《番茄及其制品中六氫番茄紅素和八氫番茄紅素的測定》

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SSFS

團體標準

T/SSFSXXXX—2023

番茄及其制品中六氫番茄紅素和八氫番茄

紅素的測定高效液相色譜法

Determinationofphytoflueneandphytoeneintomatoanditsproducts—

Highperformanceliquidchromatography

（征求意見稿）

2023-XX-XX發(fā)布2023-XX-XX實施

上海市食品學會??發(fā)布

T/SSFSXXXX—2023

番茄及其制品中六氫番茄紅素和八氫番茄紅素的測定高效液相色

譜法

警示——使用本標準的人員應(yīng)有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗。本標準并未指出所有可能的安全問題。

使用者有責任采取適當?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國家有關(guān)規(guī)定的條件。

1范圍

本文件規(guī)定了番茄及其制品中六氫番茄紅素和八氫番茄紅素的高效液相色譜測定方法。

本文件適用于番茄及其制品中六氫番茄紅素和八氫番茄紅素的測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣中的六氫番茄紅素和八氫番茄紅素經(jīng)提取劑正己烷：甲醇：丙酮（2：1：1，v/v/v）提取，用

少量乙酸乙酯溶解，甲醇：甲基叔丁基醚（1：1，v/v,色譜純）定容，采用反相色譜法分離，由紫外

檢測器檢測，參照標準品的保留時間和峰面積進行定性和定量。

5試劑和材料

除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。

乙腈(CH3CN)：色譜純。

甲醇(CH3OH)：色譜純。

甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3，MTBE]：色譜純。

正己烷(C6H14)。

丙酮（CH3COCH3）。

乙酸乙酯（C4H8O2，EA）。

提取液：正己烷：甲醇：丙酮（2：1：1，v/v/v）按體積比混勻備用。

六氫/八氫番茄紅素儲備液稀釋液：甲醇：甲基叔丁基醚（1：1，v/v）按比混勻備用。

六氫番茄紅素（C40H60，CAS號：540-05-6）：純度大于或等于97%。

八氫番茄紅素（C40H62，CAS號：540-05-5）：純度大于或等于97%。

六氫番茄紅素/八氫番茄紅素標準儲備液（1mg/mL）：1mg六氫番茄紅素/八氫番茄紅素標準品，

分別加1mL乙酸乙酯溶解，轉(zhuǎn)移至棕色小瓶封口。于-20℃下避光貯存，使用期限不超過1個月，標準

儲備液用前需參考初次試驗所得標準曲線及附錄A提供的六氫和八氫番茄紅素標準品的色譜和光譜圖，

若濃度有所降低或峰型和光譜圖與參考有異，則判定標準儲備液失效，改用標準曲線來定量。

六氫番茄紅素/八氫番茄紅素標準系列工作溶液：準確移取適量標準儲備液（5.11）于1mL容量

瓶中，用稀釋液（5.8）稀釋定容配成系列標準溶液，濃度分別為2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、

10μg/mL、12.5μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的混合標準工作液。臨用現(xiàn)配。

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T/SSFSXXXX—2023

6儀器設(shè)備

高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。

天平：感量為0.01g和0.0001g。

打漿機（果汁機、料理機皆可）。

篩網(wǎng)（14目）。

磁力攪拌器。

真空泵。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

超聲波清洗器。

微孔濾膜：0.22μm，聚四氟乙烯（PTFE）材質(zhì)。

7樣品制備

含水樣品

新鮮番茄：隨機取樣2個～4個，去蒂、清洗、切塊（約1cm3～2cm3），用打漿機（6.3）破碎30s

成勻漿，勻漿過14目篩網(wǎng)（6.4）去除絕大多數(shù)皮和籽。取番茄漿5g，精確到1mg，取樣抽濾去除絕大

多數(shù)水分，將濾渣轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，待下一步提取。

番茄飲料：依據(jù)產(chǎn)品中番茄的添加量，取相當于含鮮番茄15g～20g的樣品，精確到1mg，取樣抽

濾去除絕大多數(shù)水分，將濾渣轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，待下一步提取。

番茄醬：稱取0.5g番茄醬至錐形瓶中，待下一步提取。

粉劑

番茄粉：稱取0.5g番茄粉至錐形瓶中，待下一步提取。

油劑

番茄籽油：稱取0.5g番茄籽油至錐形瓶中，待下一步溶解稀釋。

8試驗步驟

試樣溶液的制備

平行做三份試驗。對于含水樣品和粉劑，取新鮮番茄漿/番茄飲料5g或0.5g番茄醬/番茄（干）粉，

加入20mL提取液（5.7）：正己烷：甲醇：丙酮混合提取液（2：1：1，v/v/v）于50mL-100mL錐形

瓶中，磁力攪拌20min；之后，抽濾收集濾液，重復萃取濾渣2次直至濾渣顏色褪盡，合并濾液。將濾

液倒入分液漏斗中，靜置，若樣品水分多則會發(fā)生分層，加入5mL去離子水，加速分液，取上層有機層

進行下一步旋蒸；若樣品水分少不分層，則可直接旋蒸去除有機溶劑。40℃、250mbar旋轉(zhuǎn)蒸干后乙

酸乙酯溶解，并用稀釋液（5.8）定容至10mL容量瓶中，在4℃冰箱中保存待測。對于油劑樣品，先用

少量乙酸乙酯溶解，后用稀釋液（5.8）定容至10mL容量瓶中，在4℃冰箱中保存待測。樣品經(jīng)0.22μm

微孔濾膜（6.9）過濾后存于棕色液相小瓶中，進行高效液相色譜分析。

測定

8.2.1高效液相色譜參考條件

色譜柱：YMCCarotenoidsC30（250mm×4.6mm，粒徑5μm），或性能相當者。

流速：1.0mL/min。

柱溫：20℃。

檢測波長：八氫番茄紅素：286nm，六氫番茄紅素：348nm。

檢測設(shè)備：所選檢測設(shè)備（二極管陣列檢測器，DAD/PDA）需一次可以檢測2種波長；若一次無法檢

測2種波長，同一樣品需在不同波長下各測1次。

進樣體積：20μL。

2

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流動相：A：甲基叔丁基醚：甲醇=80：20；B：甲醇：甲基叔丁基醚：水=90：5：5，梯度洗脫條

件見表1。

表1梯度洗脫條件

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

04555

205050

28955

32955

341000

371000

404555

504555

8.2.2標準曲線的制備

在儀器最佳條件下，將標準系列工作溶液（5.12）注入高效液相色譜儀中測定。記錄出峰時間和峰

面積。以標準系列工作溶液的濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，標準曲線的相關(guān)系

數(shù)不應(yīng)低于0.998。標準溶液中六氫番茄紅素或八氫番茄紅素的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。六

氫番茄紅素和八氫番茄紅素標準溶液的液相色譜圖參見附錄A。

8.2.3樣品測定

在儀器最佳條件下，將試樣溶液（8.1）注入高效液相色譜儀中測定。記錄出峰時間和峰面積。監(jiān)

測光譜圖并與標準溶液的光譜圖（附錄A）對照。試樣溶液（8.1）中六氫番茄紅素或八氫番茄紅素的響

應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。如超出線性范圍，應(yīng)將試樣溶液用稀釋液（5.8）稀釋（稀釋倍數(shù)n）

至線性范圍內(nèi)，上機測定。單點校準定量時，試樣溶液中的六氫番茄紅素或八氫番茄紅素濃度與標準溶

液濃度相差不超過30%。

空白試驗

不稱取試樣，其余均按照8.2進行。

9結(jié)果計算與表述

試樣中六氫番茄紅素或八氫番茄紅素的含量按式（1）計算

··························································(1)

?×?

式中：?=?

——試樣中六氫番茄紅素或八氫番茄紅素的含量，單位為微克每克（μg/g）；

——由標準曲線計算得到的樣品溶液中六氫番茄紅素或八氫番茄紅素的濃度，單位為微克每毫升

（μg?/mL）；

?——試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

注?：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定后的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

?

10精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不超過其算術(shù)平均值的10%。

11檢出限和定量限

當取樣量為5g番茄漿/番茄飲料時，檢出限為0.3μg/g，定量限為1.0μg/g。

當取樣量為0.5g番茄醬/番茄粉/番茄籽油時，檢出限為3μg/g，定量限為10μg/g。

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A

A

附錄A

（資料性）

八氫番茄紅素和六氫番茄紅素的色譜圖與光譜圖

A.1八氫番茄紅素色譜圖與光譜圖

八氫番茄紅素色譜圖與光譜圖，見圖A.1與圖A.2。

0.12

0.10

8

.

6

0.081

9

9

.

0

0.068

A

6

U

0.04

0.02

0.00

0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.00

分鐘

圖A.1八氫番茄紅素標準品色譜圖

8.620峰1

0.12285.5

0.10

0.08

0.06

A

U

0.04213.3

0.02

0.00

9.086峰2

286.7

0.060

0.050

0.040

216.9

A0.030

U

0.020

0.010

340.4359.1390.6

0.000

210.00220.00230.00240.00250.00260.00270.00280.00290.00300.00310.00320.00330.00340.00350.00360.00370.00380.00390.00400.00

納米

圖A.2八氫番茄紅素標準品光譜圖

A.2六氫番茄紅素色譜圖與光譜圖

六氫番茄紅素色譜圖與光譜圖，見圖A.3與圖A.4。

0.060

0.0501

1

.

5

0.0402

9

1

A

9

0.0302

U

9

.

.

.

7

0

9

5

2

9

0.0202

9

4

0.010

1

2

.

0.0008

7

0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.00014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.00

分鐘