《茶青中三氯殺螨醇的快速檢測方法 膠體金免疫層析法》

ICS65.100

CCSX04

T/FQIA

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/FQIA015-2022

茶青中三氯殺螨醇的快速檢測方法

膠體金免疫層析法

Colloidalgoldimmunochromatographicmethodforrapiddetermination

ofDicofolintealeaves

（征求意見稿）

在提交反饋意見時,請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

2023-XX-XX發(fā)布2023-XX-XX實施

福建省質(zhì)量檢驗協(xié)會發(fā)布

T/FQIA015-2023

茶青中三氯殺螨醇的快速檢測方法膠體金免疫層析法

1范圍

本文件規(guī)定了三氯殺螨醇農(nóng)藥殘留的膠體金免疫層析法的原理、試劑與設(shè)備、分析步驟、結(jié)果判定。

本文件適用于茶青中三氯殺螨醇農(nóng)藥殘留的快速檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法

NY/T2102-2011茶葉抽樣技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

膠體金免疫層析法Colloidalgoldimmunochromatographicmethod

膠體金免疫層析法就是以膠體金為顯色媒介，利用免疫學(xué)中抗原抗體特異性結(jié)合原理，在層析過程

中完成這一反應(yīng)，從而達(dá)到檢測目的的方法。

4原理

本方法采用競爭抑制免疫層析法原理。試樣中三氯殺螨醇經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的三氯殺螨醇特異

性抗體結(jié)合，抑制抗體和檢測線（T線）上偶聯(lián)抗原的免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致T線顏色深淺的變化。通過

T線的顯色深淺及與質(zhì)控線（C線）顏色深淺比較，對試樣中三氯殺螨醇進(jìn)行定性判定。

5試劑與材料

5.1試劑

5.1.1甲醇（CH3OH，CAS號：67-56-1）。

5.1.2樣品提取液：茶青試樣膠體金免疫層析檢測卡（或試紙條）專用提取液。

5.2標(biāo)準(zhǔn)品

三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥99%。

注：或等同可溯源物質(zhì)

表1三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量

中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質(zhì)量

三氯殺螨醇Dicofol115-32-2C14H9Cl5O370.486

5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

5.3.1三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液（50mg/L）：準(zhǔn)確稱取5.0mg（精確至0.01mg）三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)品

（5.2），置于50mL燒杯中，加入適量甲醇（5.1）溶解后，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用甲醇定容

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T/FQIA015-2023

至刻度，搖勻，配制成濃度為50mg/L的三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液。避光-18℃及以下條件保存，有效期

6個月。

5.3.2三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（0.2mg/L）：準(zhǔn)確移取三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液（5.3.1）0.4mL于

100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，配制成濃度為0.2mg/L的三氯殺螨醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，

臨用現(xiàn)配。

5.4材料

三氯殺螨醇膠體金快速檢測試劑盒：一般含三氯殺螨醇檢測卡（或試紙條）及配套試劑。

5.5除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，所有實驗用水為GB/T6682中規(guī)定的二級水。

6儀器和設(shè)備

6.1電子天平：感量分別為0.01g和0.01mg。

注：如直接使用符合規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液時，無需配備感量為0.01mg的天平。

6.2移液器：量程為200μL、1000μL、5000μL。

6.3渦旋振蕩器。

6.4離心機(jī)：4000r/min離心機(jī)。

6.5樣品濃縮儀：25L/min樣品濃縮儀。

7分析步驟

7.1試樣制備

7.1.1按NY/T2102-2011茶葉抽樣技術(shù)規(guī)范進(jìn)行茶青樣品抽樣，將樣品剪碎/切碎成小于1cm見方碎

片，備用。

7.1.2稱取6g剪碎/切碎的待測樣品于50mL離心管中；

7.1.3加入15mL三氯殺螨醇提取試劑1，渦旋振蕩或手動上下振蕩2min，提取后加入5g提取試

劑2，手動搖勻2min，離心；

7.1.4用5mL活化劑將SPE柱進(jìn)行活化；

7.1.5將離心后的上清液過柱，收集流出液；

7.1.6將收集的流出液于75℃下吹干后用0.3mL復(fù)溶液復(fù)溶，即為樣品待測液。

7.2試樣測試

7.2.1從包裝袋中取出檢測卡（或試紙條），恢復(fù)至室溫，啟封后應(yīng)在1h內(nèi)立即使用；

7.2.2取樣品待測液120μL（約5滴）垂直滴于檢測卡中，見圖1；

7.2.3在加樣后開始計時，10~15min讀取結(jié)果，其他時間讀取無效。

圖1加樣示意圖

2

T/FQIA015-2023

8結(jié)果判定

采用目視法，通過對比檢測區(qū)（T線）和質(zhì)控區(qū)（C線）色帶有無和顏色深淺按照圖2和如下原則

進(jìn)行結(jié)果判定：

圖2

8.1陰性（-）：C線顯色，T線顯色比C線深或兩者接近，表示樣品中待檢物質(zhì)濃度低于檢測限。

8.2陽性（+）：C線顯色，T線顯色比C線淺或不顯色，表示樣品中待檢物質(zhì)濃度大于等于檢測限。

8.3無效：C線不顯色，表明不正確的操作過程或檢測卡已失效。在此情況下應(yīng)再次檢查操作步驟，

并用新的檢測卡或試紙條重新測試。

9檢測指標(biāo)

9.1檢測限

茶青中三氯殺螨醇?xì)埩舻臋z測限為0.2mg/kg。

9.2靈敏度

靈敏度≥98%。

9.3特異性

特異性≥95%。

9.4假陰性率

假陰性率≤2%。

9.5假陽性率

假陽性率≤5%。

注：性能指標(biāo)計算方法見附錄A。

3

T/FQIA015-2023

附錄A

（規(guī)范性）

定性方法性能指標(biāo)計算表

定性方法各個性能指標(biāo)計算方法見表A.1。

表A.1定性方法性能指標(biāo)計算表

檢測結(jié)果b

樣品情況a總數(shù)

陽性陰性

陽性N11N12N1.=N11+N12

陰性N21N22N2.=N21+N22

總數(shù)N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2

2=（N12-N21-1）2/（N12+N21），

顯著性差異（2）

自由度（df）=1

靈敏度（p+，%）p+=N11/N1.

特異性（p-，%）p-=N22/N2.

假陰性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-靈敏度

假陽性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特異性

相對準(zhǔn)確度，%c（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：

N：任