紫外可見分光光度法

《儀器分析》課程紫外-可見吸收光譜法第一章第一章紫外-可見光光度法§1基本原理

§2化合物的紫外-可見吸收光譜

§3紫外-可見分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)與原理

§4應(yīng)用

§5實(shí)驗(yàn)技術(shù)§1基本原理

紫外-可見分光光度法是利用物質(zhì)對紫外-可見光的吸收特征和吸收強(qiáng)度進(jìn)行定性和定量的儀器分析方法。一、光的基本性質(zhì)

光是一種電磁波，具有波粒二象性。

(1).光的波動(dòng)性

可用波長

、頻率

、光速c等參數(shù)來描述：

=c/

波譜區(qū)域的劃分微波可見光、紫外光的波長范圍分別為多少？可見光：400-780nm紫外光：200-400nm(2).光的粒子性光是由光子組成，光子具有能量。光子的能量：

E=h=h·c/

（普朗克常數(shù)：h=6.626×10-34J·S)

光子能量與它的頻率成正比，與波長成反比，與光強(qiáng)度無關(guān)。光的波長越短（頻率越高），其能量越大。單色光：復(fù)合光：可見光：同一波長的光稱為單色光；不同波長的光組成的光稱為復(fù)合光；凡是被肉眼感受到的光稱為可見光；

波長范圍為400-780nm復(fù)合光單色光吸收黃色光反射藍(lán)色光物質(zhì)顏色的產(chǎn)生吸收綠色光透過紫色光固體液體互補(bǔ)色二、物質(zhì)對光的選擇性吸收

E=E1-

E0=h=hc/λλ=hc/

EM+

h

M*基態(tài)激發(fā)態(tài)E0

（△E）E1E2E1E0基態(tài)激發(fā)態(tài)

E物質(zhì)對光選擇性吸收例題

某分子中兩個(gè)電子能級之間的能級差為1eV，若要電子在兩個(gè)能級之間發(fā)生躍遷，需要吸收光的波長為多少納米？（1eV=1.602×10-19J）解：根據(jù)注意：統(tǒng)一單位?。。。?/p>

用不同波長的光依次透過待測物質(zhì)，并測量物質(zhì)對不同波長的光的吸收程度（吸光度），以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得到該物質(zhì)在測量波長范圍內(nèi)的吸收曲線。吸收曲線三、光譜的吸收曲線2.光譜的吸收曲線①同一種物質(zhì)對不同波長光的吸光度不同。吸光度最大處對應(yīng)的波長稱為最大吸收波長λmax②不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似，λmax不變。但在同一波長處的吸光度隨溶液濃度增加而增大，定量分析依據(jù)。圖為KMnO4水溶液的吸收曲線③不同物質(zhì)吸收曲線特性（曲線形狀、峰的數(shù)目，位置，強(qiáng)度）不同?？勺鳛槲镔|(zhì)定性分析的依據(jù)。圖1為KMnO4水溶液的吸收曲線圖2為苯溶液的吸收曲線定量的依據(jù)是什么？？光強(qiáng)度：單位時(shí)間（1s）內(nèi)照射在單位面積（1cm2）的上光能量。I表示。透射率：透過的光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0之比，表示為：吸光度：物質(zhì)對光的吸收程度

A

＝－lgT四、光的吸收定律四、光的吸收定律1.朗伯–比爾定律布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)系：1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有類似的關(guān)系:A=K1

b

A=K2

c二者的結(jié)合稱為朗伯-比耳定律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A=

kbc

朗伯－比爾定律：A：吸光度；K：比例常數(shù)；

b：吸收介質(zhì)的厚度，一般以cm為單位；

c：吸光物質(zhì)的濃度，單位可以是g/L或mol/L。A＝

kbc

k？k-吸光系數(shù)K—吸光系數(shù)，液層厚度為1cm的單位濃度溶液，對一定波長光的吸光度k越大，表示該物質(zhì)對光的吸收能力越強(qiáng)k

的兩種表示方式：摩爾吸光系數(shù)質(zhì)量吸光系數(shù)溶液以mol/L

為單位，K為摩爾吸光系數(shù)（ε），單位L·mol-1·cm-1，A=εbc例題某化合物的λmax=280nm，光線通過該化合物的1.0×10-5mol·L-1溶液時(shí)，透射率為50%（用2cm吸收池），求該化合物在280nm處的摩爾吸光系數(shù)。解：已知，

λmax=280nm，c=1.0×10-5mol·L-1，

T=50%，b=2cm則

A=-lgT=-lg0.5=0.301根據(jù)朗伯-比爾定律

A=ε·b·c

ε==0.301/（2×1.0×10-5

）

=1.51×104（L·mol-1·cm-1）Abc

多組分混合體系中，如果各組分分子之間不存在離解、聚合、化學(xué)反應(yīng)等化學(xué)平衡時(shí)，其吸光度具有加合性，即：2.朗伯-比爾定律的應(yīng)用---吸光度的加合性A總λ=A1λ+A2λ+…Anλ3.朗伯—比耳定律偏離的原因這種現(xiàn)象稱為對朗伯—比耳定律的偏離。1.00.50AC正偏離負(fù)偏離A=

kbc

（1）.濃度的限制稀溶液Beer定律的假定：只有在稀溶液時(shí)才基本符合。當(dāng)溶液濃度C>0.01mol/L

時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了對光的吸收。引起這種偏離的因素（2）.非單色入射光引起偏離Lambert–Beer定律的前提條件之一是入射光為單色光。但實(shí)際上難以獲得真正意義上的純單色光。分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄光普通帶。復(fù)合光可導(dǎo)致對朗伯-比耳定律的正或負(fù)偏離。e.g.鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡：CrＯ42-＋2H＋

=Cr2Ｏ72-＋H2Ｏ

CrＯ42-、Cr2Ｏ72-的吸光性質(zhì)不同，即ε(λ)不同。此時(shí)溶液pH對測定有重要影響。（３）.溶液發(fā)生化學(xué)變化引起偏離作業(yè)P262-5,14§1.2化合物的紫外-可見吸收光譜一、有機(jī)化合物的紫外—可見吸收光譜1、有機(jī)化合物的電子躍遷有機(jī)化合物的紫外吸收光譜，取決于分子中外層電子的性質(zhì)。有機(jī)化合物分子中通常有三類電子：σ電子、π電子、n電子一、有機(jī)化合物的紫外一可見吸收光譜1.躍遷類型分子軌道理論：單鍵σ電子雙鍵π電子未成鍵n電子吸收△E躍遷σ*反鍵軌道π*反鍵軌道成鍵軌道電子能級及電子躍遷sp

*s*RKE,Bnp

ECOHnpsH電子躍遷的類型σ→σ*n→σ*π→π*n→π*四種躍遷的能量大小順序?yàn)椋骸鱁σ→σ*>△E

n→σ*>△E

π→π*>△E

n→π*

（1）σ→σ*躍遷：這是一切飽和有機(jī)化合物都可能產(chǎn)生的電子躍遷類型，躍遷需要能量大，吸收短波長的輻射,<200nm，如甲烷的λmax為125nm,乙烷λmax為135nm。因此可以作為分光光度法的溶劑。（2）n→σ*躍遷：含有雜原子（如N、O、S等）的飽和烴衍生物都可發(fā)生這種躍遷。所需能量較大。吸收波長為150～250nm，大部分在遠(yuǎn)紫外區(qū)，近紫外區(qū)仍不易觀察到。如一氯甲烷、甲醇n→σ*躍遷的λmax分別為173nm、183nm。（3）π→π*躍遷：不飽和烴、共軛烯烴和芳香烴類均可發(fā)生該類躍遷，如乙烯π→π*躍遷的λmax為170nm。（4）n→π*躍遷：分子中孤對電子和π鍵同時(shí)存在時(shí)發(fā)生n→π＊躍遷。丙酮n→π＊躍遷的λmax為275nm。（5）電荷遷移躍遷：分子本身具有電子給予體和電子接受部分，外來輻射照射，電子從具有給予體特性的部分轉(zhuǎn)移到具有電子接受體特性的部分所發(fā)生的躍遷。其譜帶較寬，吸收強(qiáng)度大。例：NCH3CH3－+hv電子接受體電子給予體A.生色團(tuán)2.紫外光譜常用術(shù)語是指分子中產(chǎn)生吸收帶的主要官能團(tuán)（通常含有π鍵）；吸收帶的λmax＞210nm,屬于π→π*

或n→π*

等躍遷類型。生色團(tuán)為不飽和基團(tuán)：C=C、N=O、C=O、C=S等；B.助色團(tuán)是指分子中的一些帶有非成鍵電子對的基團(tuán)本身在紫外-可見光區(qū)不產(chǎn)生吸收，但是當(dāng)它與生色團(tuán)連接后，增強(qiáng)生色團(tuán)的生色能力，使生色團(tuán)的吸收帶向長波移動(dòng)，且吸收強(qiáng)度增大。助色團(tuán)為含有未共用電子對的雜原子基團(tuán)：-OH、-Cl、-BrC.紅移與藍(lán)移

有機(jī)化合物的吸收譜帶常常因引入取代基或改變?nèi)軇┦棺畲笪詹ㄩLλmax和吸收強(qiáng)度發(fā)生變化:

λmax向長波方向移動(dòng)稱為紅移，向短波方向移動(dòng)稱為藍(lán)移(或紫移)。D.增色效應(yīng)和減色效應(yīng)吸收強(qiáng)度即摩爾吸光系數(shù)ε增大或減小的現(xiàn)象分別稱為增色效應(yīng)或減色效應(yīng)，如圖所示。3.影響紫外-可見吸收光譜的因素（1）共軛效應(yīng)

共軛體系的形成使λmax紅移，并且共軛體系越長，紫外光譜的最大吸收越移向長波方向。CH2＝CH2

λmax為170nm左右，ε＝1×104L·mol-1·cm-1

CH2＝CH－CH＝CH2

λmax為210nm，ε＝2.1×104L·mol-1·cm-1

（2）溶劑效應(yīng)物質(zhì)在溶液中測定，因使用溶劑不同而產(chǎn)生不同的吸收光譜。溶劑的影響1：乙醚2：水12250300亞異丙基丙酮非極性→極性n

→

*躍遷：藍(lán)移；；

→*躍遷：紅移；；CH3COCHC(CH3)2n

→

*躍遷

→*躍遷n

→

*躍遷

→*躍遷

→*躍遷n

→

*躍遷（1）π→π*躍遷所產(chǎn)生的吸收峰隨著溶劑極性的增加而向長波長方向移動(dòng)（紅移）。（2）n→π*躍遷所產(chǎn)生的吸收峰隨溶劑極性的增加而向短波長方向移動(dòng)（藍(lán)移）。（3）溶劑pH值對光譜的影響如Fe3+與水楊酸在不同pH條件下的配合物（a）苯酚的UV光譜圖（b）苯胺的UV光譜圖溶液酸堿性對紫外光譜的影響4、常見有機(jī)化合物的紫外-可見吸收光譜（1）飽和烴及其取代衍生物烷烴

C—C，C—H只產(chǎn)生σ→σ*

躍遷，λmax＜150nm，在近紫外區(qū)無吸收。因而飽和烷烴可用作紫外吸收測定的溶劑。如，CH4λmax=125nm；

CH3CH3λmax=135nm飽和烴上H被雜原子取代σ→σ*紅移，并產(chǎn)生n→σ*

躍遷。

n→σ*仍在遠(yuǎn)紫外區(qū)；如：

CH4:σ→σ*125nm，

CH3cl:n→σ*173

nm（2）不飽和烴及共軛烯烴σ、π：σ→σ*躍遷、π→π*躍遷單個(gè)雙鍵，隔離雙鍵：π→π*躍遷，吸收峰在遠(yuǎn)紫外區(qū)，乙烯170nm，1,5-己二烯185nm共軛雙鍵：

π→π*躍遷紅移，增色，

共軛雙鍵中π→π*躍遷所產(chǎn)生的吸收帶稱為K帶，其特點(diǎn)是強(qiáng)度大（ε＞104），λmax≥217nm，K帶的λmax、εmax與共軛體系的數(shù)目、位置、取代基的種類有關(guān)。（3）芳香族化合物

苯：具有環(huán)狀共軛體系，由π→π*產(chǎn)生三個(gè)吸收帶：

E1184nm4.7×104E2203nm7.9×103B255-230nmB帶是由于π→π*躍遷和苯環(huán)的振動(dòng)重疊引起，也稱為精細(xì)結(jié)構(gòu)吸收帶。B帶是芳香族化合物的重要特征吸收帶。思考1、庚烷、環(huán)己烷等烷烴在200-400nm內(nèi)有無吸收？2、甲苯、丁二烯在200-400nm內(nèi)有無吸收？3、如果環(huán)己烷中含有少量的雜質(zhì)苯，其紫外吸收曲線會(huì)怎樣?

作業(yè)P2617第三節(jié)紫外-可見分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)與原理一、基本組成光源單色器吸收池檢測器顯示系統(tǒng)1.光源作用：供給符合要求的入射光。要求：具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長的使用壽命。

可見光區(qū)：鎢燈、碘鎢燈作為光源，其輻射波長范圍在320～2500nm。紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射160～375nm的連續(xù)光譜。氘燈鎢燈

作用：將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長單色光的光學(xué)系統(tǒng)。①入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；②準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；③色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；④聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。2.單色器心臟3.吸收池（比色皿）（1）吸收池作用：盛放液態(tài)樣品的器皿（3）規(guī)格：幾mm-幾cm，1cm（2）吸收池種類：玻璃，對紫外有吸收，可見光區(qū)

石英，可見及紫外光區(qū)（4）材料、光學(xué)特性、光程長度影響測量結(jié)果

吸收池要挑選配對，使它們的性能基本一致（5）吸收池的形狀可拆卸圓形測量池兩面透光圓形測量池兩面透光1cm長方形測量池兩面透光氣體測量池兩面透光微量測量池兩面透光流動(dòng)測量池兩面透光（6）使用比色皿的注意事項(xiàng)1.拿取比色皿時(shí)，只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃，不可接觸光學(xué)面。毛面光面2.裝溶液時(shí)，最好為比色皿的2/3高度處，不可太滿（溢出）。4.凡含有腐蝕玻璃的物質(zhì)溶液，不能長時(shí)間盛放在比色皿中。5.使用后立即用水沖洗干凈。3.測量前，必須擦干比色皿外壁溶液，只能用擦鏡紙或絲綢擦拭光學(xué)面。4.檢測器（1）作用：光電轉(zhuǎn)換元件

檢測單色光通過溶液被吸收后透射光強(qiáng)度光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?/p>

（2）種類：光電池、光電管和光電倍增管應(yīng)用廣泛硒電池、少用5.信號處理及顯示系統(tǒng)作用：放大信號并以適當(dāng)?shù)姆绞街甘净蛴涗洐z流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理。二、紫外-分光光度計(jì)的類型波長范圍紫外-可見分光光度計(jì)（751型分光光度計(jì)）可見分光光度計(jì)（721，722型分光光度計(jì)）光路結(jié)構(gòu)單光束分光光度計(jì)雙波長分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)721型分光光度計(jì)1801型紫外-可見分光光度計(jì)1.單光束分光光度計(jì)優(yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡單、價(jià)格低廉．缺點(diǎn)：受光源、檢測器的波動(dòng)影響：不能自動(dòng)記錄吸收光譜。國產(chǎn)721型、722型、751型、724型

0.575光源單色器吸收池檢測器顯示二.紫外-可見分光光度計(jì)儀器的類型2.雙光束分光光度計(jì)斬光器優(yōu)點(diǎn)：能自動(dòng)記錄吸收光譜（自動(dòng)掃描）；自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化引起的誤差；是目前用得最多的分光光度計(jì)．光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射率，經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來3.雙波長分光光度計(jì)切光器將兩束光以一定頻率交替照射同一吸收池顯示器顯示兩個(gè)波長吸光度差值適用于：多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)分析，存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下任務(wù)：掌握儀器的基本操作第四節(jié)紫外-可見分光光度法的應(yīng)用

紫外-可見分光光度法可用于有機(jī)化合物的定性鑒定、結(jié)構(gòu)推斷和純度檢驗(yàn)。1.未知化合物的定性鑒定

定性依據(jù)：吸收光譜的形狀、吸收峰位置、吸收峰的數(shù)目等。

方法：相同條件下，測定未知物和已知標(biāo)準(zhǔn)物的吸收光譜，對比圖譜。

目前最常用的標(biāo)準(zhǔn)圖譜：薩特勒標(biāo)準(zhǔn)圖譜庫一、定性分析一、定性分析與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照1.未知化合物的鑒定與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)譜圖對照最常用：薩特勒標(biāo)準(zhǔn)圖譜共收集46000種化合物的紫外吸收光譜，查找方便2.有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)推斷

有機(jī)物不少基團(tuán)(生色團(tuán))，如羰基、苯環(huán)、硝基、共軛體系等，都有其特征的紫外或可見吸收帶，某些特征基團(tuán)的判別

在204nm附近有中強(qiáng)吸收帶，在260nm附近有弱吸收帶且有精細(xì)結(jié)構(gòu)，是苯環(huán)的特征吸收

200-750nm無吸收峰，烷烴、飽和脂肪族3.化合物純度檢驗(yàn)化合物在紫外區(qū)沒有明顯的吸收峰，而雜質(zhì)在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，就可以紫外吸收曲線檢測出該化合物所含的雜質(zhì)。如乙醇中雜質(zhì)苯測定檢查(實(shí)驗(yàn)三)二、定量分析定量分析可見分光光度定量分析紫外分光光度定量分析用于有色物質(zhì)的測定用于有紫外吸收的物質(zhì)的測定單組分的定量分析A.吸光系數(shù)法方法：已知待測組分吸光系數(shù)，測定溶液吸光度，代入朗伯-比爾定律公式計(jì)算含量。A=kbc

單組分的定量分析：只要求測定某一個(gè)樣品中一種組分，且在選定的測量波長下，其他組分沒有吸收即對該組分不干擾。定量分析方法例：以鄰二氮菲光度法測定Fe(Ⅱ)，稱取樣品0.500g，經(jīng)處理后，加入顯色劑，最后定容為50.0mL。用1.0cm的吸收池，在510nm波長下測得吸光度A=0.430。計(jì)算樣品中鐵的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。(ε510nm=1.1×104L·mol-1·cm-1)解：根據(jù)朗伯-比爾定律，A=kbc，則c=A/kb=0.430/(1.1×104×1)=3.91×10-5mol/L=2.19×10-6g/mL∴m(%)=2.19×10-6×50×100/0.500=0.0219B.標(biāo)準(zhǔn)對照法濃度已知標(biāo)液Cs，在一定條件下測得吸光度As待測液Cx（濃度相近），在相同條件下測得吸光度為Ax

根據(jù)朗伯-比爾定律：

As=kbcsAx=kbcx

cx=（Ax/As）·cs

引起誤差的偶然因素較多!

不可靠！！

C.標(biāo)準(zhǔn)曲線法方法：1.配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以不含被測組分空白為參比溶液，測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液吸光度，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A=a+bC。

2.在相同條件下測定樣品溶液的吸光度，從上述標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的回歸方程計(jì)算出濃度。例題

以鄰二氮菲為顯色劑，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定微量Fe2+，實(shí)驗(yàn)得到標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品的吸光度數(shù)據(jù)（見下表），試確定樣品的濃度。溶液標(biāo)準(zhǔn)1標(biāo)準(zhǔn)2標(biāo)準(zhǔn)3標(biāo)準(zhǔn)4標(biāo)準(zhǔn)5標(biāo)準(zhǔn)6樣品濃度C/(10-5mol·L-1）1.002.003.004.006.008.00Cx吸光度A0.1130.2120.3360.4340.6690.8680.712解：以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用線性處理程序進(jìn)行線性回歸處理，得回歸方程為：A=0.109×105C+0.0073,相關(guān)系數(shù)r2=0.9994標(biāo)準(zhǔn)曲線符合要求，將待測溶液吸光度代入回歸方程，的試樣濃度為:a，截距b，斜率相關(guān)系數(shù)，接近1線性好，>0.999Cx=(A-0.0073)/0.109×105

=(0.712-0.0073)/0.109×105

〓6.51×10-5mol·L-1在456nm處，用1cm比色皿測定鋅，數(shù)據(jù)如下：C：2.004.006.008.0010.00A：0.1050.2050.3100.4150.515求：1.繪制吸收曲線

2.K3.A=0.260時(shí)C=？依據(jù)：吸光度具有加和性，同時(shí)測定兩個(gè)或兩個(gè)以上組分前提：繪制兩種純物質(zhì)（x、y）的吸收光譜，三種情況2.多組分的定量分析

不重疊部分重疊相互重疊xyxyxy考核：

石灰石中微量鐵的測定83第五節(jié)實(shí)驗(yàn)技術(shù)第一章紫外-可見分光光度法84內(nèi)容概要一、樣品的制備二、儀器測量條件的選擇三、顯色反應(yīng)條件的選擇85一、樣品的制備

樣品在溶液中測定，固體轉(zhuǎn)換為溶液溶劑要求：1.對被測組分有良好的溶解能力

2.在測定波長范圍內(nèi)沒有吸收3.無毒，不易揮發(fā)，價(jià)格便宜

86二、儀器測量條件的選擇1.波長選擇

選最大吸收波長λmax為測定波長

問題：如何繪制吸收曲線？選擇原則：最強(qiáng)吸收帶的最大吸收波長作為測量波長吸收峰太尖銳，可選用靈敏度低一些的波長測量，減少偏差87(1).手動(dòng)繪制原則：先粗測再細(xì)測例：鄰菲啰啉分光光度法測定鐵含量最大吸收波長的選擇

1.粗測：在440~560nm范圍內(nèi)，間隔20nm測一個(gè)點(diǎn)，繪制吸收曲線

選擇500~520nm作為細(xì)測范圍2.細(xì)測：在500~520nm范圍內(nèi)，間隔2nm測一個(gè)點(diǎn)，繪制吸收曲線510nm為最大吸收波長繪制吸收曲線的方法88(2).自動(dòng)掃描法892.吸光度范圍的選擇光源不穩(wěn)定、讀數(shù)不準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)條件偶然變動(dòng)測量誤差實(shí)踐證明，只有待測溶液吸光度A控制在適當(dāng)范圍內(nèi)，儀器測量誤差才比較小。選擇A的測定范圍為0.2～0.8相對誤差

問題：如果測定吸光度過大或過小應(yīng)如何處理？朗伯-比耳定律A=kbc

903.儀器狹縫寬度的選擇原則：在不引起吸光度減小的情況下，選取最大的狹縫寬度。一般使用2nm縫寬??！91三、顯色反應(yīng)條件的選擇1.顯色劑及其用量的選擇顯色反應(yīng)：將待測組分轉(zhuǎn)化為有色物質(zhì)顯色劑：與待測組分形成有色物質(zhì)的試劑a.顯色劑的選擇要求：（1）與待測離子顯色反應(yīng)的產(chǎn)物組成恒定、穩(wěn)定性好、顯色條件易于控制；

（2）產(chǎn)物有較強(qiáng)的吸收能力，即ε大；92

b.顯色劑用量的選擇固定被測組分濃度和其他條件，加入不同量的顯色劑，分別測定吸光度A；

繪制吸光度A與顯色劑用量CR的關(guān)系曲線：CRabab×√√932.反應(yīng)的pH（顯色反應(yīng)的重要條件）同種金屬離子與同種顯色劑反應(yīng)，生成的配合物配位數(shù)不同、顏色不同。如Fe3+與磺基水楊酸在不同pH條件下的配合物。pH對顯色反應(yīng)的影響：介質(zhì)酸度解離程度顯色反應(yīng)完全程度94確定pH的方法：固定溶液中待測組分和顯色劑濃度，改變?nèi)芤?緩沖溶液控制)的酸度(pH)繪制A～pH曲線，從中找出為pH范圍。

ab平坦部分95小結(jié)5.pH值的選擇1.測量波長的選擇3.狹縫寬度的選擇4.顯色劑用量的選擇2.吸光度范圍的選擇最大吸收波長A在0.2~0.8之間一般2nm縫寬曲線平坦部分曲線平坦部分96課后思考題

在