臨床輸血檢驗技術 課件 項目二 血型檢測技術

項目二血型檢測技術任務一紅細胞血型系統(tǒng)檢測技術一、紅細胞血型系統(tǒng)分類及命名紅細胞血型分類傳統(tǒng)分類器官組織血型分類ISBT分類紅細胞型ISBT命名紅細胞血型抗原的表達方法紅細胞血型表型的表述紅細胞血型等位基因和基因型命名紅細胞血型集合、系列表述二、ABO血型系統(tǒng)人類ABO基因位于第9號染色體，常染色體顯性遺傳。ABO血型受控于3個等位基因，即A、B、O基因，A、B是顯性基因，O是隱性基因。ABO基因通過編碼糖基轉移酶，轉移糖分子到前體物質上形成ABO抗原。ABO血型遺傳符合孟德爾遺傳學規(guī)律，子代從親代各獲得一半的遺傳基因，產生相應的血型抗原，可以根據雙親血型推斷子女可能的血型。二、ABO血型系統(tǒng)ABO血型遺傳示意圖二、ABO血型系統(tǒng)二、ABO血型系統(tǒng)ABO血型抗體出生前尚未產生抗體。出生后3-6個月出現ABO抗體，5-10歲時達高峰；成人隨年齡增長而降低。新生兒抗體常來自母體IgG，偶爾自身產生的IgM。新生兒血型抗原少，抗體效價低，易誤定血型?？?A、抗-B、抗-AB存在于所有缺乏相應抗原的人的血清、唾液、乳汁、淚液等各種體液及分泌物中。二、ABO血型系統(tǒng)A型、B型：以IgM為主，有少量IgG、IgA抗體。O型：以IgG抗體為主，主要是抗-AB，不是抗-A和抗-B的混合，通過吸收放散試驗予以證實。A亞型：可以出現抗-A1，A2B型產生抗-A1的概率高于A2型?？?A1：多數是IgM抗體，可干擾血型鑒定和交叉配血試驗。ABO抗體的特性二、ABO血型系統(tǒng)母胎不相容輸血不相容自身溶血性貧血隨著妊娠、輸血次數增加，IgG抗體產生增多。二、ABO血型系統(tǒng)A抗原：主要為A1和A2。其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、Amos、Aint、Aw和Ael。B亞型：一般比A亞型更少，B3、Bx、Bm、Bmos和Bel等。ABO亞型二、ABO血型系統(tǒng)A1和A2表型鑒別血型抗原抗-A抗-A1抗-ＢA1A、A1++-A2A+--A1BA、A1、B++

+二、ABO血型系統(tǒng)A1、A2血清學區(qū)別：抗-Al檢查有無Al抗原?？?A1試劑：B型人的血清制成，或為雙花扁豆提取并稀釋的植物凝集素。凡與抗A1試劑發(fā)生凝集反應者為A1，如果同時還與抗B凝集，則為A1B型；不與抗-A1試劑凝集者為A2或A2B型。A1、A2亞型的鑒定方法三、Rh血型系統(tǒng)Fisher-Race：CED表述Rhesus85%Rh命名ISBT：RH1(D)、RH2(C)、RH3(E)、RH4(c)、RH5(e)Wierner假說：R1、R2、R0現代命名法：RHCE*CE、RhD三、Rh血型系統(tǒng)RH基因RHD和RHCE

1P34-36，分別編碼D和C/c、E/e抗原RHD基因，無等位基因d三、Rh血型系統(tǒng)Rh血型抗原50多種

D抗原最重要Rh陽性：？Rh陰性：？85%99.6%Rh抗原紅細胞上含有D抗原者稱為Rh陽性，不含D抗原者稱為Rh陰性。三、Rh血型系統(tǒng)Rh抗原強度：僅次于A及B抗原。常見抗原：D、C、c、E、e，只存在于人紅細胞膜。Rh抗原具有劑量效應：純合子比雜合子抗原強度強（cDe/cDe比cDe/cde反應性強）。Rh、Kidd、Duffy、MNS系統(tǒng)表現明顯ABO表現不明顯基因為純合子時，抗原位點多，與抗體反應強基因為雜合子時，抗原位點少，與抗體反應弱三、Rh血型系統(tǒng)D抗原D抗原：正常D、-D-、Du等。

弱D（WeakD）

部分D（Partial

D）

放散（Del）Du三、Rh血型系統(tǒng)RHCE基因編碼C和/或c、E和/或e抗原。RHCE有50多種等位基因，易發(fā)生突變，突變后可導致抗原表達改變或減弱。（1）復合抗原：包括ce、cE、Ce、CE，在同一蛋白質分子上表達。（2）變異體：RHCE基因突變，導致C、c、E、e抗原數量或質量改變，其中C和e抗原改變較常見。c/C和E/e抗原三、Rh血型系統(tǒng)偶見天然抗-E、抗-CW,基本上都是通過輸血、妊娠等刺激產生的免疫性抗體?？贵w：抗-D、-E、-C、-c、-e、-DE、-DC、-Ce、-Ec等，為IgG抗體。約30%左右Rh陰性個體接受Rh陽性血液后能產生抗體。受血者或孕婦血漿中含有Rh抗體時，當再次接受相應抗原陽性血液，可引起嚴重的HTR和HDN?？?E產生的機率高于抗-D。Rh抗體四、紅細胞其他血型系統(tǒng)1H血型系統(tǒng)2Lewis血型系統(tǒng)3MNS血型系統(tǒng)4P血型抗原5I/I血型系統(tǒng)7Kell血型系統(tǒng)紅細胞其他血型系統(tǒng)8Kidd血型系統(tǒng)9Duffy血型系統(tǒng)6Lutheran血型系統(tǒng)10Diego血型系統(tǒng)四、紅細胞其他血型系統(tǒng)H血型系統(tǒng)ISBT命名為H，數字序號為018，只有1個H抗原。紅細胞或體液中的寡糖前體鏈→H抗原→A、B抗原。H抗原表達在紅細胞膜糖蛋白或糖脂上，以及體液、分泌液黏蛋白上。H抗原：由19號染色體上緊密連鎖的FUT1（H）和FUT2（Se）控制合成。FUT1和FUT2各自編碼一種L-巖藻糖基轉移酶（H酶），分別轉移巖藻糖到Ⅱ型、Ⅰ型寡聚糖鏈上。

四、紅細胞其他血型系統(tǒng)H基因→H酶，將紅細胞上的Ⅱ型寡糖鏈轉化為H抗原；Se基因→H酶，將分泌液中的Ⅰ型寡糖鏈轉化為分泌型H抗原，即體液中的H物質。分泌型個體唾液腺細胞有Se和H基因，因此唾液中同時表達Ⅰ型、Ⅱ型H抗原，是分泌型個體形成A和/或B物質的基礎；非分泌型個體為se隱性基因，唾液中不表達H抗原。四、紅細胞其他血型系統(tǒng)H抗原強弱趨勢：O>A2>B>A2B>A1>A1BH抗原四、紅細胞其他血型系統(tǒng)缺失H基因，即缺乏H酶，則無H物質。孟買型個體攜帶的ABO基因可以遺傳給后代，無法遺傳給后代H基因和Se基因，所以后代也不能形成ABO抗原，故為隱性遺傳。血清學特征：①紅細胞上無ABH抗原，與抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H均不反應，易誤判為O型。②唾液無ABH物質。③血清中有抗-A、抗-B、抗-H，在4～37℃有活性，能引起HTR。孟買型個體只能輸注孟買型血液。H抗原缺失表型--孟買型四、紅細胞其他血型系統(tǒng)缺乏H基因，有Se基因，紅細胞表面弱表達H抗原，與抗-H不反應，與抗-A、抗-B凝集反應很弱，可通過吸收放散試驗證實紅細胞上有A和/或B抗原。分泌液及血漿中含有H物質，可以形成少量A和/或B物質，并吸附到紅細胞上，微弱表達A和/或B抗原。血清中存在著抗-A、抗-B、抗-H、抗-HI等。H抗原缺失表型—類孟買型五、ABO血型血清學鑒定無相應ABO抗原、抗體有相應ABO抗原、抗體紅細胞凝集懸浮于上層游離紅細胞下沉陽性反應陰性反應微柱凝膠檢測卡法五、ABO血型血清學鑒定五、ABO血型血清學鑒定五、ABO血型血清學鑒定【質量控制】1．標本2．離心機3．凝膠卡五、ABO血型血清學鑒定五、ABO血型血清學鑒定六、RhD血型血清學鑒定Rh血型鑒定臨床較重要的血型系統(tǒng)，抗原性僅次于ABO血型。采用已知特異性抗體，如抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e，檢查紅細胞上有無相應的Rh血型抗原，尤其RhD抗原是臨床常規(guī)檢查項目。紅細胞膜上有D抗原為Rh陽性，無D抗原者為Rh陰性。針對弱D、部分D或Del等D變異型需要應用不同廠家或批號的試劑予以證實抗原有無。六、RhD血型血清學鑒定六、RhD血型血清學鑒定【質量控制】1．標本待檢者紅細胞要用生理鹽水充分洗滌，避免血清蛋白的干擾。2．對照每次試驗應需做陽性、陰性對照。3．Rh陰性確認試驗若待檢紅細胞與抗D試劑在鹽水介質中不凝集，一般使用3種以上IgG抗D試劑進行間接抗球蛋白試驗。若3種IgG抗D試劑抗球蛋白試驗的結果均為陰性，即可判定為Rh陰性；如果抗球蛋白試驗有一種或一種以上的IgG抗D試劑的結果為陽性，則判斷結果為Rh陽性，該個體為弱D表型。任務二白細胞抗原系統(tǒng)檢測技術一、人類白細胞血型抗原系統(tǒng)HLA復合體結構圖白細胞血型抗原系統(tǒng)HLA復合體：指人類的主要組織相容性復合體，也稱為HLA系統(tǒng)、人類白細胞抗原。HLA等位基因的命名圖示一、人類白細胞血型抗原系統(tǒng)HLA分子結構：依據HLA基因分類情況，其編碼的產物依次被稱為HLA-Ⅰ類分子、HLA-Ⅱ類分子和HLA-Ⅲ類分子。HLA分子結構示意圖一、人類白細胞血型抗原系統(tǒng)HLA分子的組織分布HLA-Ⅰ類分子廣泛分布在有核細胞表面HLA-Ⅱ類分子主要表達在巨噬細胞等細胞表面HLA分子也分布在血、尿、唾液及精液中檢出一、人類白細胞血型抗原系統(tǒng)白細胞血型抗原的種類1．與紅細胞共有的血型抗原：ABO、P、LE、XG、Sc、Do等，但在白細胞上表達量少。2．與其他組織細胞共有的血型抗原：HLA除表達在白細胞上，也表達在表達在其他組織細胞上，如血小板表面存在HLA-A、HLA-B和HLA-C位點等HLA-Ⅰ類抗原。3．白細胞本身所特有的抗原：人類中性粒細胞抗原主要分布于中性粒細胞表面上。二、粒細胞抗原系統(tǒng)白細胞本身所特有的血型抗原主要有人類中性粒細胞抗原、中性粒前體細胞的特異性抗原和淋巴細胞上的Gr系統(tǒng)抗原等。HNA分子的命名原則：1．命名為HNA。2．數字編號表示抗原糖蛋白膜位點。3．小寫英文字母表示同一位點上的不同抗原如HNA-1a、HNA-lb和HNA-1c等。4．新發(fā)現的粒細胞抗原暫時用字母縮寫命名，直至正式命名。三、白細胞血型抗體1.HLA抗體：多為IgG類的群體反應性抗體（panelreactiveantibodies，PRA），具有結合補體的淋巴細胞毒性質。2.粒細胞抗體：粒細胞抗原免疫刺激機體后可以產生，與粒細胞抗原相對應，多數為IgG類，也可能出現IgM類或者IgM與IgA的混合抗體。四、白細胞抗原系統(tǒng)檢測技術HLA系統(tǒng)檢測（一）HLA的血清學分型試驗（二）HLA的細胞學分型試驗（三）HLA的基因學分型試驗粒細胞系統(tǒng)檢測（一）血清學技術（二）基因分型技術四、白細胞抗原系統(tǒng)檢測技術HLA的血清學分型試驗HLA抗原檢測：微量淋巴細胞毒試驗流式細胞儀方法ELISA方法HLA抗體檢測方法：淋巴細胞毒交叉配合試驗Luminex檢測技術掌握不同方法的原理及其優(yōu)缺點四、白細胞抗原系統(tǒng)檢測技術HLA的基因學分型試驗HLA分型技術：根據個體HLA遺傳學差異，檢測具有等位基因差異的HLA基因序列，本質在于編碼相應抗原的基因，常用PCR-SSP法、PCR-SSOP法、PCR-RFLP法、SBT法五、白細胞抗原系統(tǒng)檢測的臨床應用HLA系統(tǒng)在醫(yī)學上的應用HLA系統(tǒng)在移植醫(yī)學的應用HLA系統(tǒng)在輸血醫(yī)學的應用HLA系統(tǒng)在法醫(yī)學的應用HLA系統(tǒng)在一些疾病的診斷上的應用任務三

血小板血型系統(tǒng)檢測技術一、血小板血型系統(tǒng)抗原與抗體血小板相關抗原：與其他細胞表面或組織共有的抗原，紅細胞血型系統(tǒng)（ABO、Lewis、I、P)以及人類白細胞抗原(HLA)。血小板特異性抗原：由血小板膜結構的一部分，特有的膜糖蛋白上的抗原決定簇，表現出血小板獨特的遺傳多態(tài)性，但在其他細胞和組織上也能發(fā)現。紅細胞相關抗原(紅細胞抗原)：A、B、H、Lea、Leb、I、i、P、Tja

組織相容性抗原：HLA-A、B位點，血小板上未發(fā)現有HLA-DR、DP、DQ等位點的抗原。一、血小板血型系統(tǒng)抗原與抗體血小板特異性抗原命名①人類血小板抗原系統(tǒng)用英文縮寫HPA表示。②按發(fā)現時間的先后順序進行數字編號。③“a”表示高頻等位基因對應的抗原，“b”表示低頻等位基因對應的抗原，而“w”則表示沒有對應等位基因的抗原。一、血小板血型系統(tǒng)抗原與抗體依據人類血小板抗原免疫多態(tài)性數據庫（ImmunolPolymorphismDatabaseofhumanplateletantigen，IPD-HPA），截至2017年，通過免疫血清學已經確定了35個血小板同種特異性抗原（HPA-1~29bw），其中12個對偶抗原已納入了6個系統(tǒng)，即HPA-1～HPA-5和HPA-15系統(tǒng)。血小板特異抗原的種類一、血小板血型系統(tǒng)抗原與抗體1.HLA抗體若患者輸注的血液制劑中含有足量的白細胞，由于白細胞表面上有HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ類抗原，可能導致患者出現初次同種免疫，當患者再次接受含有少量HLA抗原的血小板，機體就會迅速產生大量的HLA抗體，導致輸入的血小板被破壞。2.血小板特異性抗體受血者因輸注與之不配合的血小板、多次妊娠或骨髓移植等免疫刺激，導致機體產生抗血小板抗體，多為IgG型。3.血小板自身抗體由于體內自身免疫系統(tǒng)失調，機體產生針對自身血小板抗原的抗體，多為IgG或IgA型抗體。血小板血型系統(tǒng)抗體二、血小板血型檢測技術血清學檢測：1.簡易致敏紅細胞血小板血清學技術－SEPSA2.微柱凝膠血小板定型試驗3.血小板免疫熒光試驗4.單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗5.改進的抗原捕獲酶聯免疫吸附試驗6.流式細胞儀檢測技術二、血小板血型檢測技術簡易致敏紅細