《N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸》

ICSXX.XXX.XX

CCSXXX

T/CIXX

中國(guó)國(guó)際科技促進(jìn)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CIXX—2023

N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸

Fmoc-Trp(Boc)-OH

（草案）

2023-XX-XX發(fā)布2023-XX-XX實(shí)施

中國(guó)國(guó)際科技促進(jìn)會(huì)發(fā)布

T/CIXX—2023

N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸

1范圍

本文件規(guī)定了N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸的術(shù)語和定義、結(jié)構(gòu)式、分子式和相對(duì)分子

量、要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存和有效期。

本文件適用于多肽藥物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-N(in)-叔丁氧羰基-色氨酸。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件,

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志

GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定

JJF1070定量包裝商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則

《定量包裝商品計(jì)量監(jiān)督管理辦法》國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局令第75號(hào)（2005）

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4結(jié)構(gòu)式、分子式和相對(duì)分子量

4.1結(jié)構(gòu)式

4.2分子式

C31H30N2O6

4.3相對(duì)分子量

526.58（按2019年國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量）。

5要求

1

T/CIXX—2023

5.1技術(shù)指標(biāo)

應(yīng)符合表1的規(guī)定。

表1技術(shù)指標(biāo)

項(xiàng)目要求

感官要求白色至類白色粉末

溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后應(yīng)澄清透明

鑒別（IR）供試品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致

純度（HPLC）≥98.5%

游離氨基酸（TLC）≤0.1%

異構(gòu)體(Fmoc-D-Trp(Boc)-OH)（HPLC）≤0.3%

水分（KF)≤1.0%

比旋光度[20/D]-20.0°±4.0°（c=1，DMF）

含量（滴定）≥92.0%

6實(shí)驗(yàn)方法

本試驗(yàn)所用試劑和水除特殊注明外，均為分析純?cè)噭┖图兓?/p>

6.1感官要求

采用目視法測(cè)定，應(yīng)為白色至類白色粉末。

6.2技術(shù)指標(biāo)

6.2.1溶解性

6.2.1.1儀器

50ml具塞比色管。

6.2.1.2試劑

6.2.1.3操作方法

6.2.1.3.1稱取本品約5.3g，置于一個(gè)干燥潔凈的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超聲溶解后應(yīng)澄

清透明。

6.2.2鑒別（IR）

6.2.2.1儀器

紅外光譜儀、電子天平。

6.2.2.2測(cè)定方法

取供試品適量，按照紅外光譜儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致。

6.2.3純度（HPLC）

2

T/CIXX—2023

6.2.3.1儀器

高效液相色譜儀，電子天平。

6.2.3.2試劑

乙腈（色譜級(jí)）、甲醇（色譜級(jí)）、三氟醋酸、高純水。

6.2.3.3色譜條件

a)色譜柱參考條件如下：

1)型號(hào)：ZORBAXSB-C18（或等效的色譜柱）；

2)規(guī)格：4.6mm*25cm，5um。

b)流動(dòng)相參考條件如下：

1)流動(dòng)相A：0.1%三氟醋酸-水；

2)流動(dòng)相B：0.1%三氟醋酸-乙腈；

3)洗脫方式：梯度。

c)梯度洗脫條件如下：

表2色譜梯度洗脫條件

時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）

03070

30595

30.13070

353070

d)其他色譜條件如下：

1)流速：1.0ml/min；

2)柱溫：30℃；

3)進(jìn)樣體積：10μl；

4)檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；

5)運(yùn)行時(shí)間：35min。

e)參考保留時(shí)間如下：

3

T/CIXX—2023

表3參考保留時(shí)間

名稱保留時(shí)間（min）相對(duì)保留時(shí)間備注

Fmoc-β-Ala-OH3.5140.33雜質(zhì)

Fmoc-OH4.2950.41雜質(zhì)

Fmoc-Trp-OH4.5650.43雜質(zhì)

Fmoc-Osu5.0840.48雜質(zhì)

Fmoc-β-Ala-Trp(Boc)-OH7.4510.70雜質(zhì)

Fmoc-Trp(Boc)-OH10.5731.00主峰

Fmoc-Trp(Boc)-OEt19.4591.84雜質(zhì)

Fmoc-Trp(Boc)-Trp(Boc)-OH20.6301.95雜質(zhì)

6.2.3.4試驗(yàn)步驟

6.2.3.4.1供試品溶液的配制

取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用甲醇溶解后稀釋至刻度，搖勻。

6.2.3.4.2測(cè)定

分別進(jìn)甲醇空白和供試品溶液各1針，按照6.2.3.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

6.2.3.5定量方法

以峰面積歸一化法計(jì)算純度和雜質(zhì)。

6.2.4游離氨基酸(TLC)

6.2.4.1儀器

硅膠G薄層板、層析缸。

6.2.4.2試劑

a)正丁醇、冰醋酸；

b)顯色劑：2%茚三酮丙酮溶液。

6.2.4.3分析步驟

6.2.4.3.1對(duì)照品溶液的配制

取L-色氨酸約0.01g，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加適量(0.1%TFA-水)溶解后定容至刻度，搖

勻，做為對(duì)照品溶液。濃度：0.1mg/ml。

6.2.4.3.2供試品溶液的配制

取本品約1.0g，精密稱定，置于10ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。

6.2.4.3.3點(diǎn)板

4

T/CIXX—2023

精密吸取上述2種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用正丁醇：冰醋酸：水(3:1:1）（v/v/v)

為展開劑，展開，晾干。

6.2.4.3.4顯色

噴以2%茚三酮丙酮溶液，在105℃烘烤加熱至斑點(diǎn)出現(xiàn)，立即檢視。

6.2.4.3.5結(jié)果判定

對(duì)照品溶液應(yīng)顯一個(gè)清晰的斑點(diǎn)，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)比較，

不得更深。

6.2.5異構(gòu)體(HPLC)

6.2.5.1儀器

高效液相色譜儀、電子天平。

6.2.5.2試劑

乙腈（色譜級(jí)）、三氟醋酸、高純水。

6.2.5.3色譜條件

a)色譜柱條件如下：

1)型號(hào)：PhenomenexLux5umCellulose-1；

2)規(guī)格：4.6mm*25cm，5um。

b)流動(dòng)相條件如下：

1)A：0.1%三氟醋酸-水；

2)B：乙腈；

3)A：B=30：70。

c)稀釋劑條件如下：

1)甲醇。

d)其他色譜條件：

1)流速：1.0ml/min；

2)柱溫：30℃；

3)進(jìn)樣體積：5μl；

4)檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；

5)運(yùn)行時(shí)間：25min。

e)參考保留時(shí)間條件如下：

5

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1)Fmoc-D-Trp(Boc)-OH：15.0min；

2)Fmoc-L-Trp(Boc)-OH：18.2min。

6.2.5.4試驗(yàn)步驟

6.2.5.4.1對(duì)照品溶液的配制

取消旋體約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。

6.2.5.4.2供試品溶液的配制

取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。

6.2.5.4.3測(cè)定

取稀釋劑溶液、供試品溶液和對(duì)照品溶液各進(jìn)1針，按照6.2.5.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

6.2.5.5定量方法

以峰面積歸一化法計(jì)算異構(gòu)體（Fmoc-D-Trp(Boc)-OH）的含量。

6.2.6水分（KF)

6.2.6.1儀器

分析天平、自動(dòng)水分測(cè)定儀。

6.2.6.2試劑

卡爾費(fèi)休氏試劑、無水甲醇。

6.2.6.3操作方法

取本品約0.2~0.5g，按照水分測(cè)定儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定。

6.2.7比旋光度

6.2.7.1儀器

旋光儀、電子天平。

6.2.7.2試劑

6.2.7.3操作方法

稱取本品約1.0g，精密稱定，溫度以20℃，置于100ml的容量瓶中，加適量DMF溶解后定容至刻度，

搖勻。按照旋光測(cè)定儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定。

6.2.7.4計(jì)算公式

按式（1）計(jì)算比旋光度值。

┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉(1)

100?

[20/?]=??

6

T/CIXX—2023

式中：

α—為測(cè)得的旋光度；單位為：（°）；

l—為測(cè)定管的長(zhǎng)度，單位為：（dm）；

c—為100ml溶液中含有被測(cè)物質(zhì)的重量，單位為：（g）。

6.2.8含量（滴定）

6.2.8.1試劑和溶液

6.2.8.1.1中性甲醇

取甲醇500ml，加入2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液顯淡紅色，保持30s

不褪。

6.2.8.1.2氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mol/L)

6.2.8.1.3酚酞指示劑

6.2.8.2操作方法

取本品約1.2g，精密稱定，置于一個(gè)干燥潔凈的150ml錐形瓶中，加入50ml中性甲醇，振搖使供試

品溶解后加入2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液顯淡紅色為終點(diǎn)。記錄消耗標(biāo)

準(zhǔn)溶液的體積。

6.2.8.3計(jì)算公式

按式（2）Fmoc-Trp(Boc)-OH含量。

×100┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉┉(2)

?×?×0.52658

??=?

式中：

—Fmoc-Trp(Boc)-OH的含量；單位為（%）；

mc—i為氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；

V—為供試品消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；

0.52658—為1.00ml氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1000mol/L）相當(dāng)于Fmoc-Trp(Boc)-OH的質(zhì)量；

m—為供試品的重量,單位為（g）。

6.2.8.4允許誤差

取兩次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值為測(cè)定結(jié)果，兩次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果之間的RSD不得大于0.3%。

7檢驗(yàn)規(guī)則

7

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7.1檢驗(yàn)分類

產(chǎn)品的檢驗(yàn)分為出廠檢驗(yàn)和型式檢驗(yàn)。

7.2組批

以相同材料、相同生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批，每批產(chǎn)品不應(yīng)超

過150t。

7.3抽樣

7.3.1固體產(chǎn)品按《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》執(zhí)行。

7.3.2將采樣品置于干燥清潔，取固體樣品1000g,分別裝于2個(gè)潔凈、干燥的容器瓶中，密封并貼

上標(biāo)簽，注明生產(chǎn)廠名稱、產(chǎn)品名稱、批量、取樣日期等，一份檢測(cè)使用，一份用于留樣。

7.3.3。

7.4出廠檢驗(yàn)

7.4.1產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)本公司質(zhì)檢部門按本標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后方可出廠。

7.4.2出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為感官要求、溶解性、鑒別、純度、游離氨基酸、異構(gòu)體、水分、比旋光度、

含量（滴定）。

7.5型式檢驗(yàn)

7.5.1每年進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)，有下列情況之一時(shí)，亦須進(jìn)行型式檢驗(yàn)：

a)更換主要設(shè)備或主要工藝；

b)長(zhǎng)期停產(chǎn)再恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；

c)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)有較大差異時(shí);

d)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)進(jìn)行抽查時(shí)。