糧油檢驗 糧食中游離氨基酸含量的測定方法編制說明

1《糧油檢驗糧食中游離氨基酸含量的測定方法》編制說明劃的通知》（質(zhì)檢辦便函〔2012〕5號）要求，由國家糧食和物資儲備局科學(xué)研究由于我國收購的谷物、大豆類型及品種多而復(fù)善粒、裂紋及破碎粒，儲藏過程存在水分遷移現(xiàn)象（如冬夏季節(jié)分別在小麥倉芯頂及加工品游離α-氨基酸含量進行分析，以期對我國糧食營養(yǎng)品質(zhì)陜西省糧油科學(xué)研究院、中儲糧成都儲藏研究院有限公司、國貿(mào)食品科學(xué)研究2起草階段：為了更好的完成本標(biāo)準(zhǔn)任務(wù)，查閱了國內(nèi)外相關(guān)資料。起草組先排度和時間、生成物的穩(wěn)定性，還進行了檢出限分析。然后測定不同含水率的原糧及加工品、萌動小麥和糙米中游離α-氨基酸含量。在本方法對比驗證中，比較了小麥、玉米、大米、糙米及大豆原糧中游離氨基酸含量之間的差異?；谝陨瞎ぷ?，查未通過，要求補充本方法測定的糧食中游離氨基酸含量與氨基酸分析儀測試結(jié)果形成了新的《送審稿》。糧油標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會要求行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)驗家，起草組考慮到驗證費用問題，邀請國家糧食和物資儲備局糧油質(zhì)量檢驗測試中心、陜西省糧油科學(xué)研究院、國家糧油標(biāo)準(zhǔn)研究驗證測試中心（成都儲藏研究所質(zhì)檢中心）、國貿(mào)食品科學(xué)研究院有限公司（國家副食品質(zhì)量檢測中心）、國家糧食局西安油脂食品及飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心、山東省魯糧檢測科技有限公司作為本標(biāo)3李興軍負責(zé)該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)建議書的起草和試驗，姜平負責(zé)試驗，范維燕負責(zé)氨基酸分析儀驗證，魏征、張東數(shù)據(jù)處理，頡宇參與試驗及數(shù)據(jù)處理，李秀娟參與文本國家糧食和物資儲備局糧油質(zhì)量檢驗測試中心王佳雅、王麗、李樹朋；陜西省糧油科學(xué)研究院龔珊、陸少蘭；國家糧油標(biāo)準(zhǔn)研究驗證測試中心（成都儲藏研究所質(zhì)檢中心）胡建蓉、熊升偉；國貿(mào)食品科學(xué)研究院有限公司（國家副食品質(zhì)量檢測山東省魯糧檢測科技有限公司王菲菲、張金娜對指定樣品進行驗證，并對標(biāo)準(zhǔn)文本4二酮茚-二酮茚胺的取代鹽(雙-1,3-二酮茚)此反應(yīng)的特點是：茚三酮是使氨基酸和多肽顯色的重肽鏈越大靈敏度也越來越差，故不宜作定量測定多肽和蛋白12345600濃度(μmol/mL）56），氨基酸態(tài)氮就是以氨基酸形式存在的氮，它的含量與40%。我們測定的稻米中水溶性蛋白質(zhì)含量5～6mg/gfw,新收獲小麥中水溶性蛋這些谷物水溶性蛋白質(zhì)在弱酸的醋酸緩沖液中不發(fā)生水解。況且，糧食粗粉水提取質(zhì)中的水溶性蛋白質(zhì)不參與茚三酮反應(yīng)，主要原因是其分子量較大，如稻谷清蛋白表4水提取液蛋白酶解后游離氨基酸含量(μg氮/ml）外切活性的蛋白酶后，水溶性清蛋白被水解產(chǎn)生氨基酸，溶液中總氨基酸含量顯著ODOD75℃80℃85℃90℃95℃100℃溫度7BD570 D570D570D570D5700反應(yīng)時間(6放置時間（h）89亮氨酸回收率（%）超出了吸光度與濃度之間的線性范圍，所以回收率不是隨亮氨酸增加而呈現(xiàn)線性增游離氨基酸含量(μg氨基態(tài)氮/g干重）--------AspAlaMet3克粉狀樣品加少量娃哈哈純凈水和石英砂研磨，然后轉(zhuǎn)移到50mL離心管，定容為35mL，在4000rpm低溫離心10分鐘，取存。日立氨基酸分析儀L8900進樣量為20μL。在同樣條件下，精米粉中沒有檢測到水溶性蘇氨酸、組氨酸和精氨酸，而糙米粉和小麥粉中均檢測到水溶性的16種氨基123據(jù)的最小極差百分率對精米粉、糙米粉、小麥粉分別是-2.9%、10.2%、0.8%。本方并進行水合茚三酮反應(yīng)后，在紫外可見分光光度計上比色法確定含量。而如果采用質(zhì)量的樣品，加娃哈哈純凈水研磨提取水溶性氨基酸后在凍干機進行濃縮，然后才檢出限（mg/kg，以氨基氮計）3.152.543.813.64注：y是吸光值，x是亮氨酸濃度(μmol/mL）。驗證單位平行值1平行值2平行值3平行值4平均值標(biāo)準(zhǔn)差RSD/%1192.76194.26201.24191.26194.884.412.262184.69184.32185.31183.92184.560.590.323214.27230.96222.6211.805.304260.89260.18254.30255.01257.593.425218.31219.21217.95220.72219.050.566194.87186.56190.725.883.08驗證單位平行值1平行值2平行值3平行值4平均值標(biāo)準(zhǔn)差RSD/%140.6441.4042.5744.0942.183.56252.2452.0555.4855.2853.763.48325.0220.0822.553.4915.49425.6425.9926.9326.5926.290.582.21522.4123.0021.6122.2922.330.572.55639.2934.4736.883.419.24驗證單位平行值1平行值2平行值3平行值4平均值標(biāo)準(zhǔn)差RSD1212.92195.86203.86212.92206.398.223.982195.75196.60192.33190.42193.782.903185.61174.40180.017.934.404217.15218.54220.89221.73219.582.110.965183.98182.19183.34182.53183.010.810.446223.06216.29219.684.792.18樣品試驗人平行值1平行值2平行值3平均值標(biāo)準(zhǔn)差RSD/%小麥粉1223.49221.24208.45217.738.113.732230.45213.4218.62220.828.743.963220.41226.96218.5221.964.442.00大米粉128.4931.0225.5428.352.749.67222.5221.8920.0221.486.05220.3223.4923.3122.377.96玉米粉1176.52178.78187.17180.825.613.102187.55191.73179.12186.136.423.453187.03179.33177.83181.404.942.72A（小麥粉）99999995%。糧食中游離氨基酸含量的重復(fù)性限（r）見表10。在再現(xiàn)性條件下獲得的兩個獨立測試結(jié)果的絕對差值小于等于再現(xiàn)性限（R）的情況應(yīng)大于95%。多酚含量的再現(xiàn)性限（R）參見表10。國外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的對比情況，或與測試的國外樣品于糧食食品中16種氨基酸成分的含量測定。測定方法原理是，谷物和油料籽粒中的氨基酸，按照一定次序結(jié)合成不同類型的肽和蛋白質(zhì)，在測定前用一定濃度的鹽酸氨基酸各組分在氨基酸分析儀上被凝膠柱分離后，氨基酸的氨基可與水合茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍紫色化合物，其顏色的深淺與游離氨基酸的含量成正比。此方法測定的是糧粒中蛋白質(zhì)及其完全水解產(chǎn)物氨基酸的含量。如果用于游離氨基酸含量檢測，在糧粒組織中其含量很低的情況下，需要凍干濃縮，然后測定。它用于糧粒中游離組成植物種子蛋白質(zhì)的氨基酸有20種，GB5009.124-2016標(biāo)準(zhǔn)方法中只顯示16種氨基酸。而氨基酸自動分析儀如日立氨基酸分析儀L8800和L8900均能夠在丙氨酸種子儲藏蛋白質(zhì)在110℃條件下經(jīng)過6mol/L最低檢出限（一般為10pmol）。就小麥，高分子量醇蛋白占總儲藏蛋白醇蛋白占總儲藏蛋白10～20%，其中Gln為40～45%。即小麥儲藏蛋白中Gln占到30~40%，如果采用氨基酸自動分析儀進行分析，樣品前處理中Gln產(chǎn)生大量的氯化銨分子。國內(nèi)外缺乏對糧食及加工品中游離氨基酸含量快速測定的標(biāo)準(zhǔn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)發(fā)法類似，不同點是它采用pH8.0的磷酸鹽緩沖液，本方法采用pH5.4乙酸-乙酸鈉緩沖液；它的茚三酮反應(yīng)反應(yīng)條件是沸水浴15min，本方法采用本方法的優(yōu)勢是快速準(zhǔn)確的揭示糧食及加工品中游離氨基酸含量，尤其是用于芽麥、發(fā)芽糙米和稻谷的檢測，儀器成本低。如果在全自動氨基酸分析儀和高壓液沸點、實驗室大氣壓和海拔高度、樣品含水量（基于15%）進行了規(guī)定。該方法通越低。