DB37T 3674-2019 飼料中維生素A、維生素D3、維生素E的同步快速測定 高效液相色譜法　　

DB37DB37/T3674—2019步快速測定高效液相色譜法2019-08-30發(fā)布2019-09-30實施山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 4 5 5 71本方法定量限：維生素A乙酸酯為10000IU/kg；維生素D3為40000IU/kg；維生素E乙酸酯為10024.7維生素E標準工作溶液（1mg/mL稱取DL-а-生育酚乙酸酯）：待冷卻至室溫后，準確加入100mL正己烷（4.2加蓋、劇烈振搖（頻率250次/min）15置分層后再次準確加入100mL正己烷（4.2），重復提取一次，靜置；待正己烷層變澄清透明，且中間37.3液相色譜參考條件色譜柱：C18,長250mm,內徑4.6mm,粒徑5μm,或性能相當者。柱溫：30℃;流速：1.0mL/min;檢測波長：維生素A乙酸酯325nm;維生素D?264nm;維生素E乙酸酯285nm。7.4標準系列溶液7.4.1維生素A標準系列溶液：準確移取適量標準工作液(4.8)于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定7.4.2維生素Ds標準系列溶液：準確移取適量標準工作液(4.9)于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋7.4.3維生素E標準系列溶液：準確移取適量標準工作溶液(4.7)于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋按照7.3給出的色譜參考條件，依次上機測定標準系列溶液和試樣溶液。生素Ds和維生素E的濃度為橫坐標，以其響應值(峰面積)為縱坐標，繪制標準曲線，標準曲線相關系8試驗數據處理8.1維生素A乙酸酯含量8.1.1試樣中維生素A乙酸酯的含量w1質量分數[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，單點校準按式(1)計算：m——試樣質量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);n?——稀釋倍率；4Pr——維生素A乙酸酯標準工作液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);P?——試樣溶液峰面積值；8.1.2試樣中維生素A乙酸酯的含量w1質量分數[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，多點校準按式(2)計算：m——試樣質量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);n?——稀釋倍率；c?——由標準曲線查得試樣中待測物色譜峰面積對應的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);f?——轉換系數，1國際單位(IU)相當于0.344μg維生素A乙酸酯。8.2維生素D?含量8.2.1試樣中維生素Ds含量w2質量分數[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，單點校準按式(3)計算：m——試樣質量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);P?——維生素D?標準工作液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);Ps——試樣溶液峰面積值；8.2.2試樣中維生素Ds含量w2質量分數[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，多點校準按式(4)計算：m——試樣質量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);n?——稀釋倍率；5C?——由標準曲線查得試樣中待測物色譜峰面積對應的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);8.3維生素E乙酸酯含量8.3.1試樣中維生素E乙酸酯含量w3質量分數[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，單點校準按式(5)計算：m——試樣質量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);n?——稀釋倍率；Ps——維生素E乙酸酯標準工作液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);fs——轉換系數，轉換系數，1國際單位(IU)維生素E相當于1.0mgdl-α-生育酚乙酸酯。8.3.2試樣中維生素E乙酸酯含量w3質量分數[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，多點校準按式(6)計算：m——試樣質量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);C?——由標準曲線查得試樣中待測物色譜峰面積對應的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);f?——轉換系數，轉換系數，1國際單位(IU)維生素E相當于1.0mgdl-a-生育酚乙酸酯。9精密度在重復性條件下兩次獨立測試結果與其算術平均值的絕對差值不大于該算術平均值的10%。6(規(guī)范性附錄)維生素A乙酸酯、維生素D?、維生素E乙酸酯標準溶液濃度校正方法a)取維生素A乙酸酯標準儲備液(1000μg/mL)100ul于100mL的棕色容量瓶中，用異丙醇定容至刻度，混勻，取1cm石英比色杯，以異丙醇為空白參比，按照表A.1的測定波長測定b)取維生素Ds標準儲備液(1000μg/mL)100ul于100mL的棕色容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，混勻，取1cm石英比色杯，以無水乙醇為空白參比，按照表A.1的測定波長測定其c)取維生素E乙酸酯標準儲備液(1000μg/mL)100ul于10mL的棕色容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，混勻，取1cm石英比色杯，以無水乙醇為空白參比，按照表A.1的測定波長X——維生素標準稀釋液濃度，單位為μg/mL;10——換算系數；表A.1測定波長及百分吸光系數目標物維生素D?7(資料性附錄)維生素A乙酸酯、維生素D?和維生素E乙酸酯標準溶液的高效液相色譜圖維生素A乙酸酯標準溶液的高效液相色譜圖見圖B.1。7葉圖B.1維生素A乙酸酯標準溶液色譜圖(濃度為1000μg/mL)維生素D?標準溶液的高效液相色譜圖見圖B.2。商1圖B.2維生素D?標準溶液色譜圖(濃度為1000μg/mL)維生素E乙酸酯標準溶液的高效液相色譜圖見圖B.3。姓歉乙即姓歉