實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)課件

第十二章轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育技術(shù)一.概況二.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的原理和方法三.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用第十二章轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育技術(shù)一.概況二.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的原理和方法三.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用第十二章實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胚胎工程的基本內(nèi)容一、超數(shù)排卵(Superovulation)1．幾種常用于超數(shù)排卵的激素

2．超數(shù)排卵(Superovulation)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的應(yīng)用二、胚胎培養(yǎng)(EmbryoCUlture)三、胚胎保存(Embryopreservation)四、胚胎移植(Embryotransfer)

9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)五、胚胎分割(Embryosplit)六、體外受精(InVitrofertilization)七、顯微受精(Microfenilization)又稱(chēng)輔助受精(Assistedfertilization)八、細(xì)胞核移植(Nucleartransplantation)九、卵的激活與孤雌發(fā)育(Ocyteactivationandparthenogeneticdevelopment)十、胚胎干細(xì)胞(Embryonicstemcell)簡(jiǎn)稱(chēng)ES細(xì)胞9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)第二節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物冷凍胚胎庫(kù)的建立

一、器材和試劑1．器材(1)液氮罐(2)生物冷凍儀(3)解剖顯微鏡、冰箱、CO2培養(yǎng)箱、滲透壓測(cè)定儀(4)手術(shù)器械、注射器、針頭、玻璃表面皿、玻璃細(xì)管、胚胎管(0．25m1)或安瓿等(5)針頭過(guò)濾器，0．22um和0．45um孔徑的濾膜

9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)2．試劑藥品3．溶液配制4．操作程序(1)超數(shù)排卵(2)采集胚胎(3)挑選胚胎(4)胚胎凍存(5)資料(6)入庫(kù)的各品種品系胚胎，必須分2份以上，放存在不同罐內(nèi)和不同地方(7)當(dāng)需要使用胚胎和檢測(cè)胚胎時(shí)，取出機(jī)動(dòng)胚胎管，按凍存方法條件，采用相應(yīng)的解凍方法解凍、復(fù)蘇(8)每個(gè)品種品系凍存胚胎數(shù)量9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)第三節(jié)試管動(dòng)物的培育

一、試管小鼠的培育(一)器材和試劑藥品1．器材設(shè)備2．試劑藥品(二)溶液配制(三)方法步驟1．小鼠精子采集與獲能2．小鼠卵子獲取3．體外受精

9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)4．受精卵培養(yǎng)5．胚胎移植二、試管兔的培育(一)幾種溶液的配制1．培養(yǎng)液成份2．PBS液3．TCM—199液配制4．DM(DefinedMedium)(二)精液采集和獲能1．采集精液2．精子獲能(三)供體母兔超排

9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)(四)受體母兔同步發(fā)情(五)供體母兔注射HCG(六)體外受精(七)受精卵培養(yǎng)(八)胚胎移植三、試管獼猴的培育

(一)溶液配制(二)超排(三)采卵(四)采精與精子獲能1．電刺激采精器2．用直腸探子法的采精技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)第十二章轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育技術(shù)一.概況二.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的原理和方法三.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用第十二章轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育技術(shù)一.概況二.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的原理和方法三.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用第四節(jié)

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育技術(shù)一.概況

二.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的原理和方法三.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用

9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)一.概況一、概況9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

一、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物定義

是利用基因工程和胚胎工程技術(shù)，改變動(dòng)物遺傳性狀的新方法，是將外源基因?qū)雱?dòng)物的受精卵，再將受精卵植入到代孕動(dòng)物的輸卵管或子宮中培育的動(dòng)物。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)定義采用基因轉(zhuǎn)移技術(shù)使目的基因整合入受精卵細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞，然后將細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物子宮，使之發(fā)育成個(gè)體。

轉(zhuǎn)基因——被導(dǎo)入的目的基因轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(transgenicanimal)——目的基因的受體動(dòng)物9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)目錄9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

激素轉(zhuǎn)基因鼠(碩鼠)，右邊為同胞鼠對(duì)照。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)核轉(zhuǎn)移技術(shù)

即動(dòng)物整體克隆技術(shù)，將動(dòng)物體細(xì)胞核全部導(dǎo)入另一個(gè)體的去胞核的受精卵內(nèi)，使之發(fā)育成個(gè)體，即克隆(clone)。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)基因剔除技術(shù)也稱(chēng)基因靶向(genetargeting)滅活，有目的去除動(dòng)物體內(nèi)某種基因的技術(shù)。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（transgenicanimals）是指染色體基因組中整合有外源基因并能遺傳給后代的一類(lèi)動(dòng)物。整合到動(dòng)物染色體基因組的外源基因被稱(chēng)為轉(zhuǎn)基因(transgene)。轉(zhuǎn)基因技術(shù)則是指制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物所需的一套技術(shù)，它涉及外源基因的組建、載體、受體、基因?qū)爰夹g(shù)、供轉(zhuǎn)基因胚胎發(fā)育的體外培養(yǎng)系統(tǒng)和宿主動(dòng)物等許多方面。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)二、克隆動(dòng)物克隆動(dòng)物技術(shù)主要包括三個(gè)步驟1.制備成熟的卵細(xì)胞2.細(xì)胞核移植，將供體細(xì)胞的細(xì)胞核與去核的卵細(xì)胞融合成一個(gè)雜合細(xì)胞3.將“核質(zhì)融合”的卵細(xì)胞移植到借腹懷孕動(dòng)物的子宮發(fā)育直到出生9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)2.研究現(xiàn)狀

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物自1980--1981年產(chǎn)生后，迅速發(fā)展?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)及生物學(xué)領(lǐng)域。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域己用于遺傳病、腫瘤、心血管疾病、免疫性疾病的研究，包括建立疾病的病理模型，探討其病因、發(fā)病機(jī)理和基因治療方法，研究基因表達(dá)調(diào)控以及進(jìn)行藥物干預(yù)和新藥的開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)等。建立疾病的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)應(yīng)用于醫(yī)學(xué)方面的一個(gè)重要研究?jī)?nèi)容。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)在農(nóng)業(yè)方面，轉(zhuǎn)基因農(nóng)業(yè)動(dòng)物研究有了很大進(jìn)展，尤其在通過(guò)胚胎細(xì)胞或體細(xì)胞將基因?qū)伺?、豬、羊和山羊，產(chǎn)生可遺傳的轉(zhuǎn)基因牲畜方面發(fā)展很快。說(shuō)明轉(zhuǎn)基因牲畜不僅可作為生物反應(yīng)器，為人類(lèi)生產(chǎn)基因工程產(chǎn)品和用于牲畜品種改良，提供更好的服務(wù)，同時(shí)也促進(jìn)了胚胎學(xué)和發(fā)育遺傳學(xué)的飛速發(fā)展，并開(kāi)拓了醫(yī)學(xué)研究的新領(lǐng)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

人類(lèi)培育出的第一只轉(zhuǎn)基因猴“安迪”。于2000年10月2日在美國(guó)出生。

美國(guó)密蘇里大學(xué)最近通過(guò)克隆技術(shù)培育出四只含有熒光水母基因的小豬。左為熒光小

豬，右為正常小豬9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

2003年11月21日，美國(guó)得克薩斯的一家公司宣布，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)他們已經(jīng)研制出能發(fā)熒光的小型熱帶魚(yú)———“熒光魚(yú)轉(zhuǎn)基因的小雞

9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

2004年6月30日由中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院主持，山東農(nóng)業(yè)大學(xué)、萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院等單位共同參與首批28只帶有t-PA組織型纖溶酶原激活劑的轉(zhuǎn)基因羊，在山東省東營(yíng)市天翼公司陸續(xù)降生。t-PA是目前治療急性心肌梗塞最好的溶血栓藥物，9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)二、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育的原理和方法（一）基本原理：

1、借助分子生物學(xué)和胚胎工程的技術(shù)，將外源目的基因在體外擴(kuò)增和加工，再導(dǎo)入動(dòng)物的早期胚胎細(xì)胞中，使其整合到染色體上，當(dāng)胚胎被移植到代孕動(dòng)物的輸卵管或子宮中后，發(fā)育成攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)2.關(guān)鍵技術(shù):

（1）外源目的基因的制備

（2）外源目的基因的有效導(dǎo)入

（3）胚胎培養(yǎng)與移植

（4）外源目的基因表達(dá)的檢測(cè)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

（1）重組DNA技術(shù)（RecombinantDNATechnology）

是在體外按人們的意愿將不同的DNA

分子重組的技術(shù)。

（二）外源目的基因的制備1、基因工程基本概念9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

是指利用重組DNA技術(shù)將目的基因和載體重組，再導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的過(guò)程。（2）基因工程(geneticengineering)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

是指通過(guò)無(wú)性繁殖過(guò)程所產(chǎn)生的與親代完全相同的子代群體。基因工程相當(dāng)于目的基因的無(wú)性繁殖過(guò)程，也稱(chēng)其為基因克隆(genecloning)。

（3）克?。╟lone）9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)2、基因工程操作中常用的工具9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（1）工具酶限制性?xún)?nèi)切酶T４DNA連接酶大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ逆轉(zhuǎn)錄酶T4多核苷酸激酶鹼性磷酸酶末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

限制性?xún)?nèi)切酶(restrictionendonuclease)

定義:是一類(lèi)能識(shí)別和切割雙鏈DNA分子中特定堿基序列的核酸水解酶分類(lèi):Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)作用：與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng)，限制外源DNA，保護(hù)自身DNA。

命名：第一個(gè)字母代表細(xì)菌的屬名，用大寫(xiě)；第二、三個(gè)字母是該細(xì)菌的種名，用小寫(xiě)；第四個(gè)字母代表株；用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

Ⅱ型限制酶識(shí)別序列特點(diǎn)—回文結(jié)構(gòu)······GAATTC············CTTAAG······切口：黏性切口和平端切口9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

EcoRⅠHpaⅡ

—GAATTC—

—GTTAAC—

—CTTAAG—

—CAATTG—

—G

—CTTAA

黏端切口平端切口

+AATTC—G——GTT—CAA+AAC—TTG—9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（2）載體定義：是攜帶目的DNA片段進(jìn)入受體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的工具。常用載體：細(xì)菌質(zhì)粒噬菌體黏粒病毒

腺病毒、腺病毒相關(guān)病毒、痘病毒逆轉(zhuǎn)錄病毒，猴空泡病毒9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

質(zhì)粒（plasmid）特點(diǎn)

能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立復(fù)制，帶有某些遺傳信息，會(huì)賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)pUC19質(zhì)粒的物理圖譜9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)頭部尾尾部纖維

蛋白衣殼

λ噬菌體（bacteriophage,phage）9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)3、基因工程的操作過(guò)程9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)·

化學(xué)合成法

要求：已知目的基因的核苷酸序列或其產(chǎn)物的氨基酸序列·基因組DNA··基因組DNA文庫(kù)(genomicDNAlibrary)cDNA

cDNA文庫(kù)(cDNAlibrary)聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction,PCR)（1）目的基因的獲得9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

1．同源黏性末端連接

方式：同一限制酶切割位點(diǎn)連接配伍末端連接2、平端連接

適用于：限制性?xún)?nèi)切酶產(chǎn)生的平端切割黏性末端或切平形成的平端3、定向連接

適用于：兩種不同的黏性末端一個(gè)黏端，一個(gè)平端

（2）目的基因與載體的連接9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)目的基因與載體的各種連接方式9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)受體菌的條件：安全宿主菌限制酶和重組酶缺陷處于感受態(tài)導(dǎo)入方式：轉(zhuǎn)化(transformation)

轉(zhuǎn)染(transfection)

轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction)（3）重組體導(dǎo)入受體細(xì)胞9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)直接選擇法：

抗藥性標(biāo)記選擇插入失活法標(biāo)志補(bǔ)救

α互補(bǔ)

分子雜交法

原位雜交

Southern印跡

非直接選擇法：

免疫學(xué)方法

如免疫化學(xué)方法酶免檢測(cè)法（4）基因工程菌的篩選9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

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●●●●●平皿上的單菌落復(fù)印硝酸纖維膜溶菌DNA變性固定雜交菌落原位雜交

繼續(xù)培養(yǎng)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)原核表達(dá)體系

大腸桿菌

標(biāo)準(zhǔn)：

選擇標(biāo)志強(qiáng)啟動(dòng)子

SD序列多接頭克隆位點(diǎn)不足：

不宜表達(dá)真核基因組DNA

不能加工表達(dá)的真核蛋白質(zhì)表達(dá)的蛋白質(zhì)常形成不溶性包涵體很難表達(dá)大量可溶性蛋白（5）外源基因的表達(dá)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)真核表達(dá)體系

優(yōu)點(diǎn)：

■重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞具有遺傳的穩(wěn)定性和可重復(fù)性

■哺乳動(dòng)物細(xì)胞能對(duì)外源基因轉(zhuǎn)錄的hnRNA剪切加工成成熟的mRNA

■對(duì)表達(dá)的蛋白質(zhì)能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的加工如糖基化

■可將表達(dá)產(chǎn)物分泌到培養(yǎng)基中方便下游的提純?nèi)秉c(diǎn)：操作技術(shù)難費(fèi)時(shí)不經(jīng)濟(jì)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)四、基因轉(zhuǎn)移和基因剔除技術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用建立動(dòng)物模型①單基因決定疾病模型

基因剔除獲得性突變(gain-of-functionmutation)②多基因決定疾病模型9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（三）胚胎培養(yǎng)與移植方法基因顯微注射法逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法精子載體導(dǎo)入法9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)基因顯微注射法9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（1.）目的基因的制備和純化來(lái)源：人工合成，逆轉(zhuǎn)錄，PCR等擴(kuò)增：通過(guò)載體方式或者PCR進(jìn)行。常選用質(zhì)粒做載體純化：限制性?xún)?nèi)切酶9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（2）小鼠的準(zhǔn)備小鼠的有關(guān)要求：9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)

（3）超排卵與取卵孕馬血清促性腺激素（PMSG）,42-48h人絨毛膜促性腺激素（HCG）,10-13h（4）基因顯微注射（5）受精卵移植：?jiǎn)渭?xì)胞至桑椹胚階段移植到輸卵管；囊胚期則移植到子宮。（6）目的基因的檢測(cè)。(7)建系。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)顯微注射儀9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)納米顯微注射儀9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)轉(zhuǎn)基因儀9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)DNA顯微注射的轉(zhuǎn)基因過(guò)程的總效率:

9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（1.）病毒載體的構(gòu)建提取病毒環(huán)狀DNA克隆到載體中切除病毒編碼區(qū)目的基因?qū)朕D(zhuǎn)染細(xì)胞9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（2）包裝細(xì)胞（3）感染早期胚胎：取出8細(xì)胞胚胎去除透明帶與包裝細(xì)胞共培養(yǎng)

轉(zhuǎn)入假孕母鼠的子宮內(nèi)產(chǎn)出小鼠9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)通過(guò)病毒載體導(dǎo)入ES細(xì)胞建立轉(zhuǎn)基因小鼠的技術(shù)路線(xiàn)

9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（1）分離培養(yǎng)ES細(xì)胞（2）ES細(xì)胞基因操作（3）獲取囊胚期胚胎（4）將ES細(xì)胞注射到囊胚期胚胎的囊胚腔內(nèi)（5）將胚胎移植到假孕母鼠子宮內(nèi)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)精子載體導(dǎo)入法利用精子作為載體，將外源基因?qū)刖樱ü灿?，電穿孔，脂質(zhì)體等），借助受精作用把外源基因?qū)胧芫?，整合到受精卵的基因組中。該法簡(jiǎn)單、方便、免去對(duì)原核的損傷，可用于多種動(dòng)物特別是大動(dòng)物，非常實(shí)用，但這一技術(shù)還處于完善階段。主要步驟如下：（1）外源目的基因?qū)刖樱?）精子與卵子結(jié)合（3）將受精卵移植到假孕母鼠子宮內(nèi)9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)電穿孔法和脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法

一.電穿孔法的原理很簡(jiǎn)單,在直流電場(chǎng)作用的瞬間,細(xì)胞膜表面產(chǎn)生疏水或親水的微小通道。即電穿孔技術(shù)是利用脈沖電場(chǎng)改變細(xì)胞膜的狀態(tài)和通透性，達(dá)到將DNA導(dǎo)入細(xì)胞的目的。電穿孔的時(shí)間只有幾秒鐘,而且DNA片段不需要特殊的純化操作。二.脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法：用人工合成的陽(yáng)離子類(lèi)脂與外源DNA結(jié)合，借助類(lèi)脂容易穿越脂膜的特性將DNA導(dǎo)入。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)三轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用（1）研究基因結(jié)構(gòu)和功能及其表達(dá)和調(diào)控9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)(2)建立人類(lèi)疾病動(dòng)物模型

例如:乙型肝炎表面抗原轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。將人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因?qū)胄∈?，可獲得HBsAg轉(zhuǎn)基因?qū)胄∈螅以撧D(zhuǎn)基因小鼠的肝中可以產(chǎn)生HBsAg。這種轉(zhuǎn)基因小鼠既可以模擬患者的帶毒狀態(tài)，又不導(dǎo)致發(fā)病。這種轉(zhuǎn)基因小鼠模型可用來(lái)研究免疫應(yīng)答耐受與肝細(xì)胞損傷的關(guān)系，探討發(fā)病機(jī)制、持續(xù)帶毒狀態(tài)及其清除、藥物篩選試驗(yàn)、HBVDNA在宿主內(nèi)的復(fù)制、表達(dá)及調(diào)控與乙型肝炎發(fā)病的關(guān)系等有關(guān)HBV病理學(xué)和治療學(xué)方面的難題。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（3）研究人類(lèi)疾病基因治療可以通過(guò)基因槍注射治療基因進(jìn)入皮膚或皮下腫瘤細(xì)胞治療腫瘤.

轉(zhuǎn)入胰島基因可以治療糖尿病9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（4）研制生物反映器，生產(chǎn)天然活性藥物蛋白

2004年6月30日由中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院主持，山東農(nóng)業(yè)大學(xué)、萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院等單位共同參與首批28只帶有t-PA組織型纖溶酶原激活劑的轉(zhuǎn)基因羊，t-PA是目前治療急性心肌梗塞最好的溶血栓藥物，9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（5）擴(kuò)大移植供體來(lái)源。2000年3月，英國(guó)著名國(guó)際生物技術(shù)公司PPf宣布，他們已用豬的成年體細(xì)胞通過(guò)兩步核移植技術(shù)，創(chuàng)造出一窩共5只小豬，并對(duì)它們的基因組DNA進(jìn)行微衛(wèi)星分析，發(fā)現(xiàn)其中三只小豬屬于同一細(xì)胞系，另外兩只小豬屬于另一細(xì)胞系。該公司準(zhǔn)備使用這些小豬作為患者的供體9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)（6）改良動(dòng)物品種羊奶能代替打針吃藥9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)2003年12月美國(guó)俄亥俄州夸克生物科技公司報(bào)告創(chuàng)造出了一種不含膽固醇的小鼠9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)應(yīng)用

創(chuàng)造醫(yī)學(xué)研究需要的動(dòng)物模型改良動(dòng)物品質(zhì)培育動(dòng)物新品種9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)課堂練習(xí):1.什么叫轉(zhuǎn)基因動(dòng)物?2.根據(jù)目的基因?qū)氲姆椒ㄅc對(duì)象不同,培育轉(zhuǎn)基因的主要方法有顯微基因注射法逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)精子載體導(dǎo)入9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)3.基因顯微注射法的基本步驟4.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用？9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)基因敲除的原理和方法9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)：

2．1．利用基因同源重組進(jìn)行基因敲除

基因敲除是80年代后半期應(yīng)用DNA同源重組原理發(fā)展起來(lái)的。80年代初，胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)。1985年，首次