生物化學(xué)課件酶化學(xué)

上海市精品課程系列生物化學(xué)第六章

酶化學(xué)第六章酶化學(xué)6.1

概述6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)6.3

酶作用機(jī)制和藥物分子的設(shè)計(jì)6.4

幾種主要形式的酶6.5

蛋白質(zhì)技術(shù)和酶技術(shù)6.1

概述酶的概念及生物催化劑的范疇酶的分類與命名酶的作用特性酶的組成和結(jié)構(gòu)6.1

概述酶的概念及生物催化劑的范疇酶促反應(yīng)：酶A+BC

底物產(chǎn)物活細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的具有高度專一性和催化效率的蛋白質(zhì)。生物催化劑包括傳統(tǒng)酶、核酶、脫氧核酶、抗體酶、生物酶工程生產(chǎn)的酶、人工酶等。6.1

概述酶的分類與命名分類簡單蛋白質(zhì)（單純酶）結(jié)合蛋白質(zhì)（結(jié)合酶）根據(jù)酶的組成成分根據(jù)酶的分子結(jié)構(gòu)根據(jù)酶促反應(yīng)性質(zhì)單體酶寡聚酶多酶體系氧化還原酶類轉(zhuǎn)移酶類水解酶類裂解酶類異構(gòu)酶類合成酶類6.1

概述氧化還原酶類AH2+B（O2）A+BH2（H2O2，H2O）乳酸脫氫酶輔酶或輔基NAD：尼克（煙）酰胺腺嘌呤二核苷酸（輔酶I）NADP：尼克（煙）酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（輔酶II）

FAD：黃素腺嘌呤二核苷酸

FMN：黃素腺嘌呤單核苷酸6.1

概述轉(zhuǎn)移酶類A·X+BA+B·X谷丙轉(zhuǎn)氨酶6.1

概述水解酶類AB+H2O

AOH

+BH脂肪酶裂解酶類ABA

+B延胡索酸水合酶6.1

概述異構(gòu)酶類A

B6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶PP6.1

概述合成酶類（連接酶類）A+B+ATP+H-O-HA－B+ADP+Pi丙酮酸羧化酶丙酮酸+CO2

草酰乙酸

ATPADP6.1

概述命名習(xí)慣命名法國際系統(tǒng)命名法底物加反應(yīng)類型（如乳酸脫氫酶）底物名稱（水解酶類，如蛋白酶）底物前冠以酶的來源（如胰蛋白酶）由兩部分組成：底物＋反應(yīng)名稱不管酶催化正反應(yīng)還是逆反應(yīng)，都用同一名稱酶的系統(tǒng)命名+酶編號系統(tǒng)命名——ATP:葡萄糖磷酸轉(zhuǎn)移酶分類數(shù)字——EC.2.7.1.1ATP+D-葡萄糖ADP+D-葡萄糖-6-磷酸6.1

概述酶的作用特性與一般催化劑相同的特性

只能催化熱力學(xué)允許的化學(xué)反應(yīng)

縮短達(dá)到化學(xué)平衡的時(shí)間，而不改變平衡點(diǎn)

在化學(xué)反應(yīng)的前后沒有質(zhì)和量的改變

微量的酶就能發(fā)揮較大的催化作用

作用機(jī)理都是降低反應(yīng)的活化能

6.1

概述非催化和催化過程自由能的變化

活化能：提高低能分子達(dá)到活化狀態(tài)的能量。6.1

概述高度的催化效率高度的專一性絕對專一性：只作用于一種底物相對專一性：可作用于一類化合物或一種化學(xué)鍵立體異構(gòu)專一性：酶對底物的立體構(gòu)型有特異要求比其它催化劑高107~1013倍乳酸脫氫酶的立

體異構(gòu)專一性酶的固有特性6.1

概述酶活性的可調(diào)節(jié)性酶活性的不穩(wěn)定性酶反應(yīng)條件溫和某些酶催化活力與輔酶、輔基及金屬離子有關(guān)6.1

概述酶的組成和結(jié)構(gòu)組成單純酶結(jié)合酶（全酶）氨基酸

酶蛋白

輔助因子金屬離子輔基輔酶小分子有機(jī)化合物；輔基與酶蛋白結(jié)合緊密，輔酶結(jié)合疏松；參與氧化還原反應(yīng)或基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)。如：Cu2+，F(xiàn)e2+/3+，K+,Mg2+，Mn2+，Zn2+等6.1

概述常見輔基或輔酶：NAD+，NADP+，F(xiàn)AD，F(xiàn)MN，TPP，CoA，F(xiàn)H4，生物素，磷酸吡哆醛二氫葉酸：底物二氫葉酸還原酶NADP+：決定反應(yīng)類型（反應(yīng)專一性）酶蛋白：決定底物類型（底物專一性）6.1

概述結(jié)構(gòu)活性中心

（活性部位）與底物結(jié)合的部位，決定了酶的專一性促進(jìn)底物發(fā)生化學(xué)變化的部位，決定了反應(yīng)的性質(zhì)結(jié)合部位和催化部位的總稱，具有一定空間結(jié)構(gòu)，能與底物結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的區(qū)域。結(jié)合部位催化部位6.1

概述酶的活性中心必需基團(tuán)：與酶活性有關(guān)的基團(tuán)活性中心內(nèi)必需基團(tuán)（結(jié)合和催化基團(tuán)）

活性中心外必需基團(tuán)6.1

概述酶活性中心示意圖6.1

概述AspHisSer胰凝乳蛋白酶的活性中心6.1

概述調(diào)控部位：有些酶分子中存在著一些部位可以與其他分子發(fā)生某種程度結(jié)合，從而引起酶分子空間構(gòu)象的變化，對酶起激活或抑制作用。6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)酶的反應(yīng)速度影響酶促反應(yīng)速度的因素研究酶促反應(yīng)速度及其影響因素的科學(xué)6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)酶的反應(yīng)速度酶反應(yīng)速度曲線

斜率＝濃度/時(shí)間單位時(shí)間、單位體積中底物的減少量或產(chǎn)物的增加量。（單位：濃度/單位時(shí)間）6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)影響酶促反應(yīng)速度的因素底物濃度對酶反應(yīng)速度的影響

酶濃度對酶反應(yīng)速度的影響pH對酶反應(yīng)速度的影響

溫度對酶反應(yīng)速度的影響

抑制劑對酶反應(yīng)速度的影響激活劑對酶反應(yīng)速度的影響酶促反應(yīng)速度指初速度;在研究某一因素時(shí)，應(yīng)保持體系中其它因素不變。6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)底物濃度對酶反應(yīng)速度的影響

酶都有飽和現(xiàn)象6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)米氏方程的推導(dǎo)針對一個(gè)底物結(jié)合位點(diǎn)的單底物酶催化反應(yīng)。自學(xué)：米氏方程的推導(dǎo)基于三個(gè)假設(shè)：（1)穩(wěn)態(tài)，快速建立平衡（2)測定反應(yīng)的初速度（3)[S]>>[E]米氏常數(shù)

Km=(k2+k3)/k16.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)米氏常數(shù)Km的意義Km值等于酶反應(yīng)速度為最大速度一半時(shí)的底物濃度

（單位：mol/L）。6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)Km值是酶的特征性常數(shù)。Km值可用來表示酶對底物的親和力。Km值可以用來判斷酶的最適底物。Km值可以確定一條代謝途徑中的限速步驟。Km值可以表示整個(gè)反應(yīng)的化學(xué)平衡常數(shù)。只與酶的性質(zhì)、底物和酶促反應(yīng)條件有關(guān)，與酶濃度無關(guān)Km越小，1/Km則大，表明與底物親和力大Km=(k2+k3)/k16.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)Km和vmax的求法

雙倒數(shù)作圖法（LineweaverBurk方程）自學(xué)雙倒數(shù)作圖法優(yōu)點(diǎn)：減少誤差缺點(diǎn)：不利于確定直線的位置6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)Eadie-Hofstee作圖法（Eadie-Hofstee方程）Eadie-Hofstee作圖法優(yōu)點(diǎn)：點(diǎn)分布較均勻，直線位置容易確定缺點(diǎn)：數(shù)據(jù)處理較麻煩6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)酶濃度對酶反應(yīng)速度的影響

當(dāng)?shù)孜餄舛却蟠蟪^酶濃度時(shí)，反應(yīng)速率隨酶濃度的增加而增加，兩者成正比關(guān)系。酶活力測定的基礎(chǔ)之一，在分離純化時(shí)常被應(yīng)用。6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)pH對酶反應(yīng)速度的影響

胃蛋白酶葡萄糖-6-磷酸酶影響酶、底物和輔酶的解離；影響酶分子的構(gòu)象。最適pH：使酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大值或酶表現(xiàn)最大活力時(shí)的pH值。不是酶的特征性常數(shù)。6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)溫度對酶反應(yīng)速度的影響

在一定范圍內(nèi)溫度升高，反應(yīng)速度加快；隨著溫度升高，酶蛋白變性。最適溫度：在一定范圍內(nèi)，酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度。不是酶的特征性常數(shù)。6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對酶反應(yīng)速度的影響

與酶活性中心的必需基團(tuán)共價(jià)結(jié)合，引起酶活性喪失。如：有機(jī)磷化合物與酶蛋白非共價(jià)結(jié)合，引起酶活性喪失，具有可逆性。酶的抑制劑：能降低酶的活性，從而降低酶催化反應(yīng)速度，但又不引起酶蛋白變性的物質(zhì)，用I表示。不可逆抑制劑（結(jié)合緊密）可逆抑制劑（結(jié)合松弛）非專一性專一性競爭性非競爭性反競爭性6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)I和S的結(jié)構(gòu)相似，兩者競爭同一酶的活性中心可通過增加底物濃度來消除競爭性抑制Km增大，Vmax不變競爭性抑制底物產(chǎn)物競爭性抑制劑（琥珀酸）（延胡索酸）（丙二酸）琥珀酸脫氫酶6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)非競爭性抑制I和S的結(jié)構(gòu)不相似，I與酶活性中心以外的部位結(jié)合Km不變，Vmax降低6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)反競爭性抑制I與ES結(jié)合Km降低，Vmax降低6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)三種抑制劑的對比

類型KmVm競爭性的抑制劑↑不變非競爭性抑制劑不變↓反競爭性抑制劑↓↓6.2

酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)激活劑對酶反應(yīng)速度的影響

能使酶活性提高，加速酶促反應(yīng)的物質(zhì)稱為激活劑，其中大部分是離子或簡單的有機(jī)化合物。

解除抑制劑的抑制作用輔酶或輔基是構(gòu)成某些有活性全酶的必要成分無機(jī)離子激活許多酶類6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)酶催化的高效性機(jī)制酶催化的專一性機(jī)制藥物分子設(shè)計(jì)6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)酶催化的高效性機(jī)制中間復(fù)合物學(xué)說

6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)酶和底物具體作用的方式

酶和底物的結(jié)合作用6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)酸堿催化通過瞬時(shí)向反應(yīng)物提供質(zhì)子或從反應(yīng)物接受質(zhì)子以穩(wěn)定過渡態(tài)、加速反應(yīng)的一種催化機(jī)制。胰凝乳蛋白酶通過酸堿催化斷裂肽鍵氨基酸殘基酸式（質(zhì)子供體）堿式（質(zhì)子受體）6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)共價(jià)催化通過形成不穩(wěn)定共價(jià)中間配合物，即而迅速變成轉(zhuǎn)變態(tài)而使反應(yīng)活化能大大降低。Ser的羥基、Cys的巰基與His的咪唑基參與共價(jià)催化。第一步（快）：RX+E→RE+X－

（底物）（親核基團(tuán)）

第二步（快）：RE＋H2O→ROH＋E＋X－

（最終受體）6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)酶催化的專一性機(jī)制鎖鑰學(xué)說

酶的活性中心的構(gòu)象與底物的結(jié)構(gòu)（外形）正好互補(bǔ)，就像鎖和鑰匙一樣是剛性匹配的。

6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)誘導(dǎo)契合學(xué)說

酶在發(fā)揮作用前必須與底物密切結(jié)合酶和底物相互接近時(shí)，其結(jié)構(gòu)相互誘導(dǎo)、相互變形和相互適應(yīng)，進(jìn)而相互結(jié)合酶的構(gòu)象改變有利于與底物結(jié)合，底物在酶的誘導(dǎo)下發(fā)生變形，處于不穩(wěn)定狀態(tài)（過渡態(tài)），易受催化基團(tuán)的攻擊過渡態(tài)的底物與酶的活性中心結(jié)構(gòu)最吻合

6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)藥物分子設(shè)計(jì)磺胺類藥物及磺胺增效劑

酶的結(jié)構(gòu)及其作用機(jī)制是設(shè)計(jì)生物活性分子的基礎(chǔ)顯效結(jié)構(gòu)：對氨基苯磺酰胺與對氨基苯甲酸（PABA）產(chǎn)生競爭性拮抗磺胺類藥物的發(fā)現(xiàn)和發(fā)展，開辟了一條從代謝拮抗來尋找新藥的途徑，對藥物化學(xué)的發(fā)展及新藥的研究起了重要的作用。6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)競爭酶的活性中心磺胺增效劑：甲氧芐胺嘧啶通過干擾細(xì)菌葉酸代謝而抑制細(xì)菌的生長繁殖6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)人體可從食物獲取FH2，而微生物不能從外界環(huán)境獲得，故磺胺類藥物對人體無害。凡需自身合成FH2的微生物，均易受到磺胺藥的抑制。6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)具有抗b-內(nèi)酰胺水解酶的青霉素

青霉素的結(jié)構(gòu)青霉素的作用機(jī)制由于青霉素在結(jié)構(gòu)上與轉(zhuǎn)肽酶的天然底物肽聚糖的反應(yīng)部位相似，所以能競爭性地與轉(zhuǎn)肽酶活性中心上的絲氨酸殘基形成共價(jià)鍵，從而抑制了細(xì)胞壁的合成。青霉素是轉(zhuǎn)肽酶的不可逆抑制劑。6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)青霉素對轉(zhuǎn)肽酶的抑制作用6.3

酶的作用機(jī)制和藥物分子設(shè)計(jì)新問題解決辦法長期使用青霉素，將誘導(dǎo)生物體（包括細(xì)菌等微生物）產(chǎn)生青霉素酶（penicillinase），能夠水解b-內(nèi)酰胺環(huán)，從而導(dǎo)致青霉素（G型和V型）失效。青霉素酶研制耐酶青霉素開發(fā)b-內(nèi)酰胺酶抑制劑Oxacillin棒酸6.4

幾種主要形式的酶酶原同工酶固定化酶調(diào)節(jié)酶人工酶多酶復(fù)合體6.4

幾種主要形式的酶酶原在細(xì)胞內(nèi)合成或初分泌時(shí)處于無活性狀態(tài)的酶的前身物。

或胰蛋白酶酶原的激活：在一定條件下，酶原轉(zhuǎn)化成有活性的酶的過程。生理意義：避免細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的蛋白酶對細(xì)胞進(jìn)行自身消化。使酶在特定的部位和環(huán)境中發(fā)揮作用，保證體內(nèi)代謝的正常進(jìn)行。6.4

幾種主要形式的酶同工酶指催化的化學(xué)反應(yīng)相同，酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶。

同工酶結(jié)構(gòu)主要表現(xiàn)在非活性中心部分不同或所含亞基不同，而與酶活性有關(guān)的部分結(jié)構(gòu)相同。乳酸脫氫酶是研究最多最早的同工酶，存在于人和動(dòng)物機(jī)體中。6.4

幾種主要形式的酶LDH1LDH2LDH3LDH5LDH4骨骼肌型心肌型乳酸脫氫酶（LDH）：是由三種亞基（H、M和C）組成的四聚體，有六種同工酶：LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)和LDHx(C4)。

每種組織LDH同工酶譜具有特定的相對百分率，若某一組織發(fā)生病變，必將釋放其中LDH同工酶到血液中，從而導(dǎo)致血清酶譜的變化，這些變化常常是一特定疾病或該疾病特定階段的特征。6.4

幾種主要形式的酶心臟疾?。篖DH1及LDH2上升，LDH3及LDH4下降。急性肝炎：LDH5明顯升高，隨病情好轉(zhuǎn)而逐漸恢復(fù)正常。慢性肝炎：一般處于正常范圍，部分病例可見LDH5有所升高。肝硬變：LDH5，LDH1和LDH3均升高。原發(fā)性肝癌：LDH3，LDH4，LDH5均上升，但LDH5＞LDH4轉(zhuǎn)移性肝癌：LDH3，LDH4，LDH5均上升，但LDH4＞LDH5血清LDH同工酶酶譜的變化規(guī)律6.4

幾種主要形式的酶固定化酶優(yōu)點(diǎn)一定的機(jī)械強(qiáng)度可充分洗滌，不帶進(jìn)雜質(zhì)易于分離和反復(fù)使用穩(wěn)定性提高包埋法吸附法共價(jià)偶聯(lián)法交聯(lián)法又叫不溶酶，將水溶性酶用物理或化學(xué)方法，連接到水不支持物上，而不破壞活性的一類酶。6.4

幾種主要形式的酶調(diào)節(jié)酶酶分子上的某些氨基酸基團(tuán)在另一種酶的催化下，共價(jià)結(jié)合或脫去一定化學(xué)基團(tuán)，從而調(diào)節(jié)酶活性。如：磷酸化與去磷酸化。共價(jià)修飾酶

PP磷酸化酶b激酶

磷酸化酶b

（二聚體）

無活性磷酸化酶a

（二聚體）

高活性磷酸化酶a磷酸酶

6.4

幾種主要形式的酶調(diào)節(jié)酶效應(yīng)物與酶分子上的調(diào)節(jié)部位以非共價(jià)鍵結(jié)合，從而調(diào)節(jié)酶活性。變構(gòu)酶

活性中心變構(gòu)中心

效應(yīng)物

變構(gòu)調(diào)節(jié)：有些酶除了活性中心外，還有一個(gè)或幾個(gè)部位，當(dāng)特異性分子非共價(jià)地結(jié)合到這些部位時(shí)，可改變酶的構(gòu)象，進(jìn)而改變酶的活性。組成：多亞基酶，含催化部位和調(diào)節(jié)部位效應(yīng)物：特異性分子（變構(gòu)激活劑和變構(gòu)抑制劑）6.4

幾種主要形式的酶變構(gòu)酶的底物活性曲線變構(gòu)激活劑變構(gòu)抑制劑協(xié)同效應(yīng)：一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后，通過改變相鄰亞基的構(gòu)象而使其對配體的親和力發(fā)生改變。

正協(xié)同效應(yīng)

負(fù)協(xié)同效應(yīng)6.4

幾種主要形式的酶人工酶抗體酶

本質(zhì)是免疫球蛋白

因人工方法使其獲得酶的屬性，所以又稱為催化性抗體抗體酶是用人工合成的半抗原（酶與底物結(jié)合的中間過渡態(tài)類似物）免疫動(dòng)物，使該動(dòng)物產(chǎn)生抗體，這種抗體即具有酶的催化功能和抗體專一性。6.4

幾種主要形式的酶模擬酶

催化側(cè)鏈連接到環(huán)糊精上，可模擬胰凝乳蛋白酶環(huán)糊精分子結(jié)構(gòu)催化側(cè)鏈又稱人工合成酶，是一類利用有機(jī)化學(xué)方法合成的比天然酶簡單的非蛋白質(zhì)分子。

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)底物結(jié)合部位催化部位模擬工作的層次合成類似活性的簡單絡(luò)合物酶活性中心的模擬整體模擬6.4

幾種主要形式的酶多酶復(fù)合體常包括三個(gè)或三個(gè)以上的酶，組成一個(gè)有一定構(gòu)型的復(fù)合體。復(fù)合體中第一個(gè)酶催化的產(chǎn)物，直接由鄰近下一個(gè)酶催化，第二個(gè)酶催化的產(chǎn)物又為復(fù)合體第三酶的底物，如此形成一條結(jié)構(gòu)緊密的“流水生產(chǎn)線”。

如：丙酮酸脫氫酶系，a-酮戊二酸脫氫酶系等。E2E3E2E3E1丙酮酸脫氫酶系6.5

蛋白質(zhì)技術(shù)和酶技術(shù)蛋白質(zhì)和酶的分離和純化蛋白質(zhì)和酶的檢測蛋白質(zhì)和酶的分離和純化6.5

蛋白質(zhì)技術(shù)和酶技術(shù)一般過程層析法電泳法超離心法超濾│←前處理→│←粗分級→│←細(xì)分級→│生物組織

→無細(xì)胞提取液

→粗產(chǎn)品

→→結(jié)晶材料選擇與處理細(xì)胞破碎（機(jī)械破碎、溶脹和自溶、酶解、化學(xué)處理）鹽析（硫酸銨鹽析）等點(diǎn)電沉淀有機(jī)溶劑沉淀透析控制適當(dāng)pH

控制溫度

注意提取過程中的溶液環(huán)境

防止提純過程中丟失一些輔助因子或亞基6.5

蛋白質(zhì)技術(shù)和酶技術(shù)基本方法最常用方法利用溶解度差別等電點(diǎn)時(shí)溶解度最小保持天然構(gòu)象（活性）能再溶解爭奪蛋白質(zhì)分子的水膜層中和蛋白質(zhì)表面的電荷如：(NH4)2SO4改變介質(zhì)的介電常數(shù)有機(jī)溶劑的加入使水溶液的介電常數(shù)降低根據(jù)蛋白質(zhì)和酶在溶液中的不同性質(zhì)而確立，包括溶解度、電荷、相對分子質(zhì)量大小，特異親和力等。等電點(diǎn)沉淀

鹽析有機(jī)溶劑分級沉淀6.5

蛋白質(zhì)技術(shù)和酶技術(shù)根據(jù)分子大小不同利用蛋白質(zhì)分子不能通過半透膜的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)和其他小分子物質(zhì)（如無機(jī)鹽、單糖、水）等分開。每種蛋白質(zhì)顆粒降到與自身密度相近的密度梯度時(shí)停止不前，各種蛋白質(zhì)被分離成各自獨(dú)立的區(qū)帶。比凝膠“網(wǎng)眼”大的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入“網(wǎng)眼”，而被排阻在凝膠顆粒之外，比“網(wǎng)眼”小的分子則進(jìn)入凝膠顆粒的內(nèi)部。如：葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠透析和超濾

密度梯度離心（區(qū)帶離心）凝膠過濾層析（分子篩層析）6.5

蛋白質(zhì)技術(shù)和酶技術(shù)根據(jù)電荷不同在