《大米中2-乙酰基-1-吡咯啉的測定 頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法》

ICS67.060

CCSB04

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/NAIAXXX—2021

大米中2-乙酰基-1-吡咯啉的測定

頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法

Determinationof2-acetyl-1-pyrrolineinricebyheadspacesolid-phase

microextractiontechniquecoupledwithgaschromatographymass

spectrometry(HSSPME-GCMS)

2023-XX-XX發(fā)布2023-XX-XX實施

寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會發(fā)布

大米中2-乙?；?1-吡咯啉的測定

頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法

警示—本文件的使用可能涉及到某些有危險的材料、操作及設(shè)備，但并未對所有的安全

問題都提出建議。因此，用戶在使用本文件前應(yīng)建立適當(dāng)?shù)陌踩雷o(hù)措施，并確定相關(guān)規(guī)章

限制的適用性。

1范圍

本文件規(guī)定了大米中2-乙酰基-1-吡咯啉的頂空固相微萃?。?lián)氣相色譜質(zhì)譜測定方

法。

本文件適用于大米中2-乙?；?1-吡咯啉的測定。大米中其他風(fēng)味物質(zhì)也可參照本文件，

本文件未做驗證。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4方法概要

試樣經(jīng)粉碎后，經(jīng)頂空固相微萃取串聯(lián)氣相色譜質(zhì)譜儀（HS-SPME-GC-MS）檢測；以

保留時間及特征離子的相對豐度定性，外標(biāo)法定量。

5試劑和材料

5.1試劑

無水乙醇（C６H6O，CAS號：64-17-5）：色譜純。

純水：三級水。

5.2標(biāo)準(zhǔn)品

2-乙?；?1-吡咯啉（縮寫2-AP）（C６H９NO，CAS號：85213-22-5）：純度：≥95.0%。

5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

5.3.12-AP標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱取2-AP標(biāo)準(zhǔn)品（5.2）10.0mg（精確至0.1

mg）于10mL容量瓶中，立即用無水乙醇（5.1）定容至刻度，放置于-80℃冰箱，有效期6

個月。

5.3.22-AP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（100.0mg/L）：取2-AP標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（5.3.1）1.0mL于10mL容

量瓶中，用無水乙醇（5.1）定容，放置于-20℃冰箱，有效期3個月。

3

2-AP基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：準(zhǔn)確吸取2-AP標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.3.2）0.05mL、0.25mL、0.50mL、

0.75mL、1.00mL、1.25mL于10mL的容量瓶中，加無水乙醇定容至刻度，配得濃度分別

為0.5mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、7.5mg/L、10.0mg/L、12.5mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)工

作溶液的濃度亦可根據(jù)實際情況自行調(diào)整。分別取10μL標(biāo)準(zhǔn)工作液加入到1g的空白大米粉

中（空白大米粉的制備：乙醇反復(fù)洗滌大米粉，至香氣成分含量在GC-MS中無法檢出或含

量很低，并自然晾干；或者用超臨界二氧化碳萃取出去大米中的香氣成分），測定方式同樣

品的測定。以在空白基質(zhì)中的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲

線。

5.4材料

頂空瓶：20mL。

6儀器和設(shè)備

6.1氣相色譜-質(zhì)譜儀（GC-MS）：儀器至少應(yīng)包括汽化室、控溫色譜柱箱、配有電子轟擊

電離源（EI源）的質(zhì)譜檢測器和色譜工作站（詳見第8章）。色譜柱：5%苯基-95%聚二甲

基硅氧烷，或其他類型色譜柱若被驗證能夠達(dá)到良好的分離效果亦可用于本文件。

6.2分析天平：精確到0.0001g和0.01g。

6.3固相微萃取裝置。

6.4棕色容量瓶：10mL、25mL、50mL，A級，若干。

6.5移液槍：1μL～10μL、10μL～100μL、100μL～1000μL、0.5mL～5mL、

1mL～10mL。

6.6水浴鍋。

6.7渦旋震蕩器。

6.8粉碎機(jī)。

6.9標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩：0.25mm。

7試樣及其制備

稱取大米樣品250g，粉碎過標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩（6.8）后于樣品瓶中，宜用封口膜封口后，4℃

條件下保存。

8分析步驟

8.1樣品前處理

稱取1.00g試樣（精確至0.01g）于20mL玻璃頂空瓶中，加入5mL水（5.1），立即

用壓蓋機(jī)壓緊蓋子，利用CAR/DVB/PDMS固相萃取頭在60℃水浴下萃取30min，待上機(jī)

測定。

8.2測定

4

8.2.1參考色譜質(zhì)譜工作條件（表1）

表1參考色譜-質(zhì)譜工作條件

色譜-質(zhì)譜工作條件/儀器參數(shù)

控制方式HS-SPME-GC-MS

載氣氦氣（He），純度≥99.999%，流速1mL/min。

進(jìn)樣模式不分流

進(jìn)樣系統(tǒng)

分流比

進(jìn)樣口溫度/℃280

解析時間/min5

GC

類型5%苯基-95%二甲基聚硅氧烷石英毛細(xì)管柱，或性能相當(dāng)者。

柱長度/m30

色譜柱

膜厚/μm0.25

內(nèi)徑/mm0.25

最高溫度/℃325

柱箱

初溫40℃，保持5min，以5℃/min升溫至150℃，保持3min，再以15

程序升溫方式

℃/min升溫至250℃，保持5min。

離子源（EI）溫度/℃280

電子轟擊源70eV

接口溫度/℃280

MS

溶劑延遲時間/min0

是不是改成定量

定性SIM。Commented[M1]:

采集方式

定量SIM

注：色譜條件允許根據(jù)實際情況適當(dāng)變動，上述條件僅供參考。

表22-AP的定性定量參考質(zhì)譜條件

目標(biāo)化合物保留時間，min定性離子對，m/z定量離子，m/z定性離子豐度比碰撞電壓CE，V

模式?jīng)]有碰撞電壓

83和1114：10：2.6無Commented[M2]:sim

2-AP8.11111/83/68

定性分析Commented[M3]:和5.3.2重復(fù)

5

通過對比試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)物的保留時間及特征離子的相對豐度定性，所檢測的特

定2-AP色譜峰信噪比（S/N）大于3，被測試樣中特定2-AP的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)

化合物的保留時間比較，相對誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。同時，被測試樣中特定2-AP的相應(yīng)特

征離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液中特定2-AP的色譜豐度比，允許的偏差見表3。

表3定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差

%

相對離子豐度>50>20～50>10～20≤10

允許相對偏差±20±25±30±50

8.2.3定量分析

采用外標(biāo)法定量，將SPME萃取頭插入進(jìn)樣口后解析5min后拔出萃取頭，試樣中待測

組分注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，得到相應(yīng)的2-AP的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中

2-AP的濃度。試樣待測液中的被測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)，若試樣待測

液的質(zhì)量濃度超過曲線上限濃度，使用空白基質(zhì)提取溶液稀釋后測定。上述條件下，0.5

mg/kg2-AP標(biāo)準(zhǔn)溶液（空白基質(zhì)配）的選擇離子監(jiān)測（SIM）色譜圖（TIC）和質(zhì)譜圖見附

錄A。

8.3空白試驗

采用空白基質(zhì)，按照8.1~8.2的規(guī)定的操作。

9質(zhì)量控制

通過分析QC樣品以確保儀器狀態(tài)正?；驒z測過程無誤，可每批次運(yùn)行5個試樣后驗證一

次標(biāo)準(zhǔn)曲線或分析QC樣品，測定結(jié)果與QC樣品的參比值之差應(yīng)小于再現(xiàn)性要求，否則應(yīng)確

定誤差來源，并對方法操作和儀器狀態(tài)進(jìn)行必要檢查。如果實驗室已經(jīng)建立QC或質(zhì)量保證

（QA）協(xié)議，則在確認(rèn)測試結(jié)果可靠性時可以使用。

10結(jié)果計算

試樣中2-AP的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計，按式（1）計算：

ω=ρ―ρ0????????????（1）

式中：

ω—試樣中2-AP質(zhì)量分?jǐn)?shù)的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

?—基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

?0—通過標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計算得空白基質(zhì)的濃度的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

計算結(jié)果用重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，精確至3位有效

數(shù)字。

11精密度和靈敏度

11.1精密度

6

在重復(fù)性條件下獲得的２次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。

11.2靈敏度

方法檢出限為0.01mg/kg，方法定量限為0.03mg/kg。

12試驗報告

試驗報告至少應(yīng)給出以下內(nèi)容：

a)試樣編號；

b)使用的文件；

c)采用方法；

d)試驗項目；

e)試驗結(jié)果；

f)試驗人員；

g)試驗日期。

附錄A

（資料性）

大米中2-AP的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖和離子對圖

7

大米中2-APTIC色譜圖和離子對圖分別見圖A.１和圖A.２。

手分

8.3e7123#662[動積]2-apTICTIC

counts

8.0e7

7.0e7

6.0e7

5.0e7

4.0e7

3.0e7

2.0e7

1.0e7

0.0e0

min

-7.8e6

3.6