植物工廠化育苗教學課件 11植物組織培養(yǎng)中常見問題及解決辦法 - 褐變問題

組培中常見問題及解決辦法——褐變

褐變（一）定義

在組培過程中，培養(yǎng)基逐漸變成褐色，培養(yǎng)材料也隨之變褐死亡養(yǎng)材料向培養(yǎng)基中釋放褐色物質(zhì)，致使的現(xiàn)象。

發(fā)生部位：在外植體與培養(yǎng)基接觸的位置，材料里面一些物質(zhì)分泌到培養(yǎng)基表面以及組培苗本身切割外植體時，體內(nèi)多酚氧化酶被激活，使細胞里的分類物質(zhì)氧化成棕褐色醌類物質(zhì)，擴撒到培養(yǎng)基后，抑制其他酶活性。從而影響所接種外植體的培養(yǎng)。

褐變導致植物死亡1、基因型：品種有關。有些植物體內(nèi)多酚氧化酶不發(fā)達，不褐化的品種。不同植物所含酚類化合物數(shù)量不同

由于多酚氧化酶活性上的差異，有些品種多酚氧化酶活性強，外植體在接種后較易褐變。2、生理狀態(tài)：規(guī)律：

幼嫩的組織在接種后褐變程度不明顯，老熟的組織在接種后褐變程度較為嚴重。木本植物比草本植物容易發(fā)生褐變外植體老化程度高，木質(zhì)素含量高，容易褐變

外植體傷口越大，酚類物質(zhì)被氧化面也越大，褐化程度越嚴重。（仙客來小葉誘導）

取材時間和部位：不同生長季節(jié)，植物體內(nèi)含分類化合物含量和多酚氧化酶活性不同。

比如蘋果、核桃，春季冬季褐變死亡率低。夏天容易褐變（二）褐化的主要原因3、培養(yǎng)基成分：無機鹽濃度過高會使褐化程度增加

細胞分裂素的水平過高也會刺激某些外植體的多酚氧化酶的活性，從而使褐化現(xiàn)象加深。

4、培養(yǎng)條件不當：

例如光照過強、溫度過高、培養(yǎng)時間過長等，均可使多酚氧化酶的活性提高，從而加速被培養(yǎng)的外植體的褐變程度。培養(yǎng)材料繼代時間：培養(yǎng)過程中，如果推遲繼代時間會導致材料褐變，最終全部死亡。

一些辦法

母株枝條先進行遮光處理，然后切取外植體培養(yǎng)抑制褐變

暗培養(yǎng)條件對抑制褐變有一定效果（酶系統(tǒng)活性受光照影響）

低溫;(溫度高容易褐變嚴重，低溫控制酚類化合物的氧化)，降低活性。如卡特蘭1、選擇合適的外植體：最好選擇生長處于旺盛的外植體。最好避免夏季高溫2、合適的培養(yǎng)條件：調(diào)節(jié)降低無機鹽成分、植物生長物質(zhì)水平、適宜溫度、及時繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象。降低激素濃度、暗光、低溫（15-20度）外植體流水沖洗后冰箱冷藏低溫處理12-14小時，滅菌后先接種到只含蔗糖的培養(yǎng)基3-7天，酚類部分滲入培養(yǎng)基中后，取出外植體用0.1%漂白粉溶液浸泡10分鐘，然后接種到培養(yǎng)基中3、使用抗氧化劑：在培養(yǎng)基中，使用維生素c，抗壞血酸等抗氧化劑能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。

0．1％～0．5％的活性炭對防止褐變也有較為明顯的效果。阻斷酚類物質(zhì)氧化過程，防止醌類物質(zhì)的形成4、連續(xù)轉(zhuǎn)移：對容易褐變的材料可間隔12～24小時培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，這樣經(jīng)過連續(xù)處理7～