濃度適當(dāng)：0.85%NaCl溶液）（2）酸堿度（pH：6-9）（3）溫度（最適37℃）

抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型反應(yīng)類(lèi)型實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)方法敏感度凝集反應(yīng)

直接凝集試驗(yàn)用裸眼、放大鏡或顯微鏡觀察紅細(xì)胞或膠乳等顆粒和各種凝集現(xiàn)象

＋間接凝集試驗(yàn)＋＋凝集抑制試驗(yàn)＋＋＋協(xié)同凝集試驗(yàn)＋＋＋抗球蛋白試驗(yàn)＋＋＋沉淀反應(yīng)

液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀，檢測(cè)濁度，觀察掃描沉淀線、沉淀環(huán)、沉淀峰、沉淀弧等

＋，＋＋＋＋瓊脂凝膠擴(kuò)散＋凝膠電泳技術(shù)＋＋抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型反應(yīng)類(lèi)型實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)方法敏感度補(bǔ)體參與的反應(yīng)

補(bǔ)體溶血試驗(yàn)以裸眼或光電比色儀觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象＋＋補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)＋＋＋中和反應(yīng)

病毒中和試驗(yàn)病毒感染性喪失＋毒素中和試驗(yàn)外毒素毒性喪失＋＋免疫標(biāo)記技術(shù)

熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光現(xiàn)象＋＋＋＋放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)度＋＋＋＋酶標(biāo)免疫技術(shù)檢測(cè)酶-底物顯色＋＋＋＋發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度＋＋＋＋金標(biāo)免疫技術(shù)檢測(cè)金顆粒沉淀＋＋＋＋生物素-親和素技術(shù)結(jié)合其他標(biāo)記技術(shù)＋＋＋＋補(bǔ)體系統(tǒng)免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)概述補(bǔ)體存在于人和動(dòng)物血清中的一種不耐熱，具有酶活性的蛋白質(zhì)，可輔助和補(bǔ)充特異性抗體介導(dǎo)的溶菌作用，故稱(chēng)補(bǔ)體。

概述補(bǔ)體系統(tǒng)的組成（1）固有成分

概述補(bǔ)體系統(tǒng)的組成（2）補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白1）是參與調(diào)控補(bǔ)體活化的蛋白分子2）包括如C1INH、H因子、I因子、C4BP、DAF、MCP、S蛋白等

概述補(bǔ)體系統(tǒng)的組成（3）補(bǔ)體受體CR是指表達(dá)于不同細(xì)胞表面，能與有活性的補(bǔ)體片段結(jié)合介導(dǎo)多種生物效應(yīng)的受體分子

補(bǔ)體系統(tǒng)的激活經(jīng)典激活途徑三階段：1）識(shí)別階段

2）活化階段

3）膜攻擊階段補(bǔ)體系統(tǒng)的激活經(jīng)典激活途徑三階段：1）識(shí)別階段

2）活化階段

3）膜攻擊階段補(bǔ)體系統(tǒng)的激活經(jīng)典激活途徑補(bǔ)體系統(tǒng)的激活旁路激活途徑（1）激活物（提供固相接觸表面）：細(xì)菌細(xì)胞壁成分（LPS、肽聚糖）、凝聚的IgA和IgG4（2）參與成分：B、D、P因子（滅活因子：H、I因子）、C3、C5～C9（3）C3b的來(lái)源：自發(fā)產(chǎn)生、經(jīng)典途徑等補(bǔ)體系統(tǒng)的激活旁路激活途徑補(bǔ)體系統(tǒng)的激活MBL激活途徑（1）激活物：病原微生物表面的糖結(jié)構(gòu)（如甘露糖等）（2）過(guò)程：補(bǔ)體系統(tǒng)的激活補(bǔ)體激活的共同末端效應(yīng)膜攻擊復(fù)合物（MAC）補(bǔ)體的生物學(xué)作用補(bǔ)體的生物學(xué)作用（1）溶解細(xì)胞作用（2）清除免疫復(fù)合物作用（3）調(diào)理作用和免疫黏附作用（4）炎癥介質(zhì)作用補(bǔ)體的測(cè)定方法和臨床意義補(bǔ)體總活性測(cè)定CH50檢測(cè)的基本原理：利用綿羊紅細(xì)胞（SRBC）與相應(yīng)抗體（溶血素）結(jié)合后可激活補(bǔ)體，導(dǎo)致SRBC溶血。以引起50％溶血所需的最少補(bǔ)體量為一個(gè)CH50單位（U），可計(jì)算出待測(cè)血清中總的補(bǔ)體溶血活性補(bǔ)體的測(cè)定方法和臨床意義補(bǔ)體總活性測(cè)定臨床意義：CH50升高多見(jiàn)于急性炎癥、組織損傷和某些惡性腫瘤患者。妊娠、甲狀腺炎、糖尿病等補(bǔ)體含量也可升高。CH50降低可分為補(bǔ)體消耗増多、補(bǔ)體大量丟失、補(bǔ)體合成不足以及先天性某些補(bǔ)體成分缺陷等方面。補(bǔ)體的測(cè)定方法和臨床意義補(bǔ)體單一成分的測(cè)定（1）免疫溶血法（2）免疫化學(xué)法補(bǔ)體的測(cè)定方法和臨床意義補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)反應(yīng)分兩步進(jìn)行：首先是反應(yīng)系統(tǒng)與補(bǔ)體的作用，第二步是指示系統(tǒng)利用剩余補(bǔ)體的反應(yīng)。如反應(yīng)系統(tǒng)中抗原與抗體對(duì)應(yīng)，特異性結(jié)合形成免疫復(fù)合物而固定和消耗補(bǔ)體，使后加入的SRBC-溶血素指示系統(tǒng)不溶血，反之亦然。謝謝！第四章免疫分子免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)第一節(jié)主要組織相容性復(fù)合體及編碼分子主要組織相容性復(fù)合體（majorhistocompatibilitycomplex，MHC）

是一組決定移植組織器官是否相容、與免疫應(yīng)答密切相關(guān)的緊密連鎖的基因群。人類(lèi)的MHC分子因其最早在白細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)且含量最高，被稱(chēng)為人類(lèi)白細(xì)胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA），其編碼基因?yàn)槿说腗HC，也稱(chēng)為HLA復(fù)合體。一、人類(lèi)主要組織相容性復(fù)合體的結(jié)構(gòu)與遺傳特點(diǎn)（一）HLA復(fù)合體的結(jié)構(gòu)人類(lèi)的HLA基因復(fù)合體位于第6號(hào)染色體短臂，由HLAⅠ類(lèi)、Ⅱ類(lèi)和Ⅲ類(lèi)基因區(qū)組成。著絲點(diǎn)短臂第6號(hào)染色體經(jīng)典的HLAⅠ類(lèi)基因編碼HLAⅠ類(lèi)分子的α鏈，包括B、C、A三個(gè)基因位點(diǎn)。經(jīng)典的HLAⅡ類(lèi)基因編碼HLAⅡ類(lèi)分子的α鏈和β鏈，包括DP、DQ和DR三個(gè)亞區(qū)，每個(gè)亞區(qū)又包括A和B兩種功能基因座位。免疫功能相關(guān)基因分布于HLAⅠ類(lèi)、Ⅱ類(lèi)和Ⅲ類(lèi)基因區(qū)，參與抗原加工、固有免疫和免疫調(diào)節(jié)。HLA基因結(jié)構(gòu)示意圖（二）HLA復(fù)合體的遺傳特征多態(tài)性是指群體中單個(gè)基因座位存在兩種以上不同等位基因的現(xiàn)象。單體型遺傳與連鎖不平衡1.單體型：指同一染色體上緊密連鎖的MHC不同座位等位基因的組合。單體型遺傳是指MHC基因在染色單體上以一個(gè)整體的形式遺傳給子代。

父母子女MHC單體型遺傳示意圖

2.在遺傳過(guò)程中HLA復(fù)合體等位基因的出現(xiàn)具有非隨機(jī)性表達(dá)的特點(diǎn)，且兩個(gè)或兩個(gè)以上基因座位的等位基因同時(shí)出現(xiàn)在一條染色體上的概率高于隨機(jī)出現(xiàn)的頻率稱(chēng)為連鎖不平衡。二、人類(lèi)主要組織相容性抗原的結(jié)構(gòu)、分布和功能（一）HLA分子的結(jié)構(gòu)和分布

1.HLA分子的結(jié)構(gòu)1）HLAⅠ類(lèi)分子由重鏈（α鏈）和輕鏈（β2m）組成，其α鏈胞外段有三個(gè)結(jié)構(gòu)域（α1、α2、α3），遠(yuǎn)膜端的結(jié)構(gòu)域α1和α2構(gòu)成抗原結(jié)合槽。HLAⅠ類(lèi)分子結(jié)構(gòu)示意圖

2）HLAⅡ類(lèi)分子由重鏈（α鏈）和輕鏈（β鏈）組成，其α、β鏈的胞外段各有兩個(gè)結(jié)構(gòu)域（α1、α2；β1、β2），其中α1和β1構(gòu)成抗原結(jié)合槽。HLAⅡ類(lèi)分子結(jié)構(gòu)示意圖2.HLA分子的分布HLAⅠ類(lèi)分子分布在所有的有核細(xì)胞表面HLAⅡ類(lèi)分子僅表達(dá)于淋巴組織中的某些細(xì)胞表面，如專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、B細(xì)胞）、胸腺上皮細(xì)胞及活化的T細(xì)胞等。（二）HLA分子的功能1．作為抗原提呈分子參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答

2．在胸腺內(nèi)參與T細(xì)胞發(fā)育的選擇和分化

3．作為調(diào)節(jié)分子參與固有免疫應(yīng)答三、人類(lèi)主要組織相容性抗原的醫(yī)學(xué)意義（一）HLA與器官移植

器官移植的成敗主要取決于供者和受者之間的組織相容性，其中HLA等位基因等的匹配尤其重要。

通常移植物存活率由高到低依次是：

同卵雙胞胎>同胞>親屬>無(wú)血緣關(guān)系者（二）HLA和疾病的關(guān)聯(lián)帶有某些特定HLA等位基因或單體型的個(gè)體易患某種疾?。ǚQ(chēng)為陽(yáng)性關(guān)聯(lián)）或?qū)υ摷膊【哂休^強(qiáng)抵抗力（稱(chēng)為陰性關(guān)聯(lián)）的現(xiàn)象稱(chēng)為HLA和疾病關(guān)聯(lián)。與HLA關(guān)聯(lián)的常見(jiàn)疾?。ㄈ〩LA分子的表達(dá)異常與疾病腫瘤細(xì)胞HLAⅠ類(lèi)分子的表達(dá)常常減弱或缺如。某些自身免疫病患者異常表達(dá)HLAⅡ類(lèi)分子。（四）HLA與法醫(yī)學(xué)HLA基因分型在法醫(yī)學(xué)上被用于親子鑒定和個(gè)體識(shí)別。-非親緣個(gè)體間HLA等位基因完全相同的幾率是零；

-HLA是伴隨終身的遺傳標(biāo)志。第二節(jié)免疫膜分子一、人白細(xì)胞分化抗原（一）人白細(xì)胞分化抗原的概念及組成1.人白細(xì)胞分化抗原（humanleukocytedifferen-tiationantigen，HLDA）是指造血干細(xì)胞在分化為不同譜系、各個(gè)細(xì)胞譜系在不同的分化階段以及成熟細(xì)胞活化過(guò)程中表達(dá)在細(xì)胞表面的標(biāo)記分子。

2.根據(jù)其胞膜外區(qū)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的不同，人白細(xì)胞分化抗原可分為不同的家族和超家族。（二）分化群的概念

來(lái)自于不同實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體所識(shí)別的同一種分化抗原稱(chēng)為同一分化群（clusterofdifferentiation，CD）。（三）人白細(xì)胞分化抗原的功能人白細(xì)胞分化抗原根據(jù)其功能可分為受體和黏附分子。二、黏附分子（一）黏附分子的概念

是介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互結(jié)合和作用的分子的統(tǒng)稱(chēng)。受體配體黏附分子的作用方式（二）黏附分子的組成根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，黏附分子可分為免疫球蛋白超家族、整合素家族、選擇素家族、鈣黏蛋白家族及一些尚未歸類(lèi)的黏附分子。（三）黏附分子的功能1．參與免疫細(xì)胞之間的相互作用及活化

2．參與炎癥反應(yīng)中白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附

3．參與淋巴細(xì)胞歸巢

第三節(jié)細(xì)胞因子

細(xì)胞因子（cytokine）是由活化的免疫細(xì)胞及組織細(xì)胞合成并分泌的一類(lèi)小分子可溶性蛋白質(zhì)，具有多種生物學(xué)功能。一、細(xì)胞因子的共同特性（一）細(xì)胞因子的理化特性

小分子可溶性糖蛋白，大多數(shù)為單體，少數(shù)為雙體或三聚體。（二）細(xì)胞因子的作用方式①自分泌方式；②旁分泌方式；③內(nèi)分泌方式（三）細(xì)胞因子的作用特點(diǎn)①多效性；②重疊性；③協(xié)同性；④拮抗性；⑤網(wǎng)絡(luò)性二、細(xì)胞因子簡(jiǎn)介（一）白細(xì)胞介素（IL）（二）干擾素（IFN）（三）腫瘤壞死因子（TNF）（四）集落刺激因子（CSF）（五）趨化因子（六）生長(zhǎng)因子（GF）

三、細(xì)胞因子的主要生物學(xué)作用（一）調(diào)控免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化及功能（二）抗感染、抗腫瘤作用（三）刺激造血（四）誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡四、細(xì)胞因子的醫(yī)學(xué)意義（一）細(xì)胞因子與疾病的發(fā)生1．引起發(fā)熱和炎癥病理?yè)p害2．誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生3．導(dǎo)致某些免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病及代謝性疾?。ǘ┘?xì)胞因子與疾病的治療目前已批準(zhǔn)上市的重組細(xì)胞因子藥物廣泛用于感染、腫瘤、造血系統(tǒng)疾病等的治療已批準(zhǔn)上市的重組細(xì)胞因子藥物謝謝！第五章免疫應(yīng)答免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)免疫應(yīng)答是指抗原刺激機(jī)體所引起的免疫細(xì)胞對(duì)抗原產(chǎn)生的一系列免疫反應(yīng)的總稱(chēng)。免疫應(yīng)答可分為固有免疫和適應(yīng)性免疫兩大類(lèi)。第一節(jié)固有免疫應(yīng)答固有免疫又稱(chēng)先天性免疫或非特異性免疫，是人類(lèi)在長(zhǎng)期的種系發(fā)育進(jìn)化過(guò)程中逐漸建立起來(lái)的天然防御機(jī)制。固有免疫系統(tǒng)在組成上包括組織屏障、固有免疫細(xì)胞和固有免疫分子。其識(shí)別抗原不具有特異性，主要通過(guò)模式識(shí)別受體識(shí)別抗原，在感染早期發(fā)揮快速應(yīng)答作用。一、固有免疫系統(tǒng)的組成（一）組織屏障1．皮膚黏膜屏障2．血腦屏障3.血胎屏障（二）固有免疫細(xì)胞1.吞噬細(xì)胞（1）吞噬殺菌過(guò)程：①游走及識(shí)別②吞入③殺滅及消化（2）吞噬的后果：①完全吞噬②不完全吞噬

2.NK細(xì)胞（三）固有免疫分子

1.補(bǔ)體2.溶菌酶3.乙型溶素4.急性期蛋白二、固有免疫的生物學(xué)意義1．抗感染及抗腫瘤作用2．免疫穩(wěn)定作用3．參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答①啟動(dòng)適應(yīng)性免疫應(yīng)答②影響適應(yīng)性免疫應(yīng)答的類(lèi)型和強(qiáng)度③參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答的效應(yīng)階段第二節(jié)適應(yīng)性免疫應(yīng)答適應(yīng)性免疫又稱(chēng)為獲得性免疫或特異性免疫，是體內(nèi)T、B細(xì)胞識(shí)別抗原后，自身活化、增殖、分化為效應(yīng)細(xì)胞，產(chǎn)生一系列生物學(xué)效應(yīng)的全過(guò)程。適應(yīng)性免疫應(yīng)答分類(lèi)：

1）根據(jù)參與的細(xì)胞類(lèi)型和效應(yīng)，分為細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答；

2）根據(jù)與抗原的接觸次數(shù)分為初次應(yīng)答和再次應(yīng)答；

3）根據(jù)免疫反應(yīng)的結(jié)果分為正免疫應(yīng)答和負(fù)免疫應(yīng)答；

4）根據(jù)免疫反應(yīng)對(duì)機(jī)體的損傷程度分為正常免疫應(yīng)答和超敏反應(yīng)。一、免疫應(yīng)答的基本過(guò)程①感應(yīng)階段（抗原提呈與識(shí)別階段）②反應(yīng)階段（活化、增殖、分化階段）③效應(yīng)階段適應(yīng)性免疫應(yīng)答的特點(diǎn)：①特異性

②記憶性

③放大性

④MHC限制性二、抗原的加工、處理和提呈過(guò)程APC攝取、加工、處理抗原形成抗原肽，并將其與自身

的MHC分子結(jié)合形成復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞表面，供T細(xì)胞

識(shí)別、誘導(dǎo)T細(xì)胞活化的過(guò)程稱(chēng)為抗原提呈。根據(jù)來(lái)源不同抗原可分為內(nèi)源性抗原和外源性抗原兩類(lèi)。內(nèi)源性抗原：以抗原肽-MHCⅠ類(lèi)分子復(fù)合物的形式提呈給CD8+T細(xì)胞識(shí)別；外源性抗原：以抗原肽-MHCⅡ類(lèi)分子復(fù)合物的形式提呈給CD4+T細(xì)胞識(shí)別。（一）內(nèi)源性抗原的提呈（二）外源性抗原的提呈三、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答細(xì)胞免疫應(yīng)答是指在抗原刺激下，T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為效應(yīng)T細(xì)胞（Th1細(xì)胞和CTL細(xì)胞）發(fā)揮特異性免疫應(yīng)答的過(guò)程。能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的抗原主要是TD-Ag，參與細(xì)胞免疫應(yīng)答的細(xì)胞包括APC、CD4+Th1和CD8+CTL細(xì)胞。（一）細(xì)胞免疫應(yīng)答的基本過(guò)程細(xì)胞免疫的基本過(guò)程包括：

①T細(xì)胞識(shí)別特異性抗原階段；②T細(xì)胞的活化、增殖與分化；

③效應(yīng)階段。包括CD4+Th1細(xì)胞的活化和CD8+CTL細(xì)胞的活化。1．T細(xì)胞識(shí)別特異性抗原階段1）對(duì)抗原的攝?。?/p>

吞噬、吞飲及受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用2）對(duì)抗原的加工、處理和提呈:

外源性抗原:APC/MHCⅡ

CD4+T細(xì)胞

內(nèi)源性抗原:APC或靶細(xì)胞/MHCⅠ

CD8+T細(xì)胞2.T細(xì)胞的活化增殖與分化1）活化信號(hào)1(抗原識(shí)別信號(hào))

*雙識(shí)別:TCR-肽/MHCⅡ或MHCⅠ

*共受體:CD4-MHCⅡ/CD8-MHCⅠ

*CD3傳遞特異性抗原識(shí)別信號(hào)2）活化信號(hào)2(共刺激信號(hào))

如B7-CD28等共刺激分子結(jié)合3）細(xì)胞因子(如IL-1等)

是T細(xì)胞充分活化重要條件T細(xì)胞活化的雙信號(hào)（CD4+Th細(xì)胞為例）CD4+T細(xì)胞的增殖分化

活化T細(xì)胞

表達(dá)多種細(xì)胞因子及受體

T細(xì)胞克隆增殖

分化為T(mén)h0

分化成Th1分化成Th2(細(xì)胞免疫）（體液免疫）

IL-12,IFN-gIL-4IL-2+IL-2RTh細(xì)胞非依賴(lài)性（直接活化）

由病毒感染的APC直接激活CD8+T細(xì)胞，無(wú)須Th細(xì)胞輔助。Th細(xì)胞依賴(lài)性（間接活化）

此種靶細(xì)胞一般低表達(dá)或不表達(dá)協(xié)同刺激分子，需在APC和CD4+T細(xì)胞輔助下才能有效激活CD8+T細(xì)胞增殖。CD8+T細(xì)胞的增殖分化3．效應(yīng)階段CD4+Th1細(xì)胞釋放細(xì)胞因子引起炎癥反應(yīng)；CD8+CTL釋放穿孔素和顆粒酶等導(dǎo)致靶細(xì)胞凋亡。（二）T細(xì)胞的免疫效應(yīng)1．CD4+Th1細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)

通過(guò)釋放IL-2、TNF-β和IFN-γ等細(xì)胞因子，募集和活化單核/巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，使局部組織產(chǎn)生以單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)為主的慢性炎癥反應(yīng)或遲發(fā)型超敏反應(yīng)。2．CD8+CTL細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用CTL在特異性抗原刺激下，可高效、特異性殺傷靶細(xì)胞。殺傷途徑：①穿孔素/顆粒酶途徑

②Fas/FasL途徑靶細(xì)胞顆粒酶穿孔素穿孔素小孔FADD半胱天冬酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)細(xì)胞凋亡顆粒酶引發(fā)劑半胱天冬酶穿孔素-顆粒酶途徑FasL/Fas途徑CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制（三）細(xì)胞免疫的生物學(xué)意義1．抗感染2．抗腫瘤3．免疫病理?yè)p傷四、B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答體液免疫應(yīng)答是指在抗原刺激下，B細(xì)胞活化、增殖，分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞合成并分泌抗體，發(fā)揮特異性免疫效應(yīng)的全過(guò)程。體液免疫應(yīng)答可分為對(duì)TD-Ag的免疫應(yīng)答和對(duì)TI-Ag的免疫應(yīng)答，前者需要Th的輔助，后者不需要。（一）B細(xì)胞對(duì)TD-Ag的免疫應(yīng)答1．感應(yīng)階段（B細(xì)胞對(duì)TD-Ag的識(shí)別）

B細(xì)胞通過(guò)BCR識(shí)別特異性抗原此為B細(xì)胞活化的第一信號(hào)。Igα和Igβ把第一信號(hào)傳遞到胞內(nèi)，協(xié)同受體CD19、CD21和CD81輔助第一信號(hào)的傳遞。2.反應(yīng)階段（B細(xì)胞的活化、增殖與分化）B細(xì)胞活化需要雙信號(hào)：

1）第一信號(hào)：B細(xì)胞表面的BCR與特異性抗原結(jié)合；

2）第二信號(hào)：共刺激分子提供

CD40（B細(xì)胞）+CD40L（Th細(xì)胞）

只有活化的T細(xì)胞能夠表達(dá)CD40L，所以如果B細(xì)胞要獲得活化的第二信號(hào)，必須首先活化T細(xì)胞。細(xì)胞免疫反應(yīng)：

Ag

APCTTh激活的T細(xì)胞表達(dá)CD40L，它可以為B細(xì)胞的活化提供第二信號(hào)。B細(xì)胞與T細(xì)胞相互作用示意圖3．效應(yīng)階段是漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體發(fā)揮特異性體液免疫效應(yīng)的階段?？贵w發(fā)揮作用需借助機(jī)體其他免疫細(xì)胞或分子的協(xié)同，其效應(yīng)包括中和作用、調(diào)理作用、活化補(bǔ)體、ADCC效應(yīng)等。（二）TI-Ag誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答TI-Ag可分為T(mén)I-1抗原和TI-2抗原兩類(lèi)。TI-1抗原包括細(xì)菌脂多糖、聚合鞭毛素等，通過(guò)雙信號(hào)激活成熟和不成熟的B細(xì)胞產(chǎn)生低親和力抗體IgM。TI-2抗原包括細(xì)菌胞壁多糖、莢膜多糖等，其具有高度重復(fù)的結(jié)構(gòu)，能引起mIg廣泛交聯(lián)，激活B1細(xì)胞。B細(xì)胞對(duì)TI-Ag應(yīng)答的意義TI-Ag能直接刺激B細(xì)胞，無(wú)需APC作用和Th細(xì)胞的輔助，不產(chǎn)生記憶細(xì)胞，無(wú)再次應(yīng)答，且只能產(chǎn)生IgM類(lèi)抗體。由于大多數(shù)胞外菌具有胞壁多糖，能抗吞噬，在感染早期無(wú)特異性T細(xì)胞輔助下，B細(xì)胞對(duì)TI-Ag產(chǎn)生免疫應(yīng)答形成的抗體，能通過(guò)調(diào)理作用促進(jìn)吞噬。（三）抗體產(chǎn)生的一般規(guī)律初次應(yīng)答再次應(yīng)答潛伏期長(zhǎng)（1~2周）短（初次應(yīng)答的一半）抗體濃度低高抗體維持時(shí)間短長(zhǎng)抗體類(lèi)型以低親和力抗體IgM為主以高親和力抗體IgG為主初次應(yīng)答與再次應(yīng)答示意圖初次應(yīng)答再次應(yīng)答抗體產(chǎn)生一般規(guī)律的意義：①可準(zhǔn)確把握疫苗接種或制備免疫血清的接種次數(shù)和間隔時(shí)間，獲得最佳免疫效果；②特異性IgM可作為傳染病早期診斷的依據(jù)；③根據(jù)抗體含量變化掌握患者病程及評(píng)估疾病轉(zhuǎn)歸，若恢復(fù)期血清抗體濃度較發(fā)病初期增長(zhǎng)4倍以上有診斷意義。第三節(jié)免疫耐受免疫耐受：是指免疫系統(tǒng)對(duì)某種抗原刺激產(chǎn)生的特異性免疫無(wú)應(yīng)答狀態(tài)。免疫耐受具有特異性，僅對(duì)特定抗原不應(yīng)答，不影響對(duì)其他抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，與免疫缺陷、免疫抑制有著本質(zhì)的區(qū)別。一、免疫耐受形成的條件（一）抗原因素①抗原劑量：抗原劑量過(guò)高或過(guò)低均可；

②抗原性質(zhì)：多為小分子、可溶性、非聚合單體；

③免疫途徑：口服最易，皮下或皮內(nèi)注射最難。（二）機(jī)體因素機(jī)體的年齡、發(fā)育階段、生理狀態(tài)和遺傳背景以及所處的環(huán)境因素等均可影響免疫耐受的形成。二、免疫耐受發(fā)生的機(jī)制（一）中樞耐受T、B細(xì)胞在中樞免疫器官發(fā)育的過(guò)程中，經(jīng)過(guò)陰性選擇以建立對(duì)自身抗原的耐受，稱(chēng)為中樞免疫耐受。（二）外周耐受成熟淋巴細(xì)胞在外周免疫器官遇到自身或外源性抗原形成的耐受稱(chēng)為外周免疫耐受。第四節(jié)超敏反應(yīng)超敏反應(yīng)也稱(chēng)為變態(tài)反應(yīng),是指機(jī)體接受某些抗原刺激時(shí)所出現(xiàn)的以生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主的異常適應(yīng)性免疫應(yīng)答。根據(jù)其發(fā)生機(jī)制和臨床特點(diǎn)的不同，可將其分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。一、Ⅰ型超敏反應(yīng)Ⅰ型超敏反應(yīng)又稱(chēng)為速發(fā)型超敏反應(yīng)或過(guò)敏反應(yīng)，是最常見(jiàn)的超敏反應(yīng)。特點(diǎn)為：

①發(fā)生快，消退快；

②常引起生理功能紊亂，極少發(fā)生組織細(xì)胞損傷；

③由IgE抗體介導(dǎo)；

④具有明顯個(gè)體差異和遺傳傾向。（一）參與Ⅰ型超敏反應(yīng)的主要成分1．變應(yīng)原①藥物或化學(xué)物質(zhì)

②吸入性變應(yīng)原

③食入性變應(yīng)原

④某些酶類(lèi)物質(zhì)2．IgE抗體變應(yīng)原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性IgE抗體是Ⅰ型超敏反應(yīng)發(fā)生的先決條件。3．參與細(xì)胞（1）肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞（2）嗜酸性粒細(xì)胞4．生物學(xué)活性介質(zhì)包括組胺、激肽原酶、PAF、LTs、PGD2、各種細(xì)胞因子（如IL-4、IL-13、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子）等。其效應(yīng)作用包括：

①毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加；

②平滑肌痙攣；

③腺體分泌增加；

④刺激感覺(jué)神經(jīng)。（二）發(fā)生機(jī)制207致敏階段發(fā)敏階段效應(yīng)階段Ⅰ型超敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制示意圖（三）臨床常見(jiàn)疾病1．過(guò)敏性休克（1）藥物過(guò)敏性休克（2）血清過(guò)敏性休克

2．呼吸道過(guò)敏反應(yīng)3．消化道過(guò)敏反應(yīng)4．皮膚過(guò)敏反應(yīng)蕁麻疹（四）防治原則1．查明變應(yīng)原，避免再接觸2．脫敏療法（1）異種免疫血清脫敏療法（2）特異性變應(yīng)原脫敏療法3．藥物治療二、Ⅱ型超敏反應(yīng)Ⅱ型超敏反應(yīng)是由特異性IgG和IgM類(lèi)抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，在補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞和NK細(xì)胞的參與下引起以細(xì)胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫應(yīng)答，又稱(chēng)為細(xì)胞毒型或細(xì)胞溶解型超敏反應(yīng)。（一）發(fā)生機(jī)制1．靶細(xì)胞及其表面抗原①正常細(xì)胞表面的同種異型抗原；②異嗜性抗原；③改變或修飾的自身抗原；④結(jié)合在自身組織細(xì)胞表面等的藥物抗原或抗原-抗體復(fù)合物。2.參與抗體IgG和IgM抗體Ⅱ型超敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制示意圖（二）臨床常見(jiàn)疾病1.輸血反應(yīng)2.新生兒溶血癥3.藥物過(guò)敏性血細(xì)胞減少癥4.自身免疫性溶血性貧血5.肺出血-腎炎綜合征（Goodpasture'ssyndrome）6.甲狀腺功能亢進(jìn)（Graves?。┤ⅱ笮统舴磻?yīng)Ⅲ型超敏反應(yīng)又稱(chēng)為免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng)，是IgG、IgM、IgA類(lèi)抗體與相應(yīng)抗原形成中等大小可溶性免疫復(fù)合物，沉積在毛細(xì)血管基底膜后，激活補(bǔ)體，在中性粒細(xì)胞、血小板、肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞等的參與下，引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主要特征的炎癥反應(yīng)和組織損傷。（一）發(fā)生機(jī)制1．可溶性免疫復(fù)合物的形成與沉積①大分子IC吞噬細(xì)胞吞噬、清除②小分子IC腎小球?yàn)V過(guò)排出③中等大小的IC沉積于毛細(xì)血管基底膜

（Ⅲ型超敏反應(yīng)）Ⅲ型超敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制示意圖（二）臨床常見(jiàn)疾病1．局部免疫復(fù)合物?。?）Arthus反應(yīng)（2）類(lèi)Arthus反應(yīng)2．全身免疫復(fù)合物?。?）血清?。?）鏈球菌感染后腎小球腎炎（3）類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（4）系統(tǒng)性紅斑狼瘡四、Ⅳ型超敏反應(yīng)Ⅳ型超敏反應(yīng)又稱(chēng)為遲發(fā)型超敏反應(yīng)（delayedtypehypersensitivity，DTH），是由T細(xì)胞介導(dǎo)的以單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)和組織細(xì)胞損傷為主要特征的炎癥反應(yīng)。特點(diǎn)：

①反應(yīng)發(fā)生較慢，通常在接觸抗原24～72小時(shí)后出現(xiàn)；

②發(fā)生部位多在變應(yīng)原進(jìn)入的局部；

③一般無(wú)明顯個(gè)體差異。（一）發(fā)生機(jī)制1．誘導(dǎo)Ⅳ型超敏反應(yīng)的抗原主要為胞內(nèi)寄生菌、病毒、寄生蟲(chóng)和化學(xué)物質(zhì)等。2．效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和組織損傷效應(yīng)T細(xì)胞包括CD4+Th1細(xì)胞和CD8+CTL。Ⅳ型超敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制示意圖（二）臨床常見(jiàn)疾病1．傳染性遲發(fā)型超敏反應(yīng)2．接觸性皮炎3．移植排斥反應(yīng)謝謝！免疫原和抗體的制備免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)—*—

第一節(jié)免疫原的制備免疫原的制備一、顆粒性免疫原的制備（綿羊紅細(xì)胞/細(xì)菌）二、可溶性免疫原的制備（蛋白質(zhì)）三、人工抗原的制備四、免疫佐劑綿羊紅細(xì)胞抗原的制備

采集健康綿羊的頸靜脈血后，立即注入無(wú)菌干燥有玻璃珠的三角燒瓶?jī)?nèi)，充分搖動(dòng)15～20min，去除纖維蛋白，再以無(wú)菌生理鹽水洗滌3次，然后取壓積紅細(xì)胞，配成1×106/ml或2%～5%的細(xì)胞懸液，置4°C保存可使用3周左右。一、顆粒性免疫原的制備細(xì)菌抗原的制備

細(xì)菌抗原有鞭毛抗原和菌體抗原等，選取鑒定合格的標(biāo)準(zhǔn)菌株，接種于固體或液體培養(yǎng)基，經(jīng)集菌后處理。鞭毛抗原需用有動(dòng)力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛處理，而菌體抗原則需要在100℃加溫2～2.5小時(shí)后應(yīng)用。（傷寒桿菌菌體抗原→“O”抗原；傷寒桿菌鞭毛抗原→“H”抗原。）

一、顆粒性免疫原的制備可溶性抗原包括蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、細(xì)菌毒素、酶類(lèi)和核酸等，這些抗原大多來(lái)源于人和動(dòng)物的組織或細(xì)胞，其成分復(fù)雜，通常需要先將組織或細(xì)胞破碎，再經(jīng)一定的方法提取和純化后才能獲得。下面以蛋白質(zhì)類(lèi)抗原的制備為例，介紹可溶性免疫原的制備流程。二、可溶性免疫原的制備（1）組織勻漿的制備方法：①高速搗碎法：在組織中加入適量生理鹽水，裝入搗碎機(jī)筒內(nèi)，間斷粉碎。此法主要適用于內(nèi)臟組織。②研磨法：用玻璃勻漿器或乳缽研磨，經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)、擠壓將組織粉碎，此法主要適用于較軟嫩的組織（如腦、胰等）。二、可溶性免疫原的制備（2）細(xì)胞的破碎方法：反復(fù)凍融法超聲破碎法酶處理法自溶法表面活性劑處理法二、可溶性免疫原的制備（3）可溶性抗原的提取與純化方法1：超速離心法方法2：選擇性沉淀法方法3：凝膠過(guò)濾法方法4：離子交換層析法方法5：親和層析法二、可溶性抗原的制備可溶性抗原的提取與純化超速離心法是利用抗原的比重不同而進(jìn)行分離的方法，可分為差速離心法和梯度離心法。差速離心法是指低速與高速離心交替進(jìn)行，用于分離比重大小差異較大的抗原。梯度離心法是利用樣品中各顆粒在一定密度梯度介質(zhì)中沉降速度或漂浮速度不同，使具有不同沉浮速度的物質(zhì)位于不同密度的梯度層內(nèi)從而進(jìn)行分離?？扇苄钥乖奶崛∨c純化選擇性沉淀法根據(jù)不同蛋白質(zhì)理化特性上的差異，采用各種沉淀劑或改變某些條件促使某一抗原成分沉淀，從而達(dá)到純化的目的。常用的方法有：鹽析沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法、聚合物沉淀法、核酸去除法等。動(dòng)畫(huà)：鹽析沉淀法粗提IgG類(lèi)抗體可溶性抗原的提取與純化凝膠過(guò)濾法是利用凝膠的分子篩作用，從而使分子量不同的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。通過(guò)凝膠的分子篩作用，使蛋白質(zhì)分子由大到小依次分離，從而達(dá)到純化目的。動(dòng)畫(huà)：凝膠過(guò)濾純化抗原可溶性抗原的提取與純化離子交換層析法利用一些帶離子基團(tuán)的纖維素或凝膠作離子交換劑，吸附交換帶有相反電荷的蛋白質(zhì)抗原，將蛋白質(zhì)抗原按所帶電荷不同或量的差異分成不同的組分。動(dòng)畫(huà)：離子交換層析純化抗原可溶性抗原的提取與純化親和層析法根據(jù)生物大分子之間具有的專(zhuān)一性親和力而設(shè)計(jì)的層析技術(shù)，在一定的條件下，二者能緊密地結(jié)合成復(fù)合物。如果將復(fù)合物中的已知一方固定于固相載體上，則可從溶液中特異地分離和提純另一方。動(dòng)畫(huà)：親和層析純化抗原（4）純化抗原的鑒定鑒定內(nèi)容主要包括分子量、含量、純度和免疫學(xué)活性等。（5）純化抗原的保存

液態(tài)或干燥狀態(tài)低溫保存。二、可溶性抗原的制備人工結(jié)合抗原人工合成抗原基因工程抗原三、人工抗原的制備1．載體的選擇蛋白質(zhì)類(lèi)、多肽聚合物、大分子聚合物等2．半抗原與載體的連接方法物理方法和化學(xué)方法3．人工結(jié)合免疫原的鑒定一般認(rèn)為至少要有20個(gè)以上的半抗原連接在一個(gè)載體分子上，才能有效地刺激免疫動(dòng)物產(chǎn)生抗體。三、人工抗原的制備人工結(jié)合抗原的制備用化學(xué)方法將活化氨基酸聚合，使之成為合成多肽，即人工合成抗原。由一種氨基酸形成的聚合體稱(chēng)為同聚多肽，由兩種或兩種以上氨基酸形成的聚合物稱(chēng)為共聚多肽。三、人工抗原的制備人工合成抗原的制備

利用分子生物學(xué)技術(shù)可將編碼免疫原性氨基酸序列的基因克隆并與適當(dāng)載體DNA分子相結(jié)合，然后轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中使之表達(dá)，可獲得具有免疫原性的重組蛋白，經(jīng)純化后可作為抗原，即基因工程抗原。三、人工抗原的制備基因工程抗原的制備概念

免疫佐劑簡(jiǎn)稱(chēng)佐劑，是先于抗原或與抗原一起注入機(jī)體，可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的特異性免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類(lèi)型的物質(zhì)?？梢暈橐活?lèi)非特異性的免疫增強(qiáng)劑。四、免疫佐劑佐劑的種類(lèi)

無(wú)機(jī)佐劑有機(jī)佐劑合成佐劑油劑（弗氏佐劑）四、免疫佐劑弗氏佐劑弗氏佐劑（弗氏完全佐劑=弗氏不完全佐劑+卡介苗）四、免疫佐劑弗氏佐劑使用弗氏佐劑免疫動(dòng)物前，將佐劑與抗原體積比1:1混合，制成油包水狀態(tài)，檢測(cè)乳化是否成功的方法有：研磨法、注射器混合法。四、免疫佐劑注射器混合法佐劑的生物學(xué)作用增強(qiáng)抗原的免疫原性，使無(wú)或弱免疫原性的物質(zhì)成為持久或強(qiáng)免疫原；增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原刺激的反應(yīng)性，提高機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體的效價(jià)；促進(jìn)抗體類(lèi)型轉(zhuǎn)換，使產(chǎn)生的抗體由IgM轉(zhuǎn)變?yōu)镮gG；引起或增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)。四、免疫佐劑佐劑的作用機(jī)制改變抗原的物理性狀，延緩抗原的降解和清除，從而更有效地刺激免疫系統(tǒng)；刺激單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，增強(qiáng)其處理和提呈抗原的能力；刺激淋巴細(xì)胞增殖和分化，擴(kuò)大和增強(qiáng)免疫應(yīng)答的效應(yīng)。四、免疫佐劑佐劑的應(yīng)用原則可溶性免疫原和人工抗原，為取得較好的免疫效果初次免疫時(shí)須使用佐劑。顆粒性抗原因具有較強(qiáng)的免疫原性，一般不需加入佐劑。四、免疫佐劑抗血清/免疫血清/PcAb概念天然抗原常含有多種抗原決定簇，可刺激動(dòng)物體內(nèi)多個(gè)B細(xì)胞克隆針對(duì)該抗原的多種抗原決定簇產(chǎn)生不同的抗體，稱(chēng)為多克隆抗體（PcAb）。將抗原以不同途徑免疫動(dòng)物，可從動(dòng)物血清中分離得到抗體，因而把這類(lèi)含有抗體的血清稱(chēng)為抗血清或免疫血清。第二節(jié)抗血清的制備免疫動(dòng)物選擇（1）動(dòng)物種屬的選擇：Ag與免疫動(dòng)物種系差異越大，效果越好；（2）動(dòng)物個(gè)體的選擇：動(dòng)物個(gè)體適齡（體重符合要求）、健壯、無(wú)感染性疾?。ㄒ诵坌裕?）抗血清的用量和要求：R型（兔型）→等價(jià)帶寬→診斷試劑/H型（馬型）→等價(jià)帶窄→治療試劑；抗體數(shù)量需求多→大動(dòng)物（4）抗原的性質(zhì):適宜（蛋白質(zhì)→家兔、山羊/類(lèi)固醇激素→家兔/酶類(lèi)→豚鼠）；不適宜（IgE→綿羊/多種酶→山羊/胰島素→家兔）第二節(jié)抗血清的制備免疫劑量、途徑和時(shí)間（1）免疫量：在一定范圍內(nèi)，越大越好；（2）免疫途徑：皮內(nèi)（初次免疫）、皮下、肌肉、靜脈（加強(qiáng)免疫）、腹腔、淋巴結(jié)（抗原量少、珍貴）、腳掌等；（3）免疫時(shí)間間隔：第1次與第2次→10～20d；第2次之后→7～10d。第二節(jié)抗血清的制備動(dòng)物采血（1）時(shí)間：動(dòng)物免疫3～5次后，可取少量血清檢測(cè)抗體效價(jià)與特異性，測(cè)試合格后，應(yīng)在末次免疫后5d～7d及時(shí)采血分離血清，采血前動(dòng)物禁食24h。第二節(jié)抗血清的制備動(dòng)物采血（2）方法：1）頸動(dòng)脈放血法：最常用的方法；

2）心臟采血法：小動(dòng)物；3）靜脈采血法：可多次采；

4）其他方法：摘除眼球、斷尾。第二節(jié)抗血清的制備抗血清的分離和純化（1）抗血清分離：血液自然凝固，分離血清。（2）抗血清純化1）特異性抗體的純化：親和層析法、吸附法。

2）IgG類(lèi)抗體的純化：鹽析、凝膠過(guò)濾、離子交換層析、親和層析。第二節(jié)抗血清的制備抗血清的鑒定（1）效價(jià)：放射免疫法/凝集反應(yīng)/雙擴(kuò)（舉例）等。（2）特異性：雙擴(kuò)等。（3）純度：電泳等。（4）親和力：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等。第二節(jié)抗血清的制備提問(wèn)根據(jù)下圖回答：此抗原為顆粒性抗原還是可溶性抗原？抗體的效價(jià)是多少？答案：可溶性抗原；效價(jià)為1：8第二節(jié)抗血清的制備提問(wèn)根據(jù)下面的雙擴(kuò)圖結(jié)果判斷：抗體是否純化成功？答案：純化不成功第二節(jié)抗血清的制備抗血清的保存（1）4℃保存，存3～6個(gè)月，加防腐劑。（2）低溫保存，－20℃～－40℃，在3～5年。（3）冷凍真空干燥保存，水分＜0.2％，5～10年第二節(jié)抗血清的制備單克隆抗體的概念/特性概念：是由單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的僅針對(duì)一種抗原表位的高特異性抗體，可用雜交瘤技術(shù)制備。特性：理化性狀專(zhuān)一、生物活性專(zhuān)一、特異性強(qiáng)、純度高、易于標(biāo)準(zhǔn)化。第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的總體思路Ag致敏B細(xì)胞（產(chǎn)Ab）骨髓瘤細(xì)胞（無(wú)限繁殖）雜交瘤細(xì)胞（產(chǎn)Ab+無(wú)限繁殖）單克隆抗體（McAb）兩種細(xì)胞融合后產(chǎn)生的雜交細(xì)胞可同時(shí)保持雙方親代細(xì)胞的主要生物學(xué)特征第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本過(guò)程克隆選擇學(xué)說(shuō)/細(xì)胞代謝缺陷補(bǔ)救的機(jī)制Ag（SRBC：多種表位）小鼠脾細(xì)胞（產(chǎn)Ab）小鼠骨髓瘤細(xì)胞（長(zhǎng)期繁殖）+細(xì)胞融合PEGHAT培養(yǎng)篩選、檢測(cè)、克隆化B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞株（目標(biāo)株）McAb第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)微課：?jiǎn)慰寺】贵w制備的基本過(guò)程單克隆抗體制備的基本方法（1）細(xì)胞的選擇與制備1)免疫脾細(xì)胞動(dòng)物要求：與所用骨髓瘤細(xì)胞同源（小鼠），3～5只鼠齡8～12w的BALB/c健康小鼠?？乖螅侯w粒性抗原/可溶性抗原（+弗氏完全佐劑）。免疫途徑：腹腔或皮內(nèi)。第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法2)骨髓瘤細(xì)胞要求：來(lái)源與制備脾細(xì)胞動(dòng)物同一品系；細(xì)胞株穩(wěn)定，易培養(yǎng)；自身不分泌免疫球蛋白及細(xì)胞因子；HGPRT缺陷株；融合效率高。目前常用的小鼠骨髓細(xì)胞瘤為Sp2/0和NS-1細(xì)胞株。第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法3)飼養(yǎng)細(xì)胞常用：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞制備方法：冷凍果糖液注射腹腔，輕柔腹部幾次，吸出腹腔液，內(nèi)含巨噬細(xì)胞。第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法（2）細(xì)胞融合脾C（4份）+骨髓瘤C（1份）PEG，2min培養(yǎng)液稀釋混合物培養(yǎng)板孔中培養(yǎng)第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法融合后的細(xì)胞混合物脾細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞脾-脾細(xì)胞脾-瘤細(xì)胞第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)（3）雜交瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)單克隆抗體制備的基本方法（3）雜交瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)1）DNA合成途徑主要合成途徑【原料：糖、AA、葉酸】替代途徑【原料：次黃嘌呤（H）、胸腺嘧啶核苷（T）、HGPRT、TK】第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法2）HAT培養(yǎng)基次黃嘌呤（H）、甲氨蝶呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T）。其中A為葉酸拮抗劑。3）HAT培養(yǎng)混合細(xì)胞經(jīng)HAT培養(yǎng)后僅有脾-骨髓瘤C（混合物：針對(duì)Ag多種表位）。第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法（4）雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)與凍存從針對(duì)不同表位的雜交瘤細(xì)胞群體中篩選出針對(duì)目的抗原表位的特異性抗體分泌細(xì)胞。篩選的方法：多次進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，即克隆化。克隆化最常用的方法：有限稀釋法。第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)有限稀釋法連續(xù)稀釋雜交瘤細(xì)胞懸液，使96孔板培養(yǎng)板每孔細(xì)胞數(shù)為一個(gè)，取每孔上清液，測(cè)抗體含量，抗體高分泌孔，多次克隆化（3～5次），獲雜交瘤細(xì)胞克隆。123456第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法（4）雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)與凍存陽(yáng)性克?。杭皶r(shí)凍存，液氮冷凍保存法（-196℃）第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法（5）McAb的大量制備1）體外培養(yǎng)法（單層細(xì)胞培養(yǎng)法、高密度培養(yǎng)法）2）動(dòng)物體內(nèi)誘生法（小鼠腹腔接種）第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體制備的基本方法（6）McAb的純化與鑒定1）純化（方法：親和層析等）2）鑒定（方法：ELISA等）第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)單克隆抗體在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用臨床診斷臨床治療蛋白質(zhì)的純化“探針”作用第三節(jié)單克隆抗體制備技術(shù)基因工程抗體（GeAb）概念又稱(chēng)重組抗體，是指利用重組DNA及蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)編碼抗體的基因按不同需要進(jìn)行加工改造和重新裝配，經(jīng)轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞所表達(dá)的抗體分子。第四節(jié)基因工程抗體基因工程抗體（GeAb）分類(lèi)（1）人源化抗體：用基因克隆及DNA重組技術(shù)改造鼠源性單克隆抗體，使其大部分氨基酸序列被人源序列所取代，重新表達(dá)的抗體。

包括：人-鼠嵌合抗體、CDR植入抗體。第四節(jié)基因工程抗體人源化抗體示意圖基因工程抗體（GeAb）分類(lèi)（2）小分子抗體：由抗體分子中抗原結(jié)合部位片段組建而成的抗體。

包括：抗原結(jié)合片段（Fab）、可變區(qū)片段（Fv）、單鏈可變區(qū)片段（ScFv）、單區(qū)抗體（SdAb）。第四節(jié)基因工程抗體